Biology
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大西洋サケにおける亜鉛の例を用いた相補的方法を用いた魚飼料の鉱物供給率の評価
Chapters
Summary October 29th, 2021
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この記事では、大西洋サケのマイクロミネラルの可用性を評価するための体系的なアプローチを詳細に説明します。この方法論には、生物学的複雑性を持つツールとモデルが含まれています:(1)化学種分分析、(2)体外溶解度、(3)細胞株の取り込み研究、および(4)生体魚の研究。
Transcript
我々は、供給組成の変化という文脈で、異なる化学形態または供給源を有する亜鉛セレンのような微金属の溶解性の入手可能性を研究した。放射性核種スイートでは、約0.2グラムの地上大西洋サケ飼料サンプルを計量し、5ミリリットル体積サンプルチューブ内の既知の特定活性の亜鉛放射性トレーサーと混合します。バッファーの他の 6 つのアリコートを準備し、5 ミリモルの最終的なモル濃度に到達するためにここに示すアミノ酸の 1 つを追加します。.
サンプルを供給するために淡水腸の発光バッファーを追加します。次に、アミノ酸を含む緩衝アリコートに淡水腸発光バッファーを加える。チューブを閉じ、25 RPMの回転スピナーで30分間回転させます。
次いで、遠心分離機を1、157xgで10分間、可溶性及び非可溶性の画分を分離する。ガンマテラーを使用して、可溶性および非可溶性の分率における亜鉛ラジオトレーサの1分あたりの数を測定します。虹のマス由来の腸細胞株を1ミリリットルのEDTA溶液で2回洗浄し、ピペットを使用して各洗浄後に溶液をサイフォンアウトします。
洗浄した細胞を0.25%トリプシン溶液で処理します。フラスコを鋭角で2分間軽く回転させます。その後、5%FBSを含むL-15培地の10ミリリットルを加え、トリプシンを中和します。
滅菌ピペットを使用して、得られた細胞懸濁液を円錐底遠心管にデカントする。遠心分離機で130×Gで3分間。次に、ヘモサイトメーターを使用して、手動カウントによって採取した細胞の密度を決定する。
細胞を1ミリリットル当たり50,000個の細胞密度で24ウェルプレートに播種し、実験前に48時間、通常の雰囲気下で摂氏19度でプレートをインキュベートします。魚に11日間餌を与え、安楽死させた後、腹側のひれからアヌスに剥がして魚の便のプールされたサンプルを集め、皿の上に置きます。へらを使用して、プレートから50ミリリットルの円錐管に便を移します。
すぐに20°Cでサンプルを保存します。本研究では、魚の飼料のミネラルの入手可能性は、いくつかの無料の方法を使用して評価されます。大西洋サケ飼料の代表的な分析は、誘導結合プラズマ質量分析法を介したサイズ排除クロマトグラフィーを介して、可溶性分率に見られる亜鉛化学種に関するデータを提供する。
ピークを含む5つの亜鉛は、それぞれ異なる分子量を有するこの画分で見ることができる。使用される飼料は海洋系と植物系の両方の成分を含み、補充されるため、可溶性分率に見られる亜鉛化学種は、異なる供給源を有することができる。これらの種の分子量範囲は、これらの化合物がメタロタンパク質である可能性を示唆している。
添加亜鉛65の溶解度は、試験された全てのアミノ酸の存在を増加させる一方で、ヒスチジンおよびリジンでより高い溶解性が見られる。アルテカGC細胞におけるアピカル亜鉛取り込みは、L-MetまたはDL-Metが2ミリモル濃度で存在することによって有意に影響を受ける。さらに、亜鉛取り込みにおけるメチオニンの影響は、BCHの存在によって悪影響を受ける。
このプロトコルの主な利点は、鉱物の可用性を研究することになると比較し、お互いを補完するために、視覚的、分析的、およびinvivo研究で異なるアプローチを組み合わせることです。
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