Medicine
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Orthotopic rat nier transplantatie: een nieuwe en vereenvoudigde chirurgische aanpak
Chapters
Summary May 7th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Het doel van dit manuscript en protocol is uit te leggen en in detail de chirurgische ingreep van orthotopic nier transplantatie bij ratten te tonen. Deze methode is vereenvoudigd om de juiste doorbloeding van de donor nier te bereiken en de reperfusie tijd te verkorten met behulp van de veneuze en urineleider manchet anastomosis techniek.
Transcript
Ons laboratorium in Johns Hopkins is het uitvoeren van kleine dierlijke nier-en levertransplantatie met meer dan twee decennia ervaring. Dit specifieke protocol schetst kritieke stappen die nodig zijn voor het succesvol uitvoeren van orthotopische niertransplantatie bij ratten. Om de kans op succes te vergroten, bevat ons protocol drie onderscheidende stappen, perfusie van de donornier door de poortader en het gebruik van een manchetsysteem om de nieraderen en urineleiders te anastomose.
Het aantonen van deze procedure zal Dr.Le Qi, een afgestudeerde student in ons laboratorium. Om met deze procedure te beginnen, verdoven de donorrat zoals beschreven in het tekstprotocol. Plaats de rat in een supine positie en immobiliseer de ledematen met steriele plakband.
Breng een oogsmeermiddel aan en steriliseer het chirurgische veld zoals beschreven in het tekstprotocol. Voorafgaand aan de eerste incisie, zorg ervoor dat de rat voldoende is verdoofd door het controleren van de afwezigheid van de teen pinch terugtrekking reflex. Met behulp van een schaar, beginnen met het maken van een grote longitudinale middellijn huid en spier incisie van de symphysis pubis aan de xiphoid en voer de buikholte.
Bedek de darm met een vochtig steriel gaas en verleg het naar de rechterzijwaartse kant van de buik bloot de aorta, vena cava, en linker nier. Breng een milliliter voorverwarmde zoutoplossing aan met een 1 cc spuit om de darmen en de buikorganen vochtig en bij een normale temperatuur te houden. Breng een tweede vochtig gaas aan om de maag en milt craniale te bedekken en te mobiliseren op de nier.
Voeg vervolgens een klein vochtig gaas toe om de blootgestelde nier te bedekken. Gebruik microchirurgische ontleedkrachten om de linker nierslagader en ader te isoleren en te mobiliseren van het bindweefsel en elkaar. Nu isoleren van de linker nierader door cauterizing de linker gonadale ader en isoleren van de linker nierslagader door cauterizing de bijnierslagader.
Daarna, mobiliseren de aorta en vena cava superieur en inferieur aan de linker nierpedicula door het ontleden van het bindweefsel met ontleden tangen. Verdeel en mobiliseer de urineleider van het bindweefsel met behulp van ontledende tangen, gebruik vervolgens microschaar om een diagonale incisie te maken met een lengte van ongeveer twee centimeter gemeten van het nierbekken. Steek een polyamide manchet halverwege in de urineleider en zet de manchet vast door een knoop met 8-0 te plaatsen zijden hechting.
Mobiliseer de linker nier door het te scheiden van het perinephrische vet met behulp van ontleden tang of micro schaar. Laat de vetcapsule van de nier bevestigd en gebruik die plaats voor het hanteren van de nier. Nu 200 eenheden heparine met behulp van een spuit met een 27-meter naald door de penis ader.
Druk de plaats van injectie met een wattenstaafje gedurende ten minste een minuut om bloedingen te voorkomen. Identificeer de poortader en inferieure vena cava. Ontmasker de inferieure vena cava.
Bereid je voor om de nier te spoelen door het injecteren van 50 milliliter koude zoutoplossing gemengd met 500 eenheden heparine in de poortader met behulp van een 16-meter naald. Snijd voor het spoelen de inferieure vena cava op infrahepatisch niveau en snijd de poortader caudal op de plaats van het inbrengen van de naald om het bloed in staat te stellen de circulatie te verlaten. Begin met het spoelen van de nier door geleidelijk de zoutoplossing in te brengen.
Observeer een kleurverandering van de nier van donkerrood naar een uniforme grijze of bleke kleur. Na het spoelen, ligate de nierslagader en ader proximale aan de aorta en vena cava. Plaats de gespoelde nier in een petrischaaltje met koude zoutoplossing op ijs voordat u het lichaam van de donor uit het chirurgische veld verwijdert.
Zodra de nier is in koude zoutoplossing, fix en immobiliseren het handvat van de ader manchet en trek voorzichtig de nierader door de manchet. Bevestig vervolgens de nierader over de manchet door het plaatsen van drie knopen met behulp van 8-0 zijden hechting. Om de ontvangerprocedure te starten, herhaalt u de stappen van de donorprocedure tot de toediening van heparine.
