Byggandet av CRISPR Plasmids och detektion av Knockout Effektivitet i däggdjursceller genom en Dual Luciferase Reporter System

Här presenterar vi ett protokoll som beskriver en strömlinjeformad metod för effektiv generering av plasmider som uttrycker både CRISPR-enzymet och tillhörande single guide RNA (sgRNAs). Co-transfection av däggdjursceller med denna sgRNA/ CRISPR vektor och en dubbel luciferase reporter vektor som undersöker dubbel-strand bryta reparation möjliggör utvärdering av knockout effektivitet.