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Modelo cirúrgico murino de elastase tópica induzida por aneurisma de aorta torácica descendente

Coculture System with an Organotypic Brain Slice and 3D Spheroid of Carcinoma Cells

Journal (Medicine)

Coculture System with an Organotypic Brain Slice and 3D Spheroid of Carcinoma Cells

Study of In Vivo Glucose Metabolism in High-fat Diet-fed Mice Using Oral Glucose Tolerance Test (OGTT) and Insulin Tolerance Test (ITT)

Journal (Medicine)

Study of In Vivo Glucose Metabolism in High-fat Diet-fed Mice Using Oral Glucose Tolerance Test (OGTT) and Insulin Tolerance Test (ITT)

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Modelo cirúrgico murino de elastase tópica induzida por aneurisma de aorta torácica descendente

Article DOI: 10.3791/60105-v • 08:33 min

August 24th, 2019 •

Zachary Tyerman¹, Jolian Dahl¹, Alexander Shannon¹, W. Forrest Johnston², Nicholas H. Pope¹, Guanyi Lu³, Gilbert R. Upchurch Jr.³, Gorav Ailawadi^1,4, Morgan Salmon¹

¹Department of Surgery, University of Virginia School of Medicine, ²Department of Surgery, Ochsner Medical Center, ³Department of Surgery, University of Florida, ⁴The Robert M. Berne Cardiovascular Research Center, University of Virginia School of Medicine

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August 24th, 2019

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Nós descrevemos um protocolo cirúrgico para induzir consistentemente aneurismas aórticos torácicos de descida robustos nos ratos. O procedimento envolve a toracotomia esquerda, a exposição da aorta torácica e a colocação de uma esponja embebida em elastase pancreática suína na parede aórtica.

Transcript

Este protocolo é capaz de produzir aneurismas de aoórtico torácico robustos de tamanho e localização consistentes em camundongos e serve como um guia para acesso seguro ao baú murino. Este protocolo é um método simples e consistente para produzir aneurismas de aoórtico torácico em camundongos durante uma quantidade razoável de tempo em comparação com outros modelos. Depois de confirmar um nível apropriado de sedação em um rato c57 preto c57 macho de oito a dez semanas de idade, coloque o mouse na posição de decúbito lateral direito e tape o braço direito rostrally para que a pata dianteira esteja alinhada com o nariz.

Puxe a cauda caudaly para criar uma linha de tensão entre o braço direito e a cauda, produzindo extensão da coluna vertebral, e tape a perna esquerda em sua posição natural. Em seguida, fita o braço esquerdo ventrally sobre gaze enrolada. Antes de iniciar o procedimento, use cortadores para raspar o flanco esquerdo do ombro esquerdo até o abdômen esquerdo.

Use um aplicador de ponta de algodão para escovar a primeira solução betadyne, depois 70% de etanol sobre o local cirúrgico. Quando a pele estiver seca, coloque uma cortina estéril sobre o animal. Faça uma incisão lateral de dois centímetros no ponto médio do hemotórax e use eletrocauteria portátil para dividir as camadas musculares até que as costelas sejam visíveis.

Sob ampliação de 10 a 15x, cauterize diretamente uma porção de dois milímetros entre as costelas e use um aplicador de ponta de algodão fino e molhado salino no espaço da costela, a fim de dissecar no espaço pleural através da porção cauterizada. Coloque uma esponja salina molhada, três por dois milímetros no tórax para ajudar a colapsar o pulmão. Em seguida, use a tesoura para ampliar a toracotomia até que o diafragma seja visível ventrally e a incisão esteja a vários milímetros de distância dos músculos paraspinus dorsalmente.

Para expor a aorta, coloque os retráteis da costela na incisão da toracotomia e remova cuidadosamente a esponja da superfície do pulmão. Cubra o pulmão com uma esponja salina molhada, seis por quatro milímetros com as extremidades apontando rostrally e caudally e coloque um retrátil de pulmão largo e plano na esponja. Em seguida, deslize suavemente o retrátil ventrally até que a aorta torácica descendente seja exposta e use fórceps número sete para dissecar uma seção de aproximadamente cinco milímetros de tecido conjuntivo e gordura da aorta.

