Neuroscience
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Мульти-Волокно Фотометрия для записи нейронной активности в свободно движущихся животных
Chapters
Summary October 20th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
В этом протоколе подробно описано, как осуществлять и выполнять многоволоконные фотометрические записи, как исправить для независях от кальция артефактов, а также важные соображения для двухцветной фотометрической визуализации.
Transcript
Волокно фотометрии CSOM изображения сочетает в себе генетически закодированный пользовательский индикатор и оптические волокна для мониторинга нейронной активности в свободно движущихся животных. Что имеет решающее значение для понимания того, как определенная группа нейронов играть в руководстве или реагирования на действия или стимул. Этот метод является доступным способом записи из конкретных областей мозга, которые определяются их связи или генетических профилей, со встроенным контролем, чтобы отделить сигнал к шуму.
Демонстрацией процессора будет Екатерина Марсьянова, аспирантка моей лаборатории. Начните с ослабления всех винтов на пятиосевом переводчике. Винт в шнуре патча к адаптеру, который прикреплен к пятиосевому переводчику.
Затем включите 470 нанометровый свет возбуждения при низкой мощности и распоите кончик волокна, указывая на автоматическую флуоресцентную пластиковую горку. Следующая запись с бесплатного полупроводника оксида металла или камеры CMOS в режиме живого времени. Увеличьте выигрыш или отрегулируйте таблицу осмотра до тех пор, пока изображение не будет видно в координационном центре цели.
Заранее пять оси переводчика к цели обеспечения того, чтобы 470 нанометровый свет по центру на волокна на SMA или FC конце патч шнура, пока изображение не может быть решена на камеру. Наконец, отрегулируйте оси X и Y до тех пор, пока изображение не будет по центру и не будет хорошо решено. Визуализуй свет, излучаемый вариолным концом шнура патча, так как он должен выглядеть как изотропный круг.
Начните с включением всех возбудимых огней, чтобы лучше визуализировать волокна. И настроить камеру выгоды так, что нет пикселей насыщены, и четкое изображение волокон присутствуют. Затем сделай предварительный снимок.
Нарисуйте области интереса или ROIS вокруг волокон. И держать их для измерения средних значений интенсивности во время записи. Для нескольких волоконных записей, тест для независимых путем живой записи из всех волокон.
Навельсив одно волокно к источнику света и нажмите пальцем. Наблюдайте колебания в канале. Затем нанесите цветную ленту на конец волокон, чтобы обозначить, какая рентабельность инвестиций соответствует какому волокну.
Наконец, настроить область записи, повесив патч шнур над ареной с помощью стендов, зажимов и держателей. Наконец, убедитесь, что животное не будет ограничено в движении по длине волокна и может свободно перемещаться по всей арене. Начните с осмотра дистального конца волокон шнура патча на глаз, и с мини-микроскопом волокна.
Если поверхность волокон поцарапана, повторно отполировать волокна с помощью волокна полировки пленки с тонкой песка. Затем очистить дистальные концы шнура патч с 70%этанола и хлопка наконечник аппликатора. Очистите волоконно-оптические канюли с использованием 70% этанола и хлопчатобумажного наконечника аппликатора.
Подключите вариольной конец шнура патча к имплантированной клетчатке с помощью керамического сплит-рукава, покрытого черной сужающейся трубкой. Во время соединения убедитесь, что рукав плотный. Позвольте животному восстановиться в течение нескольких минут.
Затем начните записывать оптический сигнал и запустите эксперимент. Во время записи внимательно следите за живым следом, чтобы обеспечить качество записи. И следите за любыми прыжками в сигнале, указывая на то, что рукав недостаточно плотный.
Для двухцветных записей добавьте светодиод 516 нанометров в систему фотометрии, чтобы возбудить красный флуоресцентный датчик кальция, а также соответствующие дихроические зеркала и фильтры. Затем добавьте сплиттер изображения между целью и камерой CMOS, чтобы отделить зеленые и красные длины волны излучения. Наконец, рисовать ROIS вокруг всех волокон в обоих цветах, красный и зеленый.
Убедитесь в том, чтобы четко определить каждую рентабельность инвестиций с соответствующим волокном и каналом. Триггер одновременного возбуждения с 470 нанометров, и 560 нанометров светодиодов, и чередовать их с 410 нанометров светодиод. Результаты показывают, что измеренная флуоресценция значительно увеличилась одновременно с администрированием воздушных затяжек для мышей с активацией пути LHA-LHB.
Однако у мышей, выражаюющих зеленый флуоресцентный белок или GFP, никаких изменений в сигнале не было обнаружено во время введения воздушных клубы. Этот метод позволяет исследователям разумно записывать из определенного типа клеток в различных областях мозга. В то время как животное свободно ведет себя.
Это еще больше обувяет способность вскрывать функции этих областей мозга, поскольку они связаны с поведением.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
