Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Ex vivo metod för att bedöma mus reproduktionsorganen spontan motilitet och en MATLAB-baserade livmodern motion tracking algoritm för data analys
Summary September 1st, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Uteruskontraktioner är viktiga för välbefinnande hos kvinnor. Emellertid, patologiskt ökad kontraktilitet kan resultera i dysmenorré, särskilt hos yngre kvinnor. Här beskriver vi en enkel ex vivo beredning möjliggör snabb bedömning av effekten av glatt muskelavslappnande medel som kan användas för behandling av dysmenorré.
Transcript
Vårt protokoll är betydande eftersom det ger den första kvantitativa ex vivo-metoden för att bedöma den spontana motiliteten hos en intakt livmoder. Denna nya metod ger ett enkelt och billigare alternativ för att testa den relaxant potential naturligt förekommande rättsmedel i syntetiska föreningar. En stor fördel med denna teknik är att alla intra-uterine cellulära interaktioner förblir intakt under hela experimentet.
Över kontraktilitet i livmodern är associerad med dysmenorré, för vilka livmoderns relaxanter kan vara användbara för behandling. Denna metod ger ett enkelt sätt att testa nya relaxanter. Efter att ha bekräftat estrous cykelstadiet, placera musen i ryggläge, och sprida extremiteterna för att exponera buken bäckenregionen.
Blöt buken med 70%etanol, och använd tens för att försiktigt lyfta huden överlägsen klitoris. Göra små tvärgående snitt på de laterala aspekterna av nedre buken området upp till de övre extremiteterna att exponera bukhinnan. Skär försiktigt genom bukhinnan för att exponera mag-tarmkanalen utan att skada livmoderhornen, och använd tåten för att avlägsna fascian och fettvävnaden som täcker mag-tarmkanalen.
Ta bort tolvfingertarmen, jejunum, ileum, upphörande, och den stigande och tvärgående kolon. Lokalisera urinblåsan för att lokalisera slidan som finns direkt under urinblåsan. Lokalisera blygd symphysis vid sammanflödet av blygd ben, caudal till urinblåsan, och använda sax för att noggrant göra ett snitt på de laterala sidorna av blygd symphysis genom interpubic fibrocartilaginous vävnad för att få tillgång och att ge en väg för vaginal extraktion.
Skär genom perineum ligger mellan anus och nedre delen av vulva, och använda tänjningar för att lyfta slidan för att möjliggöra en långsam excision av ändtarmen. Identifiera de två livmoderhorn som bifurcate i en gaffel rostrally till slidan och lokalisera en invecklad oviduct och äggstock i slutet av varje horn. Korrekt identifiera livmoderhornen är avgörande för förfarandet för att säkerställa att vävnaderna inte är skadade.
Använd små dissekera sax för att ta bort eventuella ligament som ansluter till och stödja horn, ägggångarna och äggstockarna inom bukhålan, och ta bort vagina, livmoder, äggstockar och äggstockar. Överför hela isolerade reproduktions-tarmkanalen i en 100 millimeter Petri-skålen som innehåller 10 milliliter av Dulbeccos PBS. Använd tåtor och kirurgisk sax för att ta bort eventuella bindväv och fettvävnad som omger livmoderhorn och vagina samt någon päls i blygdregionen som skulle kunna hindra bildkvaliteten.
Ta bort det breda ligamentet för att tillåta motilitet hos livmoderhornen och tvätta vävnaden två gånger med färska Dulbeccos PBS per tvätt innan du överför det isolerade reproduktionsstället till en 35 millimeters Petriskål som innehåller tre milliliter syresatt Krebs-lösning. För spontan motilitetsavbildning, placera Petri-skålen på en svart yta vid rumstemperatur, och låt 15 till 30 minuter för spontana sammandragningar att börja. När rörelse kan observeras, spela in den spontana livmoderns motilitet i 10 minuter från ett axiellt plan med hjälp av någon typ av digital videoutrustning.
Därefter överför beredningen till en Petri-rätt som innehåller syresatt Krebs buffert kompletterad med testföreningen och antent den spontana livmodermotiliteten i ytterligare 10 minuter på samma sätt. I slutet av inspelningsperioden, tvätta hela reproduktionskanalen i 10 milliliter av Dulbeccos PBS i en 100 millimeter Petriskål, och överföra provet till en ny Petriskål av nysatt Krebs buffert för att bedöma reversibiliteten av behandlingen. Spela in den spontana livmodermotiliteten i ca 10 minuter på samma sätt, som för de två sista inspelningarna.
Överför sedan preparatet till en annan 35 millimeter Petriskål fylld med syresatt Krebs buffert kompletterad med fordonet för testföreningen för att säkerställa att det inte finns några mekaniskt inducerade förändringar i den spontana livmodermotiteten. Den reproduktiva tarmkanalen beredning uppvisade hög motilitet i panelerna A och C i avsaknad av adrenalin. Men denna fenotyp är vilande i panel B med förekomsten av en mikro muller adrenalin.
Här visas en provdataanalys av epinefrinad administrering och spontan motilitetsåterhämtning, som illustrerar hur hormonets effekter på den spontana motiliteten i reproduktionskanalen kan kvantifieras från de inspelningar av vävnaden som tagits före, under och efter testföreningsbehandling. Det är viktigt att undvika att komprimera eller översträcka livmoderhornen annars kommer ingen spontan kontraktilitet att observeras. Vår metod kan också användas för testning av föreningar som kan öka livsligheten i livmodern.
Detta förfarande kan tillämpas på gravida mus uteri i de tidigare stadierna av graviditeten. Detta experiment har potential att uppgraderas till en sex väl plattan format för genomströmning drog screening.
Please enter your institutional email to check if you have access to this content
has access to
BackLogin to access JoVE
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
To receive a free trial, please fill out the form below.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You
Thank You
Thank You
CH
DE