Isolering af intakt øjeæblet for at opnå integreret okulær overflade væv til histologisk undersøgelse og immun histokemi

Vores laboratorium fokuserer på okulær udvikling og sygdomme. Denne protokol beskriver en metode til at fjerne kraniet og orbital knogler sekventielt fra dissekeret musehoved. Forlader øjenlåg, okulær overflade, linse, og nethinden alle sammen i ét stykke. Protokollen vil gavne øjenlæger, der er interesseret i okulær overflade didaktika. Jeg er Dianlel Guo, at fortælle teknikken med en sandsynlig kamp, når de forsøger at undgå den skadelige af øjeæblet, mens dissekere ansigtet knogler. Den største fordel ved denne dissektion spørgsmål er, at integriteten af den okulære overflade epitel ark er velbevaret og de forskellige dele af den okulære overflade kan undersøges ved histologi eller immunstaining i en enkelt sektion. Sørg for at afskære alle små knogler og snavs ud af det bløde væv. Årsag, vil det forårsage ar mærker på væv sektion ellers. Efter euthanizing musen, skal du bruge en lige saks til at afskære hovedet og gennemskære det langs sagittal midterlinjen begynder ved intraparietal knogle rostrally til næsehulen. Placer hver halvdel af bisected hovedet i en ren petriskål og bruge skarpe saks til at afskære kæben og tungen. Frigør synsnerven ved at afskære den hjernen før den optiske chiasm placering. Og fjern alle hjernevæv, herunder olfaktoriske pære, som er fastgjort til kraniet væggen. Nu skal alle de resterende væv have alle kraniet og orbital knogler forbundet med øjeæblet. Vask de resterende dele med PBS for at rense eventuelle blod- og hårrester. Forrettevævet ved at anbringe det i et 50 milliliterrør indeholdende 4% paraformaldehyd og dreje dem ved stuetemperatur. Når præfikset er færdigt, vaskes det dissekerede hoved hurtigt i PBS tre gange for yderligere at fjerne de knuste hår og fikse midler. Placer vævet i en 10 centimeter petriskål og skær kraniet i tre dele langs de planer, der er angivet i figur et af tekstprotokollen. Øjeæblet og soklen er skjult i den midterste del af kraniet under ethmoid, frontal, og maxillary knogler. Brug to par nummer fire lige kraftglede til at skrælle ethmoid knoglen og fuldt eksponere frontale og maxillary knogler. Derefter geografisk opdele kraniet overflade i fire områder. Sæt spidsen af buede tang vandret ind i hvert område for at fjerne maxillary og frontal knogler sekventielt. Efter dette, vil de underliggende lacrimal og jugal knogler blive udsat. Fjern de to knogler og tilhørende subkutane muskler og fedtstoffer omkring øjeæblet. Trim øjeæblet med påsatte øjenlåg og hud i en lille, firkantet blok for at reducere vævsvolumen og lette orientering af vævet, når indlejring. Placer øjeæblet og tilhørende væv tilbage i 4% paraformaldehyd og fortsætte med at fastsætte natten over på 4