Immunology and Infection
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गुर्दे की सबकैप्सुलर ट्रांसप्लांटेशन 2'-Deoxyguanosine-treated Murine भ्रूण थाइमस में नग्न चूहे
Chapters
Summary July 19th, 2019
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हम एक नग्न माउस के गुर्दे कैप्सूल में 2'deoxyguanosine इलाज E18.5 थाइमस प्रत्यारोपण करने के लिए एक सरल और कुशल विधि प्रदान करते हैं. इस विधि दोनों थाइमिक उपकला कोशिकाओं समारोह और टी कोशिकाओं परिपक्वता के अध्ययन में सहयोगी होना चाहिए.
Transcript
थाइमस प्रत्यारोपण थाइमस एपिथेलियल सेल फंक्शन और वीवो में टी-सेल परिपक्वता की जांच के लिए एक महत्वपूर्ण तरीका है। इस सरल और कुशल प्रोटोकॉल का उपयोग गुर्दे के कैप्सूल में बाद में प्रत्यारोपण के लिए माउस 18.5 थाइमस को अलग और संस्कृति के लिए किया जा सकता है। 18.5 थाइमस प्रत्यारोपण के लिए प्रोटोकॉल को अन्य विकासात्मक चरणों में या समान आकार के अन्य ऊतकों के लिए थाइमिक प्रत्यारोपण के लिए संशोधित किया जा सकता है।
इसके अलावा, यह प्रक्रिया बहुत सरल है। पहली बार इस तकनीक का प्रदर्शन करते समय कुछ मामले टिकटों के विवरण की सावधानीपूर्वक समीक्षा की जानी चाहिए। इस प्रक्रिया में विस्तृत जोड़तोड़ शामिल हैं जिन्हें दृश्य के साथ बेहतर तरह से चित्रित किया जा सकता है।
बलिदान के बाद, भ्रूण दिवस 18.5 गर्भवती माउस को 70% इथेनॉल के साथ मिटा दें और मूत्राशय से गर्भाशय के प्रत्येक सींग तक पेट पर वी-आकार के कट बनाने के लिए ऑटोक्लेव्ड निष्फल उपकरणों का उपयोग करें। मेसोम्ट्रियम और सर्वाइकल और योनि क्षेत्रों को काटने के लिए कैंची का उपयोग करें और बर्फ पर ठंडे पीबीएस युक्त पेट्री डिश में गर्भाशय की कटाई करें। पूर्वकाल गर्भाशय की दीवार को एक गर्भाशय सींग से दूसरे में काट लें ताकि एन्विडुआ के भीतर भ्रूण को बेनकाब किया जा सके और डिकिडुअल ऊतकों को वापस छीलने के लिए ठीक चिमटी का उपयोग किया जा सके।
बर्फ पर एक नई पेट्री डिश में हस्तांतरण के लिए भ्रूण जारी करने के लिए गर्भनाल काटें । पहले थाइमस फसल के लिए, 70% शराब के साथ एक भ्रूण को मिटा दें और भ्रूण को एक नई पेट्री डिश में स्थानांतरित करें। डेपुटेशन के बाद, रीढ़ की स्थिति में पकवान में भ्रूण को ठीक करें और पार्श्व छाती की दीवार को क्षैतिज रूप से एक्सिलरी फ्रंट के साथ काटने के लिए बाँझ कैंची का उपयोग करें।
छाती खोलने के लिए डायाफ्राम काट लें। थाइमस को श्वासनली के सामने स्थित दो सफेद लोब्स और दिल के निकट दिखाई देना चाहिए। ध्यान से थाइमस के पीछे तुला टिप संदंश डालें और धीरे-धीरे ऊतक फसल के लिए खींचें।
थाइमस की अखंडता की जांच करें पुष्टि करने के लिए कि इसमें दो संयुक्त लोब होते हैं। फिर कनेक्टिव ऊतकों और रक्त वाहिकाओं को ट्रिम करने के लिए स्टीरियो माइक्रोस्कोप का उपयोग करने से पहले पीबीएस के साथ थाइमस धोएं। जब अजवायन के सभी एकत्र किया गया है, एक 24 अच्छी तरह से संस्कृति माध्यम के ५०० माइक्रोलीटर प्रति अच्छी तरह से युक्त थाली के व्यक्तिगत कुओं में प्रत्येक साफ ऊतक हस्तांतरण ।
और 1.25 मिलीमोलर प्रति अच्छी तरह से अंतिम एकाग्रता में 2'डिऑक्सीग्रानोसिन जोड़ें। फिर अलग-थलग अजवायन को आठ दिनों तक सेल कल्चर इनक्यूबेटर में रखें। संस्कृति के अंतिम दिन, कैंची का उपयोग करने के लिए एक ४५ डिग्री कोण पर जलसेक ट्यूब भाग पर एक खोपड़ी नस सुई कटौती और एक नग्न प्राप्तकर्ता जानवर में पैर की अंगुली चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि करें ।
