Neuroscience
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उम्र बढ़ने वाले दिमाग को इकट्ठा करने, संसाधित करने और विशेषता के लिए Abbiategrasso ब्रेन बैंक प्रोटोकॉल
Chapters
Summary June 3rd, 2020
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यह प्रोटोकॉल मस्तिष्क दान कार्यक्रम और दिमाग के उचित लक्षण वर्णन के माध्यम से व्यक्तिगत मस्तिष्क-उम्र बढ़ने वाले प्रक्षेप पथ को ट्रैक करने की एक विधि का वर्णन करता है। मस्तिष्क दाताओं धारावाहिक बहु आयामी आकलन सहित एक दीर्घकालिक देशांतर अध्ययन में शामिल हैं । प्रोटोकॉल में मस्तिष्क प्रसंस्करण और एक सटीक नैदानिक पद्धति का विस्तृत विवरण शामिल है।
Transcript
एक न्यूरोकॉग्निटिव विकार की व्यापकता लगातार बढ़ रही है, हमारा उद्देश्य सटीक निदान प्राप्त करने और न्यूरोडीजेनेरेटिव तंत्र पर प्रकाश डालने के लिए गुणवत्ता वाले मस्तिष्क ऊतक नमूनों को प्राप्त करना, विशेषता और संग्रहीत करना है। मस्तिष्क के गधे को ध्यान में रखते हुए, हमारी नमूना पद्धति सभी मेटा अध्ययनों को दोनों गोलार्द्धों से हिस्टोलॉजिकल रूप से अच्छी तरह से परिभाषित ऊतकों पर किए जाने की अनुमति देती है और कई डेटा को गहरे सीखने के माध्यम से एकत्र और सहसंबद्ध किया जा सकता है। कई विकृतियों द्वारा मस्तिष्क क्षति पर योजक प्रभाव अक्सर मनाया जाता है।
निश्चित निदान रोग रोगजनन, और संभव उपचार की खोज करने के लिए न्यूरोपैथोलॉजिकल निष्कर्षों के साथ नैदानिक सिंड्रोम के संयोजन की आवश्यकता है । ताजा काटने की प्रक्रियाओं के साथ-साथ मैक्रो सेक्शन प्रबंधन मुश्किल है लेकिन अच्छे परिणाम प्राप्त करने के लिए भी आवश्यक हैं। इस कठिनाइयों को दूर करने के लिए एक प्रशिक्षित और तंग बुनना टीम महत्वपूर्ण है ।
हमारे प्रोटोकॉल में कई चरण शामिल हैं जो स्तनपायी निपुणता की आवश्यकता हैं, इसलिए दृश्य प्रदर्शन इन तकनीकों में महारत हासिल करने के इच्छुक शोधकर्ता के लिए वर्णनात्मक ग्रंथों की तुलना में अधिक उपयोगी हो सकता है। थानेटोग्राफी की पुष्टि करने के बाद, एक तरफ मास्टोइड प्रक्रिया की नोक से कोरोनल प्लेट पर बालों की त्वचा और चमड़े के नीचे के ऊतकों के माध्यम से खोपड़ी चीरा बनाने के लिए एक तेज स्केलपेल का उपयोग करें, जो वर्टेक्स के ऊपर से गुजरता है। खोपड़ी के दो सिलवटों को खोपड़ी से ध्यान से अलग करें और चीरा जारी रखें जब तक कि पीला सुपर ऑर्बिटल फैट दिखाई न दे।
खोपड़ी को पूर्वकाल से प्रतिबिंबित करें और ऊतक के दूसरे खंड को पीछे खींचें। एक स्केलपेल और संदंश का उपयोग करके, खोपड़ी के प्रत्येक पक्ष में लौकिक मांसपेशी का एक छोटा सा नमूना फसल, 4% फॉर्मलडिहाइड में एक नमूना और दूसरा नमूना चार डिग्री सेल्सियस पर रखें। एक बिजली के देखा का उपयोग ललाट की ओर एक वी कट में खोपड़ी काट दिया और खोपड़ी को हटा दें ।
