12,108 Views
•
08:04 min
•
January 24, 2020
DOI:
طريقتنا توفر نموذج حيواني موثوق به في عداد المفقودين من مرض جفاف العين التي يمكن أن تكون حادة أو مزمنة بفضل طريقتنا في حقن جميع الغدد الدمعية وتكرار الحقن. هذه التقنية يسلم موثوق Concanavalin ألف إلى الغدة اللادمية السفلي باستخدام التوجيه الموجات فوق الصوتية إلى الغدد ذات الأحجام المتغيرة على نطاق واسع وما يصل إلى الغدة اللادمية متفوقة مما يجعل هذه الطريقة نهجا كاملا. يوفر هذا النموذج وسيلة بسيطة، محسنة، غير الجراحية للحث على مرض العين الجافة مائي نقص.
وهو مناسب تماما لدراسة فعالية المخدرات والأمراض الفيزيولوجيا. تحديد incisure الخلفي واستخدام التعريب الموجات فوق الصوتية يمكن أن يكون تحديا في البداية. إزالة جميع الفراء أمر بالغ الأهمية للمساعدة في توطين الموجات فوق الصوتية لكل من هذه الخطوات.
إثبات الإجراء سيكون (وي هوانغ) طالب دراسات عليا من مختبري بعد تأكيد التخصير الخفيف من خلال مراقبة وضعية الرأس المريحة مع فصوص الأذن التي لم تعد تستقيم بشكل كامل ، استخدم ميكروبيبت لتطبيق 25 ميكرولترات من الليدوكائين الخالية من المواد الحافظة على العين الأولى ووضع منظار مرنة لغطاء الأسلاك بين الجفون. باستخدام 0.3 ملقط، فهم غشاء nictating في ذروتها وتمديدها على القرنية.
باستخدام إبرة حادة قياس 26، حقن ليدوكاين 1٪ مع 1:100، 000 الابينفرين subconjuctivally في قاعدة الغشاء nictating. وينبغي أن تشكل bleb معتدلة على الغشاء. ثم إزالة المنظار وجعل حقنة مماثلة في الغشاء الأيسر.
بعد ما يقرب من خمس دقائق، وضع منظار الغطاء مرة أخرى في العين زميل واستخدام 0.3 ملقط لسحب غشاء nictating في ذروتها. باستخدام مقص Westcott ، قطع الغشاء nictating قبالة في قاعدتها وإزالة المنظار. ثم ضع مرهم مضاد حيوي موضعي على العين.
للجزء بالكبرال من حقن الغدة اللادمية متفوقة، بعد التأكد من التغفير، القص قبالة الفراء في منطقة ما قبل المداري وفروة الرأس واستخدام كريم إزالة الشعر لإزالة تماما أي الفراء المتبقية. بعد دقيقتين إزالة كريم وتطبيق 25 ميكرولترات من 1٪ ليدوكاين خالية من المواد الحافظة للعين المناسبة. Evert الجفن العلوي وتطبيق ضغط متوسط لطيف على الحافة المدارية الخلفية حتى ينظر protuberance بمناسبة الجزء palpebral من الغدة.
باستخدام ملقط ذات أسنان دقيقة ومحاقن درنة درنة مجهزة بإبرة قياس 27، اختراق الغدة مباشرة عبر نهج عبر الconjunctival تقدم الإبرة اثنين ملليمتر في الأنسجة وحقن 100 ميكرولترات من 500 ميكروغرام حل من Concanavalin A أو A.على الفور بعد الحقن، وتطبيق الضغط الوسيط على الكرة الأرضية للتسبب في الغدة القشرية متفوقة المدارية لبرز من incisure الخلفي. باستخدام ملقط منحني مغلقة، المسافة البادئة في المنطقة حتى يتم الشعور فتحة عظمية في الجمجمة وتطبيق المزيد من الضغط المتواضع مع ملقط لترك المسافة البادئة في الجلد لتكون بمثابة معلم لوضع إبرة. إدراج حقنة درنة درنة مجهزة بإبرة قياس 27 عمودي على الجلد على علامة المسافة البادئة حوالي ربع بوصة في شق وإعادة توجيه الإبرة بشكل خلفي وخارجي نحو canthus الجانبي تهدف إلى نقطة الوسط بين موقع الحقن والحافة المدارية العظمية.
