Neuroscience
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Использование In Vivo одноволоконной записи и Intact Dorsal Root Ganglion с прикрепленным седалиальным нервом для изучения механизма отказа от проводимости
Chapters
Summary August 27th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Запись с одним волокном является эффективным электрофизиологическим методом, применимым к центральной и периферической нервной системе. Наряду с подготовкой нетронутой DRG с прикрепленным седаличным нерва, исследуется механизм отказа проводимости. Оба протокола улучшают понимание отношений периферической нервной системы с болью.
Transcript
Одноволокнистая запись играет важную роль в записи деятельности нервных волокон. Особенно деятельности передачи периферических ощущений от восприимчивых полей к нейронам в спинном корневом ганглии. В волновой записи волокна, обеспечивает продолжительность времени с возможностью записи ответов на природные раздражители, а затем нарушение межклеточной среды.
В одноволокнистой записи требуется нейтронная автоматическая хорошая для ситуации. Терапевт называет требованием для подготовки комплексных DRG-тестов седалищный нерв интегрирован. Результат демо-ситуации показывает почти все детали нервов в хорошей, физической стадии наклейки.
И в-третьих, вся подготовка DRG, как интегрированы. Чтобы начать эту процедуру, подготовить и дезинфицировать все хирургические инструменты до операции. Затем приготовьте от одного до двух литров внеклеточного раствора Ringer и храните при четырех градусах Цельсия до его использования.
Чтобы разоблачить седалищный нервный ствол для записи, во-первых, разрезать кожу и мышцы обезболивающей крысы на спинной части бедра. Затем выполните тупое вскрытие вдоль бедренной бицепса. Тщательно изолируйте ствол седалищного нерва с помощью офтальмологических ножниц и стеклянной иголки разделения, и держите ткань влажной с помощью раствора Ringer.
Затем зафиксите животное на домашнем металлическом обруче, пришив кожу в слот вокруг него. Потяните кожу немного вверх, чтобы установить жидкость ванны. Разоблачить один сантиметр седалищного нерва ствола на проксимальной стороне.
Поместите небольшую коричневую платформу под нервный ствол для усиления контраста, чтобы четко наблюдать за тонкой нервной туловищем. Впоследствии нанесите теплый жидкий парафин на верхнюю часть ствола нерва, чтобы предотвратить высыхание поверхности волокна. Удалите жидкость, если есть экссудирование вокруг нервного ствола.
Для записи выберите платиновую нить в качестве записывающего электрода. Ешьте и создайте небольшой крючок в самом конце. После этого прикрепите электрод к микроманипулятору.
В ванне поместите эталонный электрод рядом с подкожной тканью. Разделите спинномозговой дуры и Пиа матер и получить седалищного нерва. Под стерео-микроскопом при увеличении на 25% подберите тонкое фасцикл и приостановьте околоксимальный конец аксона на крючке записывающего электрода.
Определите восприимчивое поле одного, неконцептивного c волокна с помощью механического симулиса и теплового стимула. Если обжига нервного волокна реагирует на механические стимулы и горячую воду, то рассмотреть его как полимото, неконцептивные c волокна. Затем вставьте два электрода стимула иглы с интервалом в два миллиметра в кожу идентификационного поля для доставки электрических стимулов.
Отображение волновой формы потенциала действия на осциллоскопе, и использовать компьютер D-борт с скоростью выборки сигнала 20 килогерц. Затем завестите всплески с помощью программного обеспечения для сбора данных и проанализируйте их позже с помощью профессионального программного обеспечения. Для измерения отказа проводимости, доставить повторяющиеся стимулы электрода в различных частотах с волокна в течение 60 секунд.
Разрешить 10-минутный интервал для волокна, чтобы расслабиться между стимулами. Затем вычислите соотношение количества сбоев к количеству поставленных повторяющихся импульсов стимула и умножьте на 100%, чтобы получить степень отказа проводимости. Чтобы разоблачить спинной корневой ганглий, сначала разрежьте кожу от средней линии спины в сегменте l4 до l5.