मेनिंग्स काटने के बाद, निर्धारण के लिए ड्यूरा का एक टुकड़ा और ठंड के लिए दूसरा फसल करें। तीसरे वेंट्रिकल तक पहुंचने के लिए कॉर्पस कैलोसम के माध्यम से 10 मिलीलीटर सिरिंज से जुड़ी 20 गेज 3.5 इंच सुई डालें और सेरेब्रल स्पाइनल द्रव के बारे में 10 मिलीलीटर प्राप्त करने के लिए प्लंजर को वापस लें। तरल पदार्थ की उपस्थिति रंग और टर्बिडिटी का आकलन करें और पीएच को मापें।
मस्तिष्क को उठाने के लिए दोनों ललाट पालि पर धीरे से खींचें और दोनों ऑप्टिक नसों इनफंडीबुलम, आंतरिक कैरोटिड धमनियों और तीसरे, चौथे, पांचवें और छठे कपाल नसों को काट लें। पीछे के फोसा तक पहुंचने के लिए टेंटोरियम काटें और कशेरुकी धमनियों और निचले कपाल नसों को काट लें। फिर मेडुला के सबसे कौडल हिस्से को काटने और ध्यान से पूरे मस्तिष्क को हटाने के लिए foramen मैग्नम के माध्यम से संभव के रूप में गहरे स्केलपेल डालें।
मेकेल की गुफा पर हड्डी को प्रकट करने के लिए स्केलपेल का उपयोग करें और निर्धारण और ठंड के लिए प्रत्येक पक्ष से गैसेरियन गैंगलियन एकत्र करें। बोनी सेला टर्किका को फ्रैक्चर करने के लिए सर्जिकल मैलेट और छेनी का उपयोग करें और 4% फॉर्मलडिहाइड में निर्धारण के लिए पिट्यूटरी ग्रंथि को हटा दें। स्थूल परिवर्तन और संवहनी परिवर्तन से खोपड़ी और पूरे मस्तिष्क का निरीक्षण करें।
मस्तिष्क के ट्रांसवर्स और पूर्वकाल मुद्रा व्यास को मापने के लिए एक मापने वाले टेप का उपयोग करें और मस्तिष्क को पैमाने पर तौलें। शारीरिक वेरिएंट, घावों, या पोत स्टेनोसिस की उपस्थिति के लिए स्थूल मूल्यांकन के लिए विली के सर्कल को सावधानीपूर्वक पुनः प्राप्त करें। ऊतकों को व्यक्तिगत रूप से तौलने से पहले सेरेब्रम, सेरिबैलम और ब्रेनस्टेम को अलग और निरीक्षण करें।
उत्तलता से लेप्टोमेनिंग्स के एक से दो, दो से चार सेंटीमीटर चुकता टुकड़े निकालें और चार डिग्री सेल्सियस पर पूर्ण उच्च ग्लूकोज DMEM संस्कृति माध्यम में नमूनों की रक्षा । 4% फॉर्मलडिहाइड में निर्धारण के लिए पीनियल ग्रंथि को फसल करें और प्रत्येक जोड़ी में से एक के निर्धारण और ठंड के लिए घ्राण बल्ब और ऑप्टिक नसों को हटा दें। बर्फ पर सेरेब्रम, सेरिबैलम और ब्रेनस्टेम को चार डिग्री सेल्सियस पर रखें।
जब ब्याज के ऊतकों के सभी काटा गया है एक सुपर चिपकने वाला गोंद का उपयोग करने के लिए हड्डी फिर से संलग्न और एक शल्य सुई का उपयोग करें, और गैर अवशोषित टांके वापस खोपड़ी सिलाई । ब्रेन बैंक विच्छेदन के लिए ब्रेनस्टेम अक्षिल्ली में कटौती करने के लिए एक विच्छेदन चाकू का उपयोग करें और सबस्टेंटिया निग्रा को बेनकाब करने के लिए दो स्लाइस प्राप्त करने के लिए बेहतर कोलिलस के माध्यम से रोस्ट्रल मिडब्रेन के स्तर पर पहला कट बनाएं। 10 में ब्रेनस्टेम काटें, आठ मिलीमीटर स्लाइस ध्यान रखते हुए, टिड्डी कैरुलेस का निरीक्षण करने के लिए चौथे वेंट्रिकल के बेहतर मार्जिन के पास रोस्ट्रल पोन के माध्यम से गुजरने वाले कटों को शामिल करने के लिए और ध्वनिक स्टॉयर से कमतर मेडुला ऑब्लोंगटा के माध्यम से, चौथे वेंट्रिकल के शीर्ष के ठीक ऊपर वागस के पृष्ठीय मोटर नाभिक सहित स्लाइस प्राप्त करने के लिए अवर।