Plaats vervolgens twee atraumatische microschipklemmen op de linker nierslagader en ader proximaal aan de aorta en vena cava. Ligate de ontvanger nierader proximaal aan de inlaat van de nier. Spoel de nierader met gehepariniseerde zoutoplossing om al het resterende bloed uit het vat te verwijderen.
Schuif de geligeerde nierader over de geboeide nierader die eerder in de donornier was geplaatst. Zet vervolgens de ader vast met een 8-0 zijden hechting. Houd dezelfde positieoriëntatie bij het vastzetten van de nierader over de manchet.
Ligate de nierslagader proximaal aan de inlaat van de ontvanger nier. Spoel het met gehepariniseerde zoutoplossing om overtollig bloed in het vat te verwijderen. Nu ligate de urineleider op het niveau van de onderste pool van de linker nier.
Mobiliseer de nier uit het perinephrische vet en verwijder de inheemse nier. Voer een end-to-end anastomose van de nierslagader uit met 8-10 onderbroken hechtingen met behulp van een 10-0 nylon hechting. Manoeuvreer de slagader met behulp van de adventitial laag.
Verwijder de vatklemmen om de re-perfusie van de nier opnieuw te starten. Begin met het verwijderen van de klem op de ader, gevolgd door de klem op de slagader. Gebruik een steriel wattenstaafje om lichte druk toe te voegen aan eventuele lekkende gebieden rond de anastomose regio.
Een paar minuten moeten voldoende zijn om een octrooianoastomose te bereiken. Observeer kort de nier om te beoordelen op voldoende perfusie. Onmiddellijk na re-perfusie moet de nier van kleur veranderen en geleidelijk aan zijn natuurlijke donkerrode kleur na een paar minuten herwinnen.
Zichtbare peristaltiek van de ureter en de urineproductie ter plaatse worden soms waargenomen. Werk af door de blootgestelde punt van de ureterale manchet in de ontvanger ureter te plaatsen en de ontvanger ureter vast te zetten met een 8-0 zijden das. Om de donor en ontvanger ureters in positie te houden, bind de uiteinden van elke urineleider kant aan elkaar.
Optioneel, nefreectiseren de rechter nier door het binden van de nier pedicle met een 3-0 zijden hechting. Verwijder alle gaasjes uit de buikholte en breng alle organen terug naar hun natuurlijke positie. Spuit dan een milliliter zout over de darmen om ze vochtig te houden.
Sluit de buik met behulp van een 4-0 absorbeerbare hechting op de rectus spier en een 4-0 zijden hechting om de huidlaag te sluiten op een onderbroken manier. Plaats het dier in een schone kooi met toegang tot ad libitum water en voedsel en zorgen voor herstel op een 37 graden Celsius verwarmingskussen. Observeer het herstel gedurende een tot twee uur voordat het dier terugkeert naar de diereninrichting.
Dieren met een syngeneic niertransplantatie bereikten een overleving op lange termijn zonder enige immunosuppressieve behandeling. Omgekeerd verwierpen dieren die een allogene niertransplantatie kregen zonder immunosuppressie hun transplantaat en bezweken ze aan nierfalen met een mediane overleving van acht dagen. Gemiddelde serum creatinine steeg bescheiden in de syngenetische groep, terwijl het steeg met 14-voudige in de allogene groep.
Bij explantatie liet de macroscopische weergave van de syngeneïsche nieralograaf geen afwijkingen zien. De nierkleur en de interne structuren bleven intact. Daarentegen, nieralografen van afgewezen dieren gepresenteerd rode hemorragische vlekken met de vernietiging van de interne structuren.
Hematoxylin en Eosin vlekken van syngeneic grafts getoond dunne glomerulaire capillaire lussen met normale nummers van endotheel en mesangial cellen. Afgewezen allografen vertoonden vernietigde glomerulaire structuren met tekenen van ontsteking en tubulitis. CD8 positieve kleuring werd uitgevoerd om T-cell gemedieerde afwijzing te bevestigen.
Terwijl syngeneic allografen zeer weinig CD8 positieve T-cellen toonden, toonden de verworpen allografen een beduidend hoger aantal cd8 positieve cellen in en rond glomeruli en tubuli bevestigend T-cel bemiddelde verwerping. Dit model biedt een significant inzicht in de immunologische verschijnselen van afstotings-, tolerantie- en donor-host interacties die de weg vrijmaken voor de ontwikkeling van therapeutische klinische interventies bij vaste orgaantransplantatie.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.