माउस को सही पार्श्व स्थिति में ऑपरेटिंग टेबल पर रखें और सर्जिकल क्षेत्र में त्वचा को अंदर से शरीर के बाहर तक दो बार झाड़ू लगाने के लिए 0.5% पोविडोन आयोडीन झाड़ू का उपयोग करें। बाएं गुर्दे के क्षेत्र में रीढ़ के समानांतर पांच से नौ मिलीमीटर त्वचा चीरा बनाने के लिए स्केलपेल का उपयोग करें और पेट की गुहा को खोलने के लिए चमड़े के नीचे ऊतक और मांसपेशियों के माध्यम से काटें। एक हाथ से चिमटी की एक जोड़ी का उपयोग करना, उजागर गुर्दे की रीढ़ की ओर चीरा किनारे से मांसपेशियों और वसा ऊतकों को उठाएं और धीरे-धीरे गुर्दे को निचोड़ने के लिए दूसरे हाथ का उपयोग करें।
सर्जरी के दौरान गुर्दे के कैप्सूल को नम रखने के लिए, नमकीन के साथ गुर्दे की सतह को गीला करें और खोपड़ी की सुई का उपयोग धीरे से गुर्दे की सुई का उपयोग करें 1/2 से 2/3 के बारे में निचले दाईं ओर गुर्दे के कैप्सूल को धीरे से खरोंच करने के लिए गुर्दे की चौड़ाई । कैप्सूल के निक में जलसेक ट्यूब स्लाइड और धीरे गुर्दे से गुर्दे कैप्सूल अलग गुर्दे के बारे में तीन से चार मिलीमीटर गुर्दे कैप्सूल में गुर्दे की लंबी ओर लंबे समय । फिर जलसेक ट्यूब को वापस लें।
थाइमस को बनाए गए सबकैप्सुलर स्पेस में प्रत्यारोपित करने के लिए, ताजा नमकीन में दो बार एक संस्कृति थाइमस को धोएं और काटा हुआ जलसेक ट्यूब को एक सिरिंज से कनेक्ट करें। धीरे-धीरे तैयार थाइमस को संशोधित जलसेक ट्यूब में एस्पिरेट करें। और धीरे-धीरे गुर्दे कैप्सूल में जलसेक ट्यूब डालें जब तक कि यह बेहतर ध्रुव तक न पहुंच जाए।
गुर्दे कैप्सूल में थाइमस देने के लिए, ट्यूब को धीरे-धीरे वापस लें, जबकि साथ ही धीरे-धीरे प्लंजर को निराशाजनक करें। अल्कोहल लैंप का उपयोग करके, खोपड़ी की सुई को थोड़ा गर्म करें और इस बात की पुष्टि करने के बाद कि पूरे थाइमस सबकैप्सुलर स्पेस के अंदर है, निक को कोटराइज करने के लिए गर्म सुई का उपयोग करें। पेट की गुहा के लिए कॉटराइज्ड किडनी को बहाल करें और पेरिटोनम और मांसपेशियों को टांके के साथ बंद करें।
एक संशोधित बाधित ऊर्ध्वाधर गद्दे सीवन का उपयोग करके, त्वचा के चीरे को कम से कम तीन समुद्री मील के साथ बंद करें और चीरा को कीटाणुरहित करने के लिए पोविडोन आयोडीन झाड़ू का उपयोग करें। फिर एंटीबायोटिक और एनाल्जेसिया का एक चमड़े के नीचे इंजेक्शन प्रदान करें और माउस को पूर्ण वसूली तक निगरानी के साथ एक अवरक्त दीपक के नीचे रखें। यहां, एक अलग भ्रूण दिवस 18.5 थाइमस जिसमें दो पूर्ण लोब्स होते हैं।
प्रत्यारोपण के तुरंत बाद, थाइमस प्राप्तकर्ता गुर्दे की नोक पर गुर्दे कैप्सूल के तहत कल्पना की जा सकती है। नग्न माउस प्राप्तकर्ता जानवर के भीतर विकास के आठ सप्ताह के बाद, थाइमस कैप्सूल के नीचे रहता है, लेकिन आकार में मजबूती से बढ़ता है। टी कोशिकाओं दोनों प्रत्यारोपित थाइमस और नग्न माउस प्राप्तकर्ताओं के परिधीय रक्त में उत्पादित कर रहे हैं ।
लेकिन जैसा कि उम्मीद थी, गैर प्रत्यारोपित नग्न जानवरों के परिधीय में कोई टी कोशिकाओं का पता चला रहे हैं । इसके अलावा, इस प्रतिनिधि प्रयोग में, परिधीय टी-कोशिकाओं में कोई लैक्ज़ जीन का पता नहीं चला, जो लैक्ज़ एलील युक्त थाइमस लोब्स के साथ प्रत्यारोपित नग्न माउस प्राप्तकर्ताओं के परिधीय रक्त से काटा गया था, यह दर्शाता है कि परिधीय टी-कोशिकाएं प्राप्तकर्ता जानवरों से उत्पन्न हुई थीं । ट्यूब को गुर्दे के कैप्सूल में फिसलने पर कोमल रहें।
कैप्सूल तोड़ने से बचें। और सुनिश्चित करें कि आपके पास थाइमस डिलीवरी के लिए पर्याप्त जगह है। थाइमिक या पेरिफेरल टी-सेल आबादी का विश्लेषण प्रवाह साइटोमीटर का उपयोग करके किया जा सकता है।
जहां, प्राप्तकर्ता के परिधीय ऊतकों में प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का विश्लेषण I2d और प्रतिरक्षा हिस्टोकेमिकल विश्लेषण द्वारा किया जा सकता है।
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