अरबी अंकों के बाद ब्रेनस्टेम के लिए बीएस के रूप में एक रोस्ट्रल कौडल तरीके से सभी स्लाइस लेबल करें। अंतिम ब्रेनस्टेम सेक्शन के बाद, रीढ़ की हड्डी के लिए पदनाम अनुसूचित जाति का उपयोग करें और उसके बाद अरबी अंक। वेरमिस के स्तर पर दो सेरिबेलर गोलार्द्धों को अलग करने के लिए सागिटल विमान पर सेरिबैलम काटें और प्रत्येक गोलार्द्ध से पांच स्लाइस प्राप्त करने के लिए सगिटल सेक्शनिंग करें।
क्रमशः दाएं और बाएं सेरिबैलम के लिए सीबीआर या सीबीएल के रूप में वेरमिस से सभी स्लाइस का नाम दें, और प्रत्येक खंड की पहचान करने के लिए अरबी अंकों का उपयोग करें। इसके बाद, गोलार्ध को ऑप्टिक चियासम और ललाट लोब लौकिक ध्रुव, पूर्वकाल सिंगुलेट, पूर्वकाल सिंगोलेट, पूर्वकाल कॉमिस्योर, माइनर के नाभिक, और बेसल गैंग के माध्यम से कोरोनिल विमान के साथ अकेले के रूप में गोलार्द्ध को टुकड़ा करने से पहले सैगिटल विमान पर कॉर्पस कैलोसम के माध्यम से सेरेब्रम के दो गोलार्द्धों को अलग करें। एक सेंटीमीटर पीछे के बारे में एक दूसरे कट बनाओ मैमिलरी निकायों के माध्यम से गुजर रहा है और बेसल ganglia, पूर्वकाल थैलेसीमिया उप थैलेसीमिया, और amygdala को उजागर ।
पूर्वकाल और पीछे के क्षेत्रों को विच्छेदन करने के लिए स्लाइसिंग जारी रखें जब तक कि प्रत्येक गोलार्द्ध के लिए 15 से 21 सेंटीमीटर स्लाइस प्राप्त नहीं किए गए हैं। टुकड़ा एक सपाट सतह पर रखें क्योंकि वे ललाट से ओसीपिटल ध्रुव तक पूर्वाकार पीछे की दिशा में अपनी मूल स्थिति के बाद प्राप्त होते हैं, जिसमें पिछले स्लाइड्स के साथ निरंतर भाग होता है। जब सभी स्लाइस रखे गए हैं, तो पहले अधिग्रहीत वर्गों और हिप्पोकैम्पस, पैराशियल और ऑक्सीपिटल वर्गों सहित हिस्टोपैथोलॉजी के लिए तय किए जाने वाले मुख्य खंडों का चयन करें, और स्लाइस को एल या आर के रूप में लेबल करें, जिसमें अरबी अंकों के बाद एक लेबल भी शामिल है जो यह दर्शाता है कि स्लाइस को तय किया जाना है या जमे हुए।
जब सभी ऊतकों को अनुभागित और लेबल किया गया हो, तो उनके निर्धारण या ठंड से पहले अनुभागों की प्रत्येक श्रृंखला के लिए एक छवि प्राप्त करें। नमूनों को फ्रीज करने के लिए आरक्षित वैकल्पिक ऊतक वर्गों को पूर्व जमे हुए एल्यूमीनियम ट्रे पर रखें और उन्हें फ्लैट रखने के लिए इंटरलॉकिंग एल्यूमीनियम प्लेट के साथ वर्गों को कवर करें। फिर 80 डिग्री सेल्सियस पर उपयुक्त क्रायोजेनिक बॉक्स में भंडारण के लिए उनके संबंधित पहचान कोड और स्लाइस नंबरों के साथ लेबल प्लास्टिक बैग के अंदर जमे हुए नमूनों को रखने से पहले तीन मिनट के लिए तरल नाइट्रोजन में स्लाइस फ्रीज करें।
