Medicine
This content is Open Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
En ny beste praksis for validering av halen blodåre injeksjoner i rotte med nær-infrarød-merket agenter
Summary April 19th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Her presenterer vi en metode for å validere hale blodåre injeksjoner i rotter ved å benytte nær infrarød fluorescens bildebehandling data fra fargestoffer innlemmet i agenter eller biologiske sonder. Halen er fotografert før og etter injeksjon, fluorescerende signalet er kvantifisert, og en vurdering av injeksjon kvaliteten er laget.
Transcript
Denne metoden for å validere og vurdere injeksjonsnøyaktigheten gir et viktig kvalitetskontrolltrinn og et avgjørende stadium i dyrestudier for å legge til rette for konsekvente og reproduserbare haleveneinjeksjoner. Vurdering av injeksjonen via fluorescensavbildning umiddelbart etter at den er utført, gir fordelen av å avgjøre om agenten din har kommet inn i blodsirkulasjonen i den tiltenkte mengden. Hale vene injeksjon er en hands-on manipulasjon som drar nytte av visuell demonstrasjon og som kan forbedres ved å observere clearance av injisert agent fra injeksjonsstedet.
Demonstrere prosedyren med Muzamil Saleem vil være Brooke Deal, en ph.d.-student fra laboratoriet mitt. Før haleveneinjeksjon, plasser et bedøvet dyr sideveis i en nær-infrarød fluorescens bilde av med injeksjonsstedet på halen utsatt for å etablere en fluorescens baseline. Etter at bildet er ervervet, overfører du dyret til kirurgisk benk i utsatt stilling og utvider halevaskulaturen ved å senke det ned i varmt vann.
Etter omtrent ett minutt, orienter halen slik at sidesiden er i sikte. Lateral halevenen skal vises mørk i fargen. Steriliser venens lengde med alkoholputer.
Plasser halen sidelengs og sett inn en 25 til 27-gauge nål skrå side opp og parallelt med den løftede halen inn i den valgte laterale halevenen som starter ved den distale halevirvlene i halen og beveger seg mer proksimal hvis riktig nåleplassering mislykkes etter behov. I en vellykket nål innsetting, blod flashback bør observeres i kanten av nålen. Hvis ingen flashback er tydelig, sakte flytte nålespissen uten å fjerne den fra halen for å finne vene innsetting.
Når nålen er riktig plassert, setter du en sprøyte med det injiserbare materialet inn i kanylens kant og trykker stempelet inn i venen. Alternativt kan et kateter med blodstrømindikator brukes. Et raskt tilbakeblikk i indikatorsegmentet på kateteret vil bli observert etter riktig plassering.
Lite ryggtrykk kan deretter brukes til å trekke blod inn i sprøyten for å bekrefte riktig plassering i fartøyet før injeksjon. Igjen, ingen motstand vil bli følt. Når alt materialet er levert, fjern nålen og legg press med en steril gasbind i minst ett minutt for å sikre koagulering.
Merk injeksjonsstedet med en penn for å sikre at injeksjonsstedet vil være synlig på den hvite lyskanalen til det oppkjøpte bildet. For å vurdere fluorescenssignalet etter injeksjonen på injeksjonsstedet, returner dyret til det nær-infrarøde bildebehandlingsstadiet og orienter dyret på sidesiden for å eksponere injeksjonsstedet på sidehalen for avbildning som vist. For å analysere baseline og post-injeksjon injeksjon nettstedet fluorescens, områder av interesse kan trekkes i nær-infrarød imager programvare på halen nær injeksjonsstedet før og rundt området av fluorescens etter halen vene injeksjon.
Vellykket leverte injeksjoner vil demonstrere nesten like lave nivåer av fluorescerende signal før og etter injeksjonen. Bilder der fluorescensen er synlig gjennom hele halens lengde, er ikke akseptable og bør fjernes fra analysen. Eventuelle atferds-, kirurgiske eller ex vivo molekylære teknikker kan utføres som normalt etter denne prosedyren.
Denne teknikken gir kvalitetskontroll for en hale vene injeksjon, avslører rask klaring av venøs blodstrøm av riktig injisert agent, eller pooling på injeksjonsstedet hvis venen er savnet. Reagensen som brukes i denne metoden er ikke farlig, men de nødvendige forholdsregler bør tas hvis fluorescensbasert middel er inkorporert med et farlig materiale.
Please enter your institutional email to check if you have access to this content
has access to
BackLogin to access JoVE
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
To receive a free trial, please fill out the form below.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You
Thank You
Thank You
