Murin hjärtinfarkt modell med permanent ligering av vänster främre fallande kranskärlssjukdom

Denna murine modell av hjärtinfarkt överträdelse möjliggör övervakning av patologiska processer som sker från koronar ocklusion till sent stadium hjärtsvikt på den lokala hjärtvävnaden och systemiska nivåer. Denna metod är kompatibel med någon avläsning som för närvarande används i hjärtbiologi och fysiologi. Dessutom drar den nytta av den enorma mångfalden av murine genetiska modeller.

Förvärv av adekvata kirurgiska färdigheter kan ta tid att bemästra. Detta förfarande är bäst lärt sig steg för steg med en erfaren forskare. Visuell demonstration av denna murine modell gör det möjligt att dela tips som kan hjälpa till med det kirurgiska ingreppet och påskynda inlärningsprocessen.

Använd en elektrisk rakhyvel för att snabbt raka en sövd, 25-till-30-gram, hane, C57-Black/6 mus på halsen och vänster sida av bröstkorgen. Bekräfta en brist på svar på tå nypa. Applicera salva på djurets ögon.

Placera musen i ryggläge på en värmedyna, och placera en liten gasbinda komprimera under huvudet för att undvika överhettning ögonen. Säkra lemmarna med klistertejp. Passera en slinga av 5-0 siden sutur under de övre incisirerna, och säkra änden av slingan på värmedynan för att hålla munnen öppen under kanylering.

Applicera depilatory grädde på de förrakade områdena, och massera försiktigt med en bomullspinne i en minut. Ta bort överskottet av päls och kräm med gasväv, och rengör den exponerade huden med droppar på 0,9%saltlösning och gasväv. Applicera bitar av steril gasbinda på rakade halsen och bröstkorgen, och blöt gasbinda med iodopovidon.

Ställ ventilatorn på en tidvattenvolym på sju milliliter per kilogram och en ventilationshastighet på 140 slag per minut. Flytta musen under ett mikrokirurgi stereomikroskop. Hålla huden på mitten av halsen, gör en 0,5-centimeters snitt längs caudal/ cephalic linje, och separera loberna i spottkörteln.

Använd böjda tlycper för att försiktigt separera fascian i sternohyoidmuskeln tills struphuvudet och luftstrupen är synliga. Sedan säkra kanterna på öppningen med upprullningsdon fäst på elastiska band. Dra därefter försiktigt tungan i sidled och använd kraftnålar för att sätta in den avtrubbade innernålen på en 16-gauge kanyl i luftstrupen.

Visualisera en korrekt insättning i luftstrupen genom halsen snitt, och anslut kanylen till ventilatorn. Placera steril 0,9%koksaltlösning kompletterad med iodopovidonindränkt gasväv på snittet för att hålla vävnaderna våta under operationen. Placera sedan avgasslangen i vatten.

Förekomsten av bubblor indikerar en lyckad intubation. För ligering av vänster främre fallande kranskärl, eller LAD, försiktigt flytta musen i höger sida decubitus position, och resecure vänster främre lem i den nya positionen. Identifiera linjen mellan vänster pectoralis mindre och stora muskler, och göra en sned en centimeter hud snitt längs linjen.

Med hjälp av trubbig dissekerande mikro sax, separera fascian i pectoralis musklerna utan incising vävnaderna, och använda upprullningsdon fäst vid elastiska band för att upprätthålla separationen. Ställ in ventilatorn med ett positivt änd-expiratory tryck på tre centimeter vatten. Använd trubbiga tärnor för att öppna brösthålan vid det tredje interkosa utrymmet mellan tredje och fjärde revbenet.

Placera två upprullningsdon i bröstkorgen, en på varje revben, och använd en böjd fina triknips för att försiktigt ta bort hjärtsäcken utan att skada hjärta och lungor. Lokalisera LAD som en ytlig klarröd linje som löper från kanten av den vänstra auricle mot spetsen. Använd en nålhållare för att passera en 7-0 siden sutur under LAD två till tre millimeter under den vänstra atria.

Dra silket långsamt för att undvika att riva hjärtvävnad, binda ligaturen med tre knop. Den nedre vänstra delen av den vänstra ventrikeln kommer omedelbart att vända blek på ligatur. Släpp nu revbenet upprullningsdon, och hålla det tredje revbenet med trikingar, göra två passningar med en 6-0 siden sutur under tredje och fjärde revben.

Placera tre droppar av 37-graders Celsius 0,9%saltlösning på öppningen, och stänga utgången avgasröret för två eller tre andningscykler för att ordentligt blåsa upp lungorna. Dra åt och säkra suturen med två kast, och släpp upprullningsdonen som håller musklerna, vilket hjälper musklerna att återgå till sin korrekta anatomiska plats. Stäng sedan brösthuden med två stygn och två kast med 5-0 sutursilke.

Stäng halsen huden med ett stygn av 5-0 sutur siden och två kast. I slutet av proceduren, ta bort bandbanden från armar och ben, vänd försiktigt djuret till ventrala deubitus på kompressen pad, och placera en kompress på värmedynan på höger sida av djuret. Intraperitoneally injicera 0,3 milliliter av 37-graders-Celsius värmde 5%glukos lösning.

Stanna respiratorn. Om musen spontant andas, försiktigt ta bort kanylen. Subkutant injicera 0,1 milligram per kilo buprenorfin.

Placera musen i en 30-graders Celsius bur ventilerad med 100%syre i minst en timme med övervakning. Under de två första dagarna efter operationen, ge musen med en mjuk kost och vatten ad libitum, värma djuret vid behov. Sju dagar efter kirurgi, de skandinaviska områdena förblir obefläckade av triphenyltetrazolium klorid, medan den levande vävnaden fläckar röd på grund av förekomsten av dehydrogenaser.

De ischemiska områdena kan sedan beräknas som andelen vita området i den vänstra ventrikeln i ett program för bildtagningsprogram. Western blot analys för alfa-glatt muskel aktin och SMAD2 fosforylering, som är respektive större avläsningar av myofibroblasts och att omvandla tillväxtfaktor beta signalering aktivering, kan användas för att bestämma omfattningen av fibros inom myokardial vävnad av infarcted hjärtan. Real-time polymeras kedjereaktion analys av omvandla tillväxtfaktor beta och dess nedströms mål mRNA uttryck kan också utföras för att bedöma förekomsten av myokardial fibros.

Pro-inflammatoriska signalvägar och uttryck för pro-inflammatoriska gener är vanligtvis visat sig vara aktiveras inom den första veckan efter hjärtinfarkt. mRNA uttryck av pro-inflammatoriska gener och monocyte/macrophage markörer observeras också. Ligeringshöjden kommer att påverka överlevnaden på ett kritiskt sätt och bör anpassas till varje stam eller genotyp, eftersom LAD-förgrening kan variera.

Konstanter i ligering är nyckeln för att få reproducerbara resultat. Detta förfarande kan kopplas ihop med någon analysmetod och kan följas av funktionell analys, vävnad fixering, cellodling, eller någon teknik av intresse.