नमूनों को ठीक करने के लिए आरक्षित वैकल्पिक ऊतक वर्गों को धुंध के व्यक्तिगत टुकड़ों में रखें और स्लाइस को चार डिग्री सेल्सियस ठंडे कमरे में पांच दिनों के लिए 10% फॉस्फेट बफर फॉर्मेलिन समाधान में रखें। काटे गए 27 दिमागों में से 24 को एक निश्चित नैदानिक रोग निदान के साथ पूर्ण न्यूरोपैथोलॉजिकल लक्षण वर्णन प्राप्त हुआ। 36 मस्तिष्क दाताओं की एक श्रृंखला का प्रारंभिक मात्रात्मक इलेक्ट्रोएंसेफेलोग्राम विश्लेषण इंगित करता है कि सामान्य बुजुर्ग हल्के न्यूरोकॉग्निटिव विकार की तुलना में प्रमुख न्यूरोकॉग्निटिव विकारों में मुख्य अल्फा ताल प्रतिशत काफी कम है।
यहां एक असममित विकृति का एक उदाहरण बाईं ओर की तुलना में दाएं कोरोनल अनुभाग में देखे गए गंभीर वेंट्रिकुलर फैलाव के साथ एक दाईं ओर शोष स्पष्ट स्थूल के साथ दिखाया गया है। एक और मामला सही गोलार्द्ध के एक इनफारेक्ट को प्रदर्शित करता है, जबकि एक अन्य नमूना सही स्तन शरीर की एक स्पष्ट शोष दिखाता है। मैक्रो वर्गों को मायलिन हानि या गोलार्द्धों के भीतर इम्यूनोरेएक्टिविटी के वितरण की पहचान करने के लिए दाग दिया जा सकता है।
ये नमूने उन जुड़वा बच्चों से हैं, जिन्होंने एपिजेनेटिक और पर्यावरणीय कारकों के कारण विभिन्न समयसीमा में अल्जाइमर रोग की नैदानिक शुरुआत की थी । फिर भी, सूक्ष्म विश्लेषण से एक बहुत ही समान न्यूरोपैथोलॉजिकल तस्वीर का पता चला जो एक उच्च अल्जाइमर रोग विकृति और एमिलॉयड एंजियोपैथी का संकेत देता है। इन दो रोगियों में हालांकि, अल्जाइमर रोग का एक ही नैदानिक निदान वास्तव में न्यूरोपैथोलॉजिकल सुविधाओं के अनुरूप नहीं था, जो कई etiologies में एक मनोभ्रंश जोड़ी का पता चला ।
दरअसल, पहले मामले में जाइरस एकल झूठ और सब्स्तांटिया निग्रा में लेवी निकायों को प्रस्तुत किया गया। और दूसरे मामले में एमिग्डाला में लेवी न्यूराइट्स से जुड़े लेवी शव और नाबालिगों के नाभिक में दिखाया गया । स्लाइस की तस्वीर सूक्ष्म विश्लेषण के दौरान शारीरिक क्षेत्रों की सटीक पहचान के लिए ध्यान से है।
एकल स्लाइस का निर्धारण और फ्रीजिंग ऊतक माइक्रोस्ट्रक्चर ओमिक्स जीन सक्रियण और प्रोटीन वितरण की स्थलाकृति को संरक्षित करने और हिस्टोपैथोलॉजी के साथ इन डेटा को सहसंबंधित करने के लिए भी महत्वपूर्ण हैं। अच्छी तरह से विशेषता वाले ऊतकों से सेल संस्कृतियां, रोग रोगजनकता की जांच भी। हमेशा एक निहित मस्तिष्क ऊतक के रूप में पर्याप्त व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण पहनते हैं संभावित संक्रामक माना जाता है और क्योंकि तेज उपकरणों और तरल नाइट्रोजन जैसे खतरनाक उपकरणों के उपयोग की आवश्यकता है।
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