Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Ex vivo metode til vurdering af musens reproduktive kanal spontan motilitet og en MATLAB-baseret uterus motion tracking algoritme til data analyse
Summary September 1st, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Uterine sammentrækninger er vigtige for trivsel af kvinder. Men, patologisk øget kontraktilitet kan resultere i dysmenorré, især hos yngre kvinder. Her beskriver vi et simpelt ex vivo præparat, der giver mulighed for hurtig vurdering af effekten af glatte muskelafslappende midler, som kan anvendes til behandling af dysmenorré.
Transcript
Vores protokol er vigtig, fordi den giver den første kvantitative ex vivo metode til vurdering af spontane motilitet af en intakt livmoder. Denne nye tilgang giver et let og billigere alternativ til at teste afslappende potentiale naturligt forekommende retsmidler i syntetiske forbindelser. En stor fordel ved denne teknik er, at alle intra-uterin cellulære interaktioner forbliver intakt i hele eksperimentet.
Over kontraktilitet af livmoderen er forbundet med dysmenorré, for hvilke livmoderafslappende midler kan være nyttige til behandling. Denne metode giver en nem måde at teste nye afslappende midler. Efter bekræftelse af estrous cyklus fase, placere musen i liggende position, og sprede ekstremiteterne til at afsløre abdominal bækkenregionen.
Våd maven med 70% ethanol, og bruge hændel til omhyggeligt at løfte huden overlegen i forhold til klitoris. Lav små tværgående snit på de laterale aspekter af det nedre abdominale område op til de øvre ekstremiteter for at eksponere bughinden. Skær forsigtigt gennem bughinden for at eksponere mave-tarmkanalen uden at beskadige livmoderhornene, og brug spinces til at fjerne fascia og fedtvæv, der dækker mave-tarmkanalen.
Fjern duodenum, jejunum, ileum, cecum, og den opstigende og tværgående kolon. Find urinblæren for at finde skeden, som findes direkte under urinblæren. Find skambenet symphysis ved sammenløbet af skambenet knogler, caudal til blæren, og bruge en saks til omhyggeligt at foretage et snit på de laterale sider af skambenet symphysis gennem interpubic fibrocartilaginous væv for at få adgang og give en rute for vaginal ekstraktion.
Skær gennem mellemkødet placeret mellem anus og nederste del af vulva, og bruge kraftang til at løfte skeden for at tillade en langsom excision af endetarmen. Identificer de to uterine horn, der bifurcate i en gaffel rostrally til skeden og finde en indviklede oviduct og æggest i slutningen af hvert horn. Korrekt identifikation af livmoderhorn er afgørende for proceduren for at sikre, at vævene ikke er beskadiget.
Brug små dissekere saks til at fjerne eventuelle ledbånd, der forbinder til og støtte horn, oviducts og æggestokke i bughulen, og fjerne skeden, livmoderen, oviducts og æggestokke. Overfør hele den isolerede forplantningskanal i en 100 millimeter petriskål indeholdende 10 milliliter Dulbeccos PBS. Brug hæcener og kirurgisk saks til at fjerne enhver bindevæv og fedtvæv omkring livmoderen horn og vagina samt enhver pels i skambenet regionen, der kan hindre billedkvaliteten.
Fjern den brede ledbånd for at tillade motilitet af livmoderen horn og vaske vævet to gange med frisk Dulbecco's PBS per vask, før du overfører den isolerede forplantningskanalen i en 35 millimeter petriskål, der indeholder tre milliliter iltet Krebs opløsning. For spontan motilitet billeddannelse, placere Petriskålen på en sort overflade ved stuetemperatur, og lad 15 til 30 minutter for spontane sammentrækninger til at begynde. Når bevægelse kan observeres, registrere den spontane livmoder motilitet i 10 minutter fra et aksialt plan ved hjælp af enhver form for digitalt videoudstyr.
Dernæst overføres præparatet til en petriskål, der indeholder iltet Krebs-buffer suppleret med teststoffet, og den spontane uterusmotilitet registreres i yderligere 10 minutter på samme måde. Ved afslutningen af registreringsperioden vaskes hele forplantningskanalen i 10 milliliter af Dulbeccos PBS i en 100 millimeter petriskål, og prøven overføres til en ny petriskål med frisk iltet Krebs-buffer for at vurdere behandlingens reversibilitet. Optag den spontane uterine motilitet i ca. 10 minutter på samme måde som for de sidste to optagelser.
Derefter overføre præparatet til en anden 35 millimeter petriskål fyldt med iltet Krebs buffer suppleret med køretøjet for teststoffet for at sikre, at der ikke er mekanisk inducerede ændringer i den spontane livmodermotilitet. Den reproduktive tarmkanalen forberedelse udstillet høj motilitet i paneler A og C i mangel af adrenalin. Men denne fænotype er i dvale i panel B med tilstedeværelsen af en mikro muller adrenalin.
Her vises en analyse af stikprøvedata af adrenalinadministration og spontan motilitetsgendannelse, der illustrerer, hvordan hormontets virkninger på forplantningskanalens spontane motilitet kan kvantificeres ud fra optagelserne af vævet før, under og efter testblandingsbehandling. Det er vigtigt at undgå at komprimere eller overbelaste livmoderhornene ellers vil der ikke blive observeret spontan kontraktilitet. Vores metode kan også anvendes til test forbindelser, der kan øge kontraktilitet af livmoderen.
Denne procedure kan anvendes på gravide mus uteri på de tidligere stadier af graviditeten. Dette eksperiment har potentiale til at blive opgraderet til en seks godt plade format for gennemløb narkotika screening.
Please enter your institutional email to check if you have access to this content
has access to
BackLogin to access JoVE
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
To receive a free trial, please fill out the form below.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You
Thank You
Thank You