بمجرد الوصول إلى محور الإبرة ، وحقن ببطء 0.2 ملليلتر من محلول 1000 ميكروغرام من حقن Con A.For ILG ، اعرض الحيوان من الجانب لتحديد مكان بروز ILG على طول الجزء الأمامي السفلي من المدار. استخدم قلمًا جراحيًا لوضع علامة على الجلد لرسم خط عمودي حيث ينتقل الجزء السطحي من غدة ILG من مكان الراحة السطحي على العظم الزيج إلى موقعه الأكثر توسطًا في المدار. اكتساح مسبار الموجات فوق الصوتية عقد عموديا عبر الخط على الجلد لتحديد نهاية العظام الزيج.
يحدث انتقال ILG حيث تتغير صورة الغدة من خط hyperechoic محيط إلى واحد بدون حد الوسيط يمكن التعرف عليها. وسيكون الموقع النسبي لليد إلى الخط المرسوم على الجلد عند ملاحظة هذا التغيير هو موقع الحقن. لوضع كون A في غدة عند نقطة مجرد وسيلة وسيطة إلى عظم القوس الزيمي، تعيين العمق المطلوب للحقن كعمق للإشارة فرط ية العظام الزيج بالإضافة إلى ملليمتر واحد ناقص طول معروف من الإبرة.
أدخل الإبرة حوالي 12 ملليمترًا في الغدة في موقع الحقن قبل الانسحاب ببطء حتى يساوي طول الإبرة المكشوفة خارج الجسم الفرق المحسوب. ثم حقن 0.2 ملليلتر من 1000 ميكروغرام من الحل كون ألف وتأكيد نجاح الحقن عن طريق الموجات فوق الصوتية. وينبغي أن يحمل ILG مساحة فائقة التشويك مميزة.
حقن Con A تحفز استجابة التهابية قوية في الغدة اللادمية تتميز بتسلل لمفاوي كثيف يصاحبه انخفاض إنتاج المسيل للدموع. يتم قمع مستويات اللاكتوفرين المسيل للدموع مما أدى إلى ظهارة القرنية والملتحمة للخطر وزيادة تلطيخ البنغال الورد. حقن أنسجة إل جي المدارية الثلاثة تنتج حالة مرض العين الجافة متسقة وموحدة.
مجموعة واحدة من حقن Con A تنتج مرض العين الجافة التي تستمر حوالي أسبوع واحد مع جميع المعايير السريرية تطبيع بحلول اليوم 10. متسلسلة Con A الحقن حوالي أسبوع واحد وبصرف النظر تمديد مدة مرض جفاف العين وفقا لذلك. بعد ما يقرب من خمس مجموعات من الحقن، وغالبا ما تصبح حالة مرض جفاف العين دائمة دون الحاجة إلى مزيد من الحقن.
مثالي توطين هياكل الغدة الدمعية هو الأكثر أهمية. الإلمام التشريح القحفي والاهتمام بالتفاصيل الدقيقة بما في ذلك إزالة الفراء جنبا إلى جنب مع المهارة باستخدام الموجات فوق الصوتية جميع تحسين النتائج. وبما أن هذه التقنية المباشرة تتطلب استخدام الحادة، يجب أن يتخذ التحقيق الاحتياطات المناسبة لمنع إصابات عصا الإبرة.
تصف هذه المقالة تطوير طريقة للحث على مرض العين الجاف الحاد أو المزمن في الأرانب عن طريق حقن concanavalin A إلى جميع أجزاء نظام الغدة الدمعية المدارية. هذه الطريقة، متفوقة على تلك التي ذكرت بالفعل، يولد نموذج استنساخها، مستقرة من العين الجافة مناسبة لدراسة العوامل الدوائية.
Read Article
Cite this Article
Honkanen, R. A., Huang, L., Rigas, B. A Rabbit Model of Aqueous-Deficient Dry Eye Disease Induced by Concanavalin A Injection into the Lacrimal Glands: Application to Drug Efficacy Studies. J. Vis. Exp. (155), e59631, doi:10.3791/59631 (2020).
Copy