تم تصوير الطيف الكتلي (IMS) الأمثل لتميز التوزيع المكاني للسمات الجزيئية في التطبيقات المستخدمة على نطاق واسع ثلاثة: شرائح الأنسجة، والماغنيسيوم، والمستعمرات الميكروبية1،،من23. يمكن استخدام شرائح الأنسجة لتقييم التعريب من نواتج الأيض في سياق الظروف البيولوجية في مضيف، أما المستهدفة أو غير المستهدفة داخل مجموعة أسلحة معينة. ومع ذلك، الاختلافات بين السمات الجزيئية هي الأكثر كبيرة وواضحة عندما تتم مقارنة أنسجة سليمة إلى حالة مريضة، على سبيل المثال، ورم. هذا النهج نظام الرصد الدولي لا سيما تكييفها للكشف عن المرض المؤشرات الحيوية، ومع ذلك، الحصول على عينات الأنسجة في مراحل متميزة في تطور المرض (مثل درجات الورم) يحول دون تحديد الإشارات التي يمكن أن تكون هامة للبدء المرض. تبادل المعلومات عبر الفضاء ميزة في كل مكان من العديد من النظم البيولوجية، وشرائح الأنسجة لا يمكن التقاط هذه التقوية الكيميائية الحيوية. هو أسلوب واحد قادر على تصور التبادل الكيميائي ونشر نظام الرصد الدولي للمستعمرات الميكروبية التي نمت على لوحات أجار؛ جزيئات صغيرة قادرة على منتشر عبر واجار ويمكن الحصول عليها عن طريق الليزر ساعد مصفوفة الامتزاز/التأين (استخدام-TOF) الكتلي4. هذا الإعداد النمو يمكن استخدامها لتحديد الجزيئات المتبادلة بين الكيانات البيولوجية منفصلة (المستعمرات)، ويمكن أيضا تحديد اتجاه الإنتاج المستقلب. منصة مصممة أصلاً للنمو الميكروبي مستعمرة تم تكييفها لاستكشاف استقلاب الأنسجة explants نمت مع خلايا الثدييات الأولية، وتم استخدام نظام الرصد الدولي لتقييم تبادل المواد الكيميائية الحيوية في نظام الثدييات في المختبر.
في السنوات القليلة الماضية، أصبح من الواضح أن ارتفاع درجة سرطان المبيض المصلي (هجسوك) غالباً ما ينشأ في ظهارة قناة فالوب (FTE) ومستطير ثم إلى المبيض خلال بداية المرض التنمية5،6، 7 , 8-والسبب في أن الخلايا الورمية FTE تنتشر في المبيض، حيث تشكل الأورام الكبيرة في نهاية المطاف والسرطاني كذلك، ليس من الواضح حاليا. وقد ركزت البحوث السابقة حول دور البروتينات المبيض في الابتدائي ورم خبيث على المبيض؛ ومع ذلك، مؤخرا أثبتت أن الانتقال من صحية إلى أنسجة الورمية ينتج الجهوري الأيض الخلوية ويغير إنتاج الجزيئات الصغيرة9،،من1011. ولذلك، افترضنا أن الجزيئات الصغيرة وتبادل بين FTE والمبيض قد تكون مسؤولة جزئيا عن ورم خبيث الأولية من هجسوك.
استخدام لدينا إجراء نظام الرصد الدولي وضعت حديثا، قررنا أن كوكولتوري FTE الورمية وأنسجة المبيض صحية يستحث إنتاج إفراز من المبيض. ومع ذلك، أنواع الخلايا أو الخلايا FTE الطبيعية الأخرى لم تثر هذا التأثير. ميزة غير عادية من هذا الأسلوب هو أنه يمكن تصور إنتاج الجزيئية وتبادل الإشارات التي تمثل الجزيئات الحقيقية، بل وحتى في كوكولتوري فمن الممكن تحديد مصدر إشارة. هذه ميزة على تحليل العينات المتجانس، حيث يتم فقدان كافة المعلومات المكانية. في النظام النموذجي، كنا قادرين على وضوح تعيين إنتاج إفراز المبيض. ارتبط إفراز لورم خبيث وتشيموريسيستانسي من سرطان المبيض، ولدينا اكتشاف هذا الجزيء صادق أن أسلوب IMS رواية يمكن الكشف عن الصلة بيولوجيا الجزيئات12،13، 14-التحقق من الصحة هذا يتيح لنا أن يقترح أن هذا الطلب الجديد لنظام الرصد الدولي يمكن أن يكون مفيداً بشكل خاص البحوث الجماعات التي تسعى لتحديد الجزيئات الصغيرة في البيئات كوكولتوري وفهم الأحداث المبكرة التي تؤثر على تحول الخلايا وورم خبيث. والهدف العام لهذا الأسلوب توضيح هوية والتوزيع المكاني للجزيئات الصغيرة من خلال التبادل بين الأنسجة والأعضاء، ممثلة في المختبر الثقافات الخلية 3D أو السابقين فيفو الأنسجة.
بروتوكولنا يمكن أن خريطة جزيء صغير الاتصالات الكيميائية بين الخلايا والأنسجة، ونحن قد طبقت على وجه التحديد هذا لاستكشاف جزيئات صغيرة في ميتاسيس سرطان المبيض. الميزة الرئيسية لتقنيتنا هي القدرة على قياس الجزيئات الصغيرة بطريقة خالية من التسمية مع الحفاظ على السلامة المكانية للخلايا والأنسجة في 2D. وقد سمحت لنا هذه التقنية باستجواب مساهمة الجزيئات الصغيرة في نقائل سرطان المبيض بطريقة غير مستهدفة.
وهذا يمكن أن يكشف عن أهداف علاجية جديدة ومسارات تم تجاهلها في السابق. ويمكن بسهولة توسيع نطاق هذه المنهجية إلى أنواع السرطان الأخرى التي يمكن زراعتها في agarose وأي مرض آخر حيث قد يكون عنصر مكاني مهم للنمط الظاهري الخلوي الناتج. ضمان أن جميع الخلايا والمكونات في متناول اليد والصبر مع عملية التجفيف أمر ضروري لهذا البروتوكول.
يمكن أن تؤدي خطوة الجفاف المتعجلة في كثير من الأحيان إلى بيانات قياس الطيف الكتلي ذات الجودة الرديئة. إن البرهان المرئي لهذه الطريقة مفيد في فهم خطوات إعداد العينة والجفاف لدينا ، حيث تنحرف هذه إلى حد كبير عن تجارب القياس الطيفي الكتلي للتصوير النموذجية التي تستخدم الأنسجة أو الميكروبات على الأجار. للبدء، تسييل agarose في 70 درجة مئوية على لوحة ساخنة.
ضع مقسم ثمانية جيدا على رأس الشريحة المعالجة ITO. عبر العلاج التربسين القياسية، وجمع خلايا وزارة التربية في أنبوب مخروطي 15 م