Behavior
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Inducerende post-traumatisk epilepsi i en mus model af gentagne diffuse traumatisk hjerneskade
Chapters
Summary February 10th, 2020
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Denne systematiske protokol beskriver en ny dyremodel af posttraumatisk epilepsi efter gentagne mild traumatisk hjerneskade. Den første del detaljer trin for traumatisk hjerneskade induktion ved hjælp af en modificeret vægttab model. Den anden del indeholder instruktioner om den kirurgiske tilgang til enkelt- og multi-kanal elektroencefalografiske dataindsamlingssystemer.
Transcript
Vores protokol er den første til at beskrive en musemodel af posttraumatisk epilepsi forårsaget af mild traumatisk hjerneskade. Brugen af