Behavior
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Automatisert Rat single-pellet nå med 3-dimensjonal rekonstruksjon av Paw og sifret baner
Summary July 10th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Gnager dyktige nå brukes ofte til å studere fingernem ferdigheter, men krever betydelig tid og krefter på å gjennomføre oppgaven og analysere atferden. Vi beskriver en automatisert versjon av dyktige nå med Motion Tracking og tredimensjonal rekonstruksjon av nå baner.
Transcript
Denne metoden bygger på etablerte rotte dyktige nå protokoller for å automatisere trening og testing gir en effektiv måte å skaffe store datasett relativt raskt. Det minimerer eksperimentererinnsats samtidig som den tillater tredimensjonal rekonstruksjon av forbenskinematikk. Kinematikken kan brukes til å evaluere effekten av nøyaktig tidsinngrep eller korrelert med fysiologiske opptak.
Med noen justeringer kan denne teknikken også brukes i mus. Begynn med å slå på lysene og plasser rotten i et dyktig kammer. Bruk tang til å holde en pellet gjennom den nånde sporet foran på esken.
La rotten spise tre pellets fra tangene. Trekk pelleten tilbake neste gang rotten prøver å spise pelleten fra tangen og gjenta til rotten når for pelleten med en pote mest ut av 11 når indikerer potepreferanse. Deretter justerer du pelletleveringsstangen etter siden av den nånde sporen kontralaterale til rottens foretrukne pote.
Plasser en pellet på leveringsstangen. Bruk deretter tang til å lokke rotten med pelleten, men rett rotten mot leveringsstangen slik at poten treffer pelleten på stangen. Etter at rotten har forsøkt 10 når til leveringsstangen uten å bli baited, gå rotten til neste fase.
Deretter plasserer du pelletleveringsstangen basert på rottens potepreferanse og setter den til å plassere to. Still inn høydeposisjonen til pelletens leveringsstang ved hjelp av aktuatorfjernkontrollen. Når leveringsstangen er i riktig høyde, holder du nede ønsket nummer til lyset blinker rødt for å stille inn.
Legg deretter rotten i kammeret og agn rotten til ryggen med en pellet. Når rotten beveger seg langt nok til baksiden av kammeret at den ville bryte den infrarøde strålen hvis den automatiserte versjonen kjørte, flytt pelletleveringsstangen til posisjon tre. Til slutt, vent til rotten skal strekke seg etter pellet og deretter flytte pellet leveringsstangen tilbake til posisjon to.
Plasser en ny pellet på leveringsstangen hvis den er slått av. Gjenta disse trinnene gradvis baiting rotten mindre og mindre til rotten begynner å en, flytte til baksiden for å be om en pellet uten å bli baited, og to, umiddelbart flytte til forsiden etter å ha bedt om en pellet i ryggen. Etter at rotten har gjort dette 10 ganger, begynn å trene på den automatiserte oppgaven.
For å sette opp det automatiserte systemet, slå på lysene i kammeret og fyll pelletreservoaret. Plasser pelletsleveringsstangen i henhold til rottens potepreferanse. Kontroller at aktuatorposisjonene er riktig innstilt.
Deretter slår du på datamaskinen og åpner det dyktige programmet. Skriv inn rotte-ID-nummeret under emne, og velg potepreferansen fra rullegardinmenyen for hånden. Angi lagringsbanen for videoene.
Angi deretter økttiden og antall maks videoer. Sett pellet løft varighet også og aktivere tidlig rekkevidde straff. Deretter, for å ta kalibreringsbilder, plasser hjelpende hånd inne i det nånde kammeret og poke alligatorklemmen gjennom det nånde sporet.
Hold kuben foran det nånde sporet med alligatorklemmen. Plasser deretter kuben slik at den røde siden vises i toppspeilet, den grønne siden i venstre speil og den blå siden i høyre speil. Kontroller at roi-terskelen er satt til en svært stor verdi i atferdsprogrammet.
Klikk på løpeknappen, og når kameraet initialiserte knappen blir grønn, trykker du på start for å starte videoinnhenting. Klikk På Belegg modus og ta deretter et bilde ved å klikke Ta cal image. Flytt kuben litt og ta et annet bilde.
Gjenta på nytt for totalt tre bilder. Til slutt stopper du programmet ved å klikke stopp og deretter klikke stopptegnknappen. Fjern hjelpende hånd og kube fra esken.
Vær forsiktig så du ikke støter på noe i atferdskammeret etter at kalibreringsbilder er tatt den dagen. Først plasserer du rotten i det dyktige kammeret. Klikk på den hvite pilen for å kjøre programmet.
Angi deretter posisjonen til avkastningen for potedeteksjon ved å justere x offset, y offset, ROI-bredde og ROI-høyde. Plasser avkastningen i sidespeilet som viser dorsum av poten rett foran nå sporet og klikk start for å starte programmet. Selv om rotten ikke når, justerer du terskelverdien for lav avkastning til live ROI-utløserverdien svinger mellom null og én.
Deretter setter du roi terskelen til å være betydelig større enn live ROI trigger verdi under nesen pokes og lavere enn live ROI trigger verdi når rotten når. Juster til videoer utløses konsekvent når rotten når, men ikke når den stikker nesen gjennom sporet. Overvåk de første forsøkene for å sikre at alt fungerer som det skal.
Når en rotte når før du ber om en pellet, observere tidlig når antall økning. Når en rotte når etter å ha bedt om en pellet, må du observere videonummeret øke mens en kopi av videoen lagres som en hyllefil. Til slutt, etter at økttiden eller maks antall videoer er nådd, trykker du på stoppskiltknappen.
Resultatene indikerer at etter 20 dager får rotter den dyktige oppgaven. Her vises rekkeviddebanene fra en enkelt økt. Dette representerer bare første pote avansement for enkel presentasjon.
Videre, hvis potedeteksjonsutløseren ikke er nøyaktig innstilt, er det betydelig variasjon i rammen der poten bryter med nåsporet som kan føre til variasjon når intervensjoner utløses under å nå bevegelser. Annet enn nøye håndtering av dyrene, vil ingen forholdsregler bli tatt i denne protokollen. Det er viktigst å angi roi terskelen riktig slik at videoer eller andre intervensjoner utløses på de aktuelle øyeblikkene.
Denne metoden kan kombineres med flere andre teknikker som optogenetikk, kalsiumavbildning og genetiske modeller som kan ta opp spørsmål som spenner fra grunnleggende motorkontroll til bevegelsesforstyrrelsesveiofysiologi. Denne teknikken tillater korrelasjon av detaljert rekkevidde og forstå kinematikk med fysiologiske opptak eller intervensjoner slik at forskere kan svare ikke bare hvis, men hvordan bevegelser endres med nevrale kretser endres.
Please enter your institutional email to check if you have access to this content
has access to
BackLogin to access JoVE
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
To receive a free trial, please fill out the form below.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You
Thank You
Thank You