Para aplicar a elastase, primeiro, use uma micropipette para saturar uma esponja de 0,5 por um milímetro com 12 microlitros de elastase pancreática porcina e coloque a esponja sobre a superfície exposta da aorta. Após três a cinco minutos, use o número sete fórceps para remover a esponja decorrido e remover o retrátil pulmonar. Irrigar a cavidade torácica com aproximadamente metade de um mililitro de soro fisiológico estéril.

Remova a esponja pulmonar e use um pedaço de gaze de duas por duas polegadas enrolada para absorver a irrigação salina restante. Remova os retráteis da costela e deponha as costelas com três suturas não absorvíveis interrompidas de seis oh, amarrando um nó solto em cada sutura sem amarrar as suturas para baixo. Depois de reinflar o pulmão, amarre as suturas e reaproximar as camadas musculares com uma sutura trançada de cinco por dia.

Feche a pele com sete a 10 suturas não absorvíveis interrompidas. Em seguida, monitore o animal até a completa recumbência. No ponto final experimental apropriado, use uma tesoura para incisar a pele medianamente do flanco esquerdo para o abdômen central, tomando cuidado para não entrar no peritônio.

Incisar a pele do flanco esquerdo dorsal rostrally até o ombro esquerdo e fazer uma incisão em um ângulo de 90 graus através da axila até o esterno. Usando cautery, disseque a aba da pele em direção ao aspecto ventral do camundongo para expor o hemotórax esquerdo e use uma tesoura para entrar no abdômen ao longo da margem costeira esquerda da direção ventral para dorsal para expor a parte inferior do diafragma esquerdo. Se a borda lateral-mais do diafragma não abrir, inciso o diafragma em sua borda mais lateral.

Colocando a ponta do cautery neste buraco, cauterize o diafragma da margem costeira para o processo xifoide e use um aplicador de ponta de algodão úmido e fino para libertar suavemente o pulmão de quaisquer aderências à parede torácica. Ao mesmo tempo em que garante que o pulmão esteja fora do caminho, use eletrocauteria para cortar as costelas e a parede torácica da margem costeira até a primeira costela, dorsal até a linha do meio da axilar, mas pelo menos dois milímetros da aorta. Corte ao longo da margem superior da primeira costela e reflita a caixa torácica ventrally para expor o hemotórax.

Coloque os retratores no pulmão e puxe medialmente. Coloque um retraído ou uma gaze salina molhada no diafragma e desenhe caudally para expor o máximo possível da aorta. Use um aplicador seco com ponta de algodão para remover quaisquer aderências do aneurisma de aoórtico e de um segmento distal não afetado e use micrometria de vídeo para medir o diâmetro do segmento de controle não afetado e a porção mais ampla do aneurisma tratado com elastase.

Para colher a aorta, segure o vaso com fórceps apenas distal ao segmento tratado e use uma tesoura para cortar distal aos fórceps. Dissecar a aorta fora da coluna vertebral e cortar o vaso proximal ao segmento tratado para remover o tecido aneurismal. Em seguida, usando uma seringa tuberculina e agulha, lave o lúmen aórtico com soro fisiológico e processe a amostra de acordo com a análise experimental planejada a jusante.

Os aneurismas torácicos desenvolvidos como fusiforme em forma e ocorrem apenas na porção tratada na aorta. Nesta medição representativa da micrometria de vídeo, a dilatação aórtica foi determinada como sendo de 130% na colheita de tecidos. De fato, enquanto os camundongos tratados com elastase apresentam um aumento significativo na dilatação aórtica nos dias três, sete, 14 e 21 pós-tratamento com a dilatação máxima observada no dia 14 em comparação com o controle de ratos do tipo selvagem.

A análise histológica revela que aneurismas do tipo selvagem têm fibras de elastina finas e fragmentadas. Há também uma coloração celular muscular menos lisa com um aumento na expressão de macrófago e interlucina um-beta. O pulmão murino é extremamente delicado, e a lesão geralmente é fatal.

Tome o máximo cuidado com a entrada inicial no peito e só manipule o pulmão com esponjas molhadas com soro fisiológico. Este modelo ajudou a elucidar o papel de interlukin um-beta e interlucina seis na patogênese de aneurismas aórticos torácicos descendentes e como seu bloqueio poderia facilitar o manejo não cirúrgico desses aneurismas.

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