A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Murine Appendectomy Модель хронический колит связанный колоректальный рак по точной локализации Caecal патч
Chapters
Summary August 24th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Представленный протокол описывает легкое хирургическое удаление аппендикса (кейкальный патч) в мыши с последующим индукцией воспалительных заболеваний кишечника, связанных колоректального рака. Эта модель аппаратной системы мурин позволяет иссмотреть биологическую роль аппендикса в патогенезе желудочно-кишечного заболевания человека.
Transcript
Общий протокол описывает легко выполняемые хирургические процедуры удаления аппендикса, известного как кекальный пластырь у мышей. Модель аппендэктомии мурина может быть использована для изучения биологических ролей аппендикса при патогенезах желудочно-кишечных заболеваний человека. Человеческий аппендикс является спорным органом.
Недавние исследования показали, что приложение играет важную роль в поддержании здоровья кишечника. Для изучения биологической функции аппендикса крайне важно создать связанную с болезнью модель аппендэктомии животных. В этом протоколе мы опишем простые и безопасные хирургические шаги по удалению аппендикса, известного как кекальный пластырь у мышей.
Для обеспечения успеха этой модели, Есть три ключевых шага, как вы увидите в следующем видео. Во-первых, найти caecum мышей до операции. Во-вторых, сделать небольшой разрез в брюшной полости.
В-третьих, дезинфицировать и закрыть пень caecum. Первая часть, аппендэктомия мышей. Подготовка стерильных хирургических инструментов и чистящих средств перед операцией.
Анестезировать и обеспечить мышь на платформе в положении на спине, поместив четыре полосы медицинской клейкой лентой через конечности, чтобы предотвратить постуральное движение во время операции. Аккуратно коснитесь всего живота мыши, чтобы найти ощущение удара. Обложка драпировки и дезинфицировать бритую область живота мыши как можно более широко, используя два раза энтоиодина.
Сделайте продольный разрез в диапазоне от 0,5 сантиметра до одного сантиметра в средней линии живота. В соответствии с предопределенным расположением caecum, искать caecum и осторожно экстерьера его примерно на один сантиметр длиной, чтобы определить caecal патч. Используйте предварительно разогретый и стерильный физиологический солевой раствор для увлажнения кишечника.
Для предотвращения потенциальных осложнений послеоперационного кровотечения и инфекции, ligate мезентерических кровеносных сосудов caecum с помощью 8-0 Шов. Гидрат caecum с солевым раствором. Отметьте область ресекции с помощью шов 4-0 с открытой петлей вблизи вершины кекума в проксимальной толстой кишке.
Отрежьте кекальный патч ниже отмеченной ресекции с помощью микро-ножниц и уничтожить остаточный caecal содержание с медицинской ватные тампоны. Дезинфицировать пень caecum с энтоиодином. Закрыть пень с работает шов с помощью 8-0 Шов.
Аккуратно удалите петлю потока 4-0, ранее используемую для маркировки ресекции на пне caecum. Стерилизовать заулное положение с помощью энтоиодина. Увлажнить режущей области с солевым раствором.
Закройте слой мускулатуры бегущим швом с помощью 8-0 шовная нить. Закройте слои кожи с помощью прерванных швов с 4-0 шовной нитью. Дезинфицировать хирургический разрез дважды энтоиодином.
Затем удалите йод с помощью 75%медицинского спирта. Аккуратно переверните мышь назад. Подкожно вводят 0,1 миллиграмма на килограмм массы бупренорфина и 0,4 миллилитров физиологического солевого раствора.
И покоим мышь на тепловой площадке, пока она не вернется в сознание. Положите мышь обратно в стерильную клетку, и внимательно следить за мышью для признаков боли в течение трех дней после операции, чтобы обеспечить его восстановление. Вторая часть: Индукция колит-ассоциированного колоректального рака с азоксиметаном, AOM, и Декстран Сульфат натрия, DSS, семь дней после аппендэктомии.
Оттепель один aliquot AOM и разбавить его до 1 миллиграмма на миллилитр с помощью 0,9% нормального солевого раствора. Весь процесс подготовки осуществляется в дымовой капот. Растворите четыре грамма порошка DSS в 200 миллилитров autoclaved раствор воды для подготовки 2%DSS.
Каждая клетка содержит пять мышей. Сделайте внутриперитонеальную инъекцию AOM с 0,01 миллилитра на грамм на мышь, основываясь на его весе. Замените автоматическую воду на 2%DSS в течение пяти дней.
Мышей будут кормить автоклавной водой в течение дополнительных двух циклов. Третья часть:Результаты. Результаты Flow и ELISA свидетельствуют об успешном удалении патча caecal.
Эта процедура может способствовать значительному сокращению IgA-специфических плазменных клеток, очевидное изменение секреторий IgA в толстой кишки, по сравнению с 3%DSS, который имеет высокий уровень смертности и значительное изменение веса из-за тяжелой кровавый стул, анус пролапс, и брюшной abcess. 2%DSS подходит для всего процесса для его высокой выживаемости почти до 80% и разумное изменение веса как в фиктивных и аппендэктомии групп. Как показано на этих изображениях, мы успешно индуцированных колит связанных колоректальных опухолей.
На изображениях окрашивания Н И Э черная стрелка указывает на слизистую язву, наконечник стрелы указывает на аденокарциному, а белая стрелка указывает на инфильтрацию нейтрофила между железами. Различные стадии аденокарциномы можно увидеть как в фиктивных, так и в аппендицитных группах. Эта экономически эффективная модель аппендэктомии Murine может быть использована для ответа на некоторые важные вопросы, такие как: какова роль приложения в регуляции кишечных бактерий и как он участвует в иммунном ответе в кишечнике связанных лимфоидной ткани.
Помните, что, чтобы избежать повреждений в адгезии кишечника, предварительное расположение caecum и небольшой разрез кожи имеют важное значение. Кроме того, мы использовали 2%DSS, чтобы вызвать колит. Но более высокая концентрация DSS может быть использована для других штаммов мышей.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
