Behavior
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Automatiserad råtta Single-pellet nå med 3-dimensionell rekonstruktion av Paw och Digit banor
Summary July 10th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Gnagare skickliga nå används ofta för att studera skicklig färdigheter, men kräver betydande tid och ansträngning för att genomföra uppgiften och analysera beteendet. Vi beskriver en automatiserad version av kompetent sträcka med rörelsespårning och tredimensionell rekonstruktion av Reach-banor.
Transcript
Den här metod bygger på etablerad råtta skicklig nå protokollen till automatisera bildning och provande skaffa en effektiv medel till förvärva stor datan sätter relativt snabbt. Det minimerar experimenter ansträngning samtidigt som tredimensionell rekonstruktion av framben kinematik. Kinematiken kan användas för att utvärdera effekterna av exakt tidsenliga interventioner eller korrelerade med fysiologiska inspelningar.
Med vissa justeringar kan denna teknik också appliceras i möss. Börja med att slå på lamporna och placera råttan i en skicklig nå kammare. Använd tents för att hålla en pellet genom den nånde springan på framsidan av lådan.
Låt råttan äta tre pellets från tåtorna. Dra pelleten tillbaka nästa gång råttan försöker äta pelleten från tråckorna och upprepa tills råttan sträcker sig efter pelleten med en tass mest av 11 når indikerar tass preferens. Därefter justera pelleten leveransstången med sidan av den nånde springan kontralateral till råttans föredragna tass.
Placera en pellet på leveransstången. Använd sedan tåtan för att bete råttan med pelleten men rikta råttan mot leveransstaven så att dess tass träffar pelleten på stången. Efter råttan har försökt 10 når till leveransstången utan att vara agnade, föra råttan till nästa fas.
Därefter placerar pelleten leveransstången baserat på råttans tass preferens och ställ in den på position två. Ställ in höjdläget för pelletsleveransstången med hjälp av manöverdonets fjärrkontroll. När leveransstången är i rätt höjd håller du ner önskat nummer tills lampan blinkar rött för att ställa in.
Placera sedan råttan i kammaren och bete råttan på baksidan med en pellet. När råttan rör sig tillräckligt långt till baksidan av kammaren att det skulle bryta den infraröda strålen om den automatiserade versionen var igång, flytta pelleten leveransstav till position tre. Slutligen, vänta på råttan att nå för pelleten och sedan flytta pelleten leveransstången tillbaka till position två.
Placera en ny pellet på leveransstången om den slås av. Upprepa dessa steg gradvis baiting råttan mindre och mindre tills råttan börjar till en, flytta till baksidan för att begära en pellet utan att vara agnade, och två, omedelbart flytta till fronten efter att ha begärt en pellet i ryggen. Efter råttan har gjort den här 10 tiden, börja bildning på den automatiserat uppgiften.
För att ställa in det automatiserade systemet, tänd lamporna i kammaren och fylla på pelletsbehållaren. Placera pelletens leveransstång enligt råttans pantspreferens. Kontrollera att ställdonspositionerna är rätt inställda.
Därefter slår du på datorn och öppna den skickliga nå programmet. Ange rat ID-nummer under ämne och välj paw-preferensen från hand dropdown-menyn. Ange sparsökvägen för videorna.
Ställ sedan in sessionstiden och antalet maxvideoklipp. Ställ in pelletslyftens längd också och möjliggör tidig räckviddsstraff. Nästa, för att ta kalibreringsbilder, placera den hjälpande handen inuti den nånde kammaren och peta alligatorklippet genom den nånde kortplatsen.
Håll kuben framför den nånde springan med alligatorklämman. Placera sedan kuben så att den röda sidan visas i den övre spegeln, den gröna sidan i den vänstra spegeln och den blå sidan i den högra spegeln. I beteendeprogrammet, se till att tröskelvärdet för avkastning på investeringen är inställd på ett mycket stort värde.
Klicka på körknappen och när kameran initieras knappen blir grön, tryck på start för att börja video förvärv. Klicka på Cal Mode sedan ta en bild genom att klicka ta Cal Image. Flytta kuben något och ta en annan bild.
Upprepa igen för totalt tre bilder. Slutligen, stoppa programmet genom att klicka på stopp och klicka sedan på stoppskylten knappen. Ta bort den hjälpande handen och kuben från lådan.
Var noga med att inte stöta något i beteendekammaren efter kalibreringsbilder har tagits den dagen. Först placerar du råttan i den skickliga nå kammaren. Klicka på den vita pilen för att köra programmet.
Ställ sedan in positionen för roi för paw-avkänning genom att justera x offset, y offset, ROI-bredd och ROI-höjd. Placera ROI i sidospegeln som visar tassens dorsum direkt framför den nånde springan och klicka på Start för att börja programmet. Medan råttan inte når, justerar du tröskelvärdet för låg ROI-tröskel tills live-AVKASTNINGSUTLÖSARvärdet pendlar mellan noll och en.
Ställ sedan in tröskelvärdet för ROI att vara betydligt större än värdet för live ROI-utlösare under näs petar och lägre än värdet för live ROI-utlösare när råttan når. Justera tills videor konsekvent utlöses när råttan når men inte när den petar näsan genom facket. Övervaka de första försöken för att säkerställa att allt fungerar korrekt.
När en råtta når innan du begär en pellet, observera de tidiga når antalet öka. När en råtta når efter att ha begärt en pellet, observera videorna antalet öka medan en kopia av videon sparas som en bin-fil. Slutligen, efter sessionen tid eller max antal videor har nåtts, tryck på stoppskylten knappen.
Resultaten visar att efter 20 dagar, råttor förvärva skickliga nå uppgiften. Här visas räckviddsbanorna från en enda session. Detta representerar endast inledande paw avancemang för enkel presentation.
Vidare, om avtryckaren för att upptäcka tass inte är korrekt inställd, finns det betydande variationer i den ram där tassen bryter mot den nånde springan som kan leda till variationer i när ingripanden utlöses under att nå rörelser. Annat än noggrann hantering av djuren kommer inga försiktighetsåtgärder att vidtas i detta protokoll. Det är viktigast att ange tröskelvärdet för avkastning på investeringen korrekt så att videor eller andra ingripanden utlöses vid lämpliga ögonblick.
Denna metod kan paras ihop med flera andra tekniker såsom optogenetik, kalciumavbildning, och genetiska modeller som kan ta upp frågor som sträcker sig från grundläggande motorisk kontroll till rörelsestörning patofysiologi. Denna teknik tillåter korrelation av detaljerad räckvidd och grepp kinematik med fysiologiska inspelningar eller interventioner som gör det möjligt för forskare att svara inte bara om men hur rörelser förändras med neurala kretsar förändringar.
Please enter your institutional email to check if you have access to this content
has access to
BackLogin to access JoVE
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
To receive a free trial, please fill out the form below.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You
Thank You
Thank You
