Medicine
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Un modelo de conejo de enfermedad ocular seca acuosa-deficiente inducida por la inyección de Concanavalin A en las glándulas lagrimales: Aplicación a estudios de eficacia de fármacos
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Summary January 24th, 2020
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Este artículo describe el desarrollo de un método para inducir la enfermedad aguda o crónica del ojo seco en conejos mediante la inyección de concanavalina A a todas las porciones del sistema de glándulas lagrimales orbitales. Este método, superior a los ya reportados, genera un modelo reproducible y estable de ojo seco adecuado para el estudio de agentes farmacológicos.
Transcript
Nuestro método proporciona el modelo animal confiable que falta de enfermedad del ojo seco que puede ser agudo o crónico gracias a nuestro método de inyección de todas las glándulas lagrimales y inyecciones repetidas. Esta técnica entrega de forma fiable Concanavalina A a la glándula lagrimal inferior utilizando la guía por ultrasonido a las glándulas de tamaños ampliamente variables y hasta la glándula lagrimal superior haciendo de este método un enfoque completo. Este modelo proporciona un medio simple, optimizado y no quirúrgico para inducir la enfermedad del ojo seco acuosa-deficiente.
Es adecuado para estudiar la eficacia de los fármacos y la fisiopatología de la enfermedad. Identificar la incisión posterior y utilizar la localización de ultrasonidos puede ser un desafío al principio. Extracción de todo el pelaje es fundamental para ayudar en la localización de ultrasonidos para ambos pasos.
Demostrando el procedimiento estará Wei Huang, un estudiante graduado de mi laboratorio. Después de confirmar la sedación leve observando una posición relajada de la cabeza con los lóbulos del oído ya no completamente erguido, utilice una micropipeta para aplicar 25 microlitros de lidocaína libre de conservantes en el primer ojo y coloque un espéculo de tapa de alambre flexible entre los párpados. Usando 0.3 fórceps, agarre la membrana nictante en su ápice y extiéntela sobre la córnea.
Usando una aguja afilada de calibre 26, inyecte lidocaína 1%con 1:100,000a epinefrina subconyciba en la base de la membrana nictante. Se debe formar un bleb moderado sobre la membrana. A continuación, retire el espéculo y haga una inyección idéntica en la membrana nictante izquierda.
Después de aproximadamente cinco minutos, coloque el espéculo de la tapa de nuevo en el otro ojo y use 0,3 fórceps para retraer la membrana nictante en su ápice. Usando tijeras Westcott, corte la membrana nictante en su base y retire el espéculo. Luego coloque un pomada de antibióticos tópicos en el ojo.
Para la porción palpebral de la inyección superior de la glándula lagrimal, después de confirmar la sedación, cortar el pelaje en el área pre-orbital y del cuero cabelludo y utilizar crema depilatoria para eliminar completamente cualquier pelaje residual. Después de dos minutos retira la crema y aplica 25 microlitros de lidocaína 1%conservante en el ojo adecuado. Evert el párpado superior y aplicar una suave presión medial en el borde orbital posterior hasta que se vea la protuberancia que marca la parte palpebral de la glándula.
Usando fórceps de dientes finos y una jeringa de tuberculina equipada con una aguja de calibre 27, penetra directamente la glándula a través de un enfoque transconjuntival avanzando la aguja dos milímetros en el tejido e inyecta 100 microlitros de una solución de 500 microgramos de Concanavalina A o Con A.Inmediatamente después de la inyección, aplique presión medial en el globo para hacer que la glándula lagrimal superior orbital prosalde de la incisión posterior. Usando fórceps curvos cerrados, sangra el área hasta que se sienta la abertura ósea en el cráneo y aplica una presión más modesta con fórceps para dejar una sangría en la piel para servir como punto de referencia para la colocación de la aguja. Inserte una jeringa de tuberculina equipada con una aguja de calibre 27 perpendicular a la piel sobre la marca de sangría de aproximadamente un cuarto de pulgada en la incisión y redirija la aguja de forma posterior y externa hacia el canthus lateral apuntando hacia el punto medio entre el lugar de inyección y el borde orbital óseo.
Una vez alcanzado el cubo de la aguja, inyectar lentamente 0,2 mililitros de una solución de 1.000 microgramos de Con A.Para la inyección de ILG, ver al animal desde el lado para localizar el protagonismo de la ILG a lo largo de la parte anterior inferior de la órbita. Utilice una pluma de marcado quirúrgico para dibujar una línea vertical sobre la piel donde la parte superficial de la glándula ILG pasa de su lugar de descanso superficial en el hueso cigomático a su ubicación más medial en la órbita. Barrer una sonda de ultrasonido verticalmente a través de la línea en la piel para identificar el extremo del hueso cigomático.
La transición de ILG ocurre donde la imagen de la glándula cambia de una línea hiperecólica circunscrita a una sin un borde medial reconocible. La posición relativa de la pieza de mano a la línea dibujada en la piel cuando se observe este cambio será el lugar de inyección. Para colocar Con A en una glándula en un punto sólo medial al hueso del arco cigomático, establezca la profundidad de inyección deseada como la profundidad de la señal hiperecoica del hueso cigomático más un milímetro menos la longitud conocida de la aguja.
Inserte la aguja unos 12 milímetros en la glándula en el lugar de inyección antes de retirarla lentamente hasta que la longitud de la aguja expuesta fuera del cuerpo sea igual a la diferencia calculada. A continuación, inyecte 0,2 mililitros de una solución de 1.000 microgramos de Con A y confirme el éxito de la inyección por ultrasonido. El ILG debe exhibir un espacio hiperecoico característico.
Las inyecciones de Con A inducen una fuerte respuesta inflamatoria en la glándula lagrimal caracterizada por un infiltrado linfocítico denso que se acompaña de una disminución de la producción de lágrimas. Los niveles de lactoferrina lagrimal se suprimen dando como resultado un epitelio corneal y conjuntival comprometido y un aumento de la tinción de bengala rosa. La inyección de los tres tejidos orbitales LG produce un estado de enfermedad del ojo seco consistente y uniforme.
Un solo conjunto de inyecciones de Con A produce una enfermedad del ojo seco que dura aproximadamente una semana con todos los parámetros clínicos que se normalizan para el día 10. Las inyecciones secuenciales de Con A con una semana de diferencia extienden la duración de la enfermedad del ojo seco en consecuencia. Después de aproximadamente cinco conjuntos de inyecciones, el estado de la enfermedad del ojo seco a menudo se vuelve permanente sin necesidad de inyecciones adicionales.
Localizar de forma óptima las estructuras de la glándula lagrimal es lo más importante. Familiaridad con la anatomía craneal y la atención a los detalles finos, incluyendo la eliminación del pelaje junto con la habilidad usando el ultrasonido todos mejoran los resultados. Como esta técnica sencilla requiere el uso de objetos punzantes, la investigación debe tomar las precauciones adecuadas para prevenir lesiones por pinchazo de aguja.
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