Biology
This content is Open Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Et blodfritt kosthold for å bak anopheline mygg
Chapters
Summary January 31st, 2020
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
En protokoll presenteres for formulering av et blodfritt kunstig kosthold for å mate Anopheles mygg i fangenskap. Denne dietten har en lignende ytelse til virveldyr blod og utløser oogenese og egg modning og produserer levedyktig voksen avkom.
Transcript
Malariaparasitter som møtt av mygg som spiller en viktig rolle på spredningen av sykdommen. Så langt har det vært umulig å oppdra malaria mygg uten blod. Og for å overvinne denne begrensningen beskriver vår protokoll en bloderstatning diett som er i stand til å støtte myggavl i insektet.
Bruken av blodfri diett er svært fordelaktig over blod. Et blodfritt kosthold har ikke de etiske begrensningene som bruk av menneskelig blod, eller eksperimentelle dyr. Å erstatte dyr på eksperimentering er en del av vår tre R-politikk.
Erstatt, reduser, finjuster. Ikke bruker blod reduserer kostnadene, og logistikken forbundet med innsamling, lagring og vedlikehold av rødt blod. Bruken av kunstige dietter kan lette testing av antiplasmodiummolekyler.
Til nå har vi testet våre dietter ved hjelp av forskjellige anopheles arter. I dem alle var dietten godt oppslukt av hunnene og tillot eggproduksjon og legging. Vi tror denne dietten har potensiell bruk for oppdrett av andre myggarter.
Faktisk tester vi det nå for aedes, en vektor av mange sykdommer som denguefeber, zikavirus eller gul feber. Opprettholde anopheles coluzzii yaonde belastning mygg i et rom på 26 grader Celsius, 75% fuktighet, og under en 12 time til 12 timers lys mørk syklus. Hus mygg ved hjelp av standard insektforhold i et enkelt bur for å garantere parring.
Bruk en plastpipette til å samle myggpuss i en liten vannbeholder. Plasser beholderen inne i et myggbur for å la voksne mygg dukke opp og kompis. Gi 10% glukosefôringsløsning i buret.
Tre dager etter fremveksten, bruk en aspirator for å samle det nødvendige antallet kvinner fra aksjeburet til en papirkopp. For å skille, kvinner er større og menn har en bredere og fjærlett proboscis. En dag før fôring stier, fjerne 10% glukose fôring løsning.
Neste dag, forberede kunstige flytende dietter under sterile forhold i laminær strømningskabinett i henhold til manuskriptet. Tilsett alle ingrediensene i et plastrør. Bland alle ingrediensene grundig og filtrer med et 0,45 mikrofilter.
Fyll en steril 1 milliliter sprøyte utstyrt med en 27 gauge halv tommers nål med 100 mikroliter på ett mg per milliliter heparin. Deretter bedøve seks til åtte uker gamle CD en hunnmus med ketamin og xyazin ved hjelp av intra peritoneal rute. Evaluer om musen viser noen muskelreaksjon og respons på forskjellige fysiske stimuli.
Utfør hjertepunkteringen. Samle deretter blod fra musen inn i et mikrorør og opprettholde blod på 37 grader Celsius i et vannbad. Deretter samler du ca 30 kvinnelige mygg fra aksjeburet ved hjelp av en aspirator.
Overfør de kvinnelige myggene til 500 milliliter papirkopper og dekk med et fint myggnett slik at de ikke kan unnslippe. Strekk parafilmmembranen over munningen av glassmateren for å inneholde måltidet. Påfør et glass klokke kunstig fôring apparater koblet til plastrør til toppen av hver kopp.
Gi en konstant vannstrøm til sylindriske rør og mater slik at temperaturen innenfor holdes på omtrent 37,5 grader Celsius. Påfør en milliliter førkrigsflytende diett ved 37 grader Celsius eller friskt museblod i en glassmater. Mate myggene i 60 minutter i mørket i 26 grader Celsius.
Etter kunstig fôring bedøver du myggene ved 20 grader Celsius i 30 sekunder. Deretter legger myggene i en nedkjølt petriskål. Registrer antall fullt engorged kvinnelige mygg.
Skill 30 fullt oppslukt kvinner og sette dem på et nytt bur. Plasser nå et fuktet filterpapir nederst i hvert bur. Hold myggene på 26 grader Celsius, 75% fuktighet, og under en 12 time til 12 timers lys mørk syklus med 10% glukose annonse libitum.
Ved 96 timer og 120 timer etter fôring teller eggene ved hjelp av et håndholdt forstørrelsesglass. Oversvømme filterpapiret med destillert vann for å samle eggene i skuffer fylt med destillert vann. Mate larvene daglig med ca 13 milligram malt fisk mat per brett.
Fjern døde pupper og larver med en plastpipette daglig. Når alle pupper har utviklet seg til voksne, telle antall voksne menn og kvinner, registrere datoene for klekking og død, og beregne dødeligheten. For å teste for lang levetid, samle 15 voksne menn og 15 voksne kvinner fra F1-generasjonen av hver diettgruppe til en papirkopp.
Mate voksne med 10% glukose løsning ad libitum. Bruk pinsett eller en børste for å fjerne de døde voksne daglig. Opprettholde myggene ved samme temperatur, fuktighet, lyssyklusforhold og sukkerfôringsregime.
Registrer dødsdatoene og beregn levetiden. For å måle vingelengde, bedøver du fem dagers gamle F1 mannlige og kvinnelige voksne mygg fra hver diettgruppe ved 20 grader Celsius i 90 sekunder. Under et stereoskop, ta forsiktig tak i thoraxen til hver mygg med tang, og plasser dem ventral side opp.
Samle begge vingene ved hjelp av en skalpell, og plasser dem på et rent mikroskop lysbilde som inneholder en tørket dråpe monteringsmedium for videre måling ved hjelp av en gradert okular. Mål vingelengden med et stereoskop ved hjelp av et mikrometer. I denne studien ble ytelsen til kvinnelige anopheles mygg matet på det formulerte rike kunstige måltidet og myggene matet på det første flytende dietten, eller et ferskt blodmåltid sammenlignet.
Antallet engorged kvinnelige mygg matet med rikt kunstig måltid på 89%var betydelig høyere enn antall engorged kvinner matet på blod på 56% F1 generasjon mygg matet på enten blodet eller det rike kunstige måltidet hadde sammenlignbar dødelighet og overlevelse. Variabiliteten var høyere i blodet matet mygg i forhold til mygg matet med det rike kunstige måltidet. Når det gjelder voksen kroppsstørrelse, var F1 anopheles mygg matet med rikt kunstig måltid innenfor forventet rekkevidde, og var lik blodmatet insektmygg.
Etter min mening er det svært viktig å montere materne riktig med parafilmen for å unngå at det er brudd. Hvis membranen ikke er godt festet til glassmateren, kan du miste måltidet og sannsynligvis miste noen av myggene, da de kan dekkes av måltidet og dø. Vi ønsker å utføre en dual choice attraksjon analyse, for eksempel ved hjelp av et olfactometer slik at vi faktisk kunne vurdere om våre kvinner er mer tiltrukket av kunstig kosthold eller til blodet.
Også, vi er nå lyofilizing kunstig kosthold og studerer det er stabilitet blant ulike temperaturer i lang tid. Foruten de åpenbare forbedringene av stabilitet og lagring som vi har jobbet med, bør den langsiktige bruken av dietten på myggtrening og fysiologi undersøkes. Jeg tror at å produsere anopheles uten blod vil lette enormt vektorforskning og implementering av kontrollverktøy som er avhengige av et stort antall mygg.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