Далее, удалить мышцы позвоночника процесс позвоночного бора и поперечный процесс с помощью костного rongeur, и подвергать спинного мозга NDRG тела. Обложка подвергаются спинного мозга, NDRG, с хлопком пропитанной нормальным Ringer внеклеточного решения для поддержания нервной активности. Остановить кровотечение и удалить кровь по мере необходимости.
Впоследствии, используя офтальмологические ножницы, удалить l4 к s1 костной структуры выше позвонков foramen для того, чтобы разоблачить DRG и подключен спинного нерва. Сделайте разрез на коже, чтобы разоблачить седалищный нерв в середине бедра. Отделить и отключить седалищный нерв от дистального конца нерва, где он идет внутри мышцы.
И ligate нервный ствол с хирургической линии в конце нерва до резки. Затем отделите седалищный нерв от основной соединительной ткани, подняв точку перевязки нерва. Удалить для дуры из спинного мозга, и отделить DRG от основной соединительной ткани, пока не достигнет соседней части седалищного нерва.
Таким образом, изолировать всю подготовку DRG с прилагается седалищного нерва. Чтобы очистить поверхность DRG, при 4x увеличении, тщательно удалите спинномозговой dura на поверхности l4 до l6 DRG с помощью пинцета. Поместите DRG с прикрепленным седалищным нервом в стеклянную трубку, содержащую один миллилитр смешанных ферментов.
Переваренный в водяной бане 37 градусов по Цельсию в течение 15 минут. Через 15 минут поднимите конец хирургической линии и переместите препарат в блюдо, наполненное экстраклеточным раствором Ringer для промывки фермента. Затем перенесите переваренный DRG в контейнер, наполненный кислородом внеклеточного раствора Ringer для записи.
Для выполнения записи подготовьтесь к внутриклеточному раствору и храните его при нулевом градусе Цельсия до его использования. Используя ломтик якоря, стабилизировать ганглиев и подключить нервный конец всасывания стимулирующих электродов. При увеличении в 40 раз визуализируете и выберите drG-нейрон с целью эмерсиона воды.
Сложите электрод и заполните его внутриклеточным раствором. Прикрепите электрод на держатель и нанесите положительное давление в трубе с окончательным сопротивлением от четырех до семи мегаохм. Затем довнесите электрод до поверхности клетки.
Затем нанесите отрицательное давление на трубу, чтобы сформировать уплотнение. Как только уплотнение gigaohm достигано, установите потенциал мембраны на около минус 60 милливольтах и установите весь режим записи клетки. Впоследствии, доставить повторяющиеся раздражители от 5 до 50 герц седалищного нерва через всасывающий электрод для проверки на проведение отказа.
Измерьте амплитуду AHP от базового до пикового и 80%AHP продолжительность. Эта цифра показывает оригинальные последовательные записи одного c5 повторного стрельбы от крыс в ответ на 10 герц электрической стимуляции. Каждый двадцатый развертки отображается и отображается сверху вниз.
Вставка показывает репрезентативный потенциал действия. Вот записи одного c волокон из CFA вводили крыс в ответ на ту же стимуляцию, как предыдущая панель. На этом рисунке показаны непрерывные записи серии огневых реакций на пять герц стимуляции в условиях контроля, или администрирование различной концентрации ЗД7288 в малом диаметре DRG нейрона от CFA рейтингу крыс.
В вялах показано расширенные следы для указанных периодов записи. Темные пятна представляют собой сбои шипов. AHP показал больший рост склона в управлении.
В то время как меньший восходящий склон наблюдался после 125 микромоляров при применении ЗД7288. Когда время одной записи пятерки, я думаю, что важно, чтобы сократить волокна будет поддерживать животных хорошо любое условие безопасности. И микроокнония вокруг нейтрона.
Сочетание одноволокнистой записи и применения нетронутой DRG прилагается с седалищным нервом, улучшило наше понимание периферической нервной системы, относящихся к боли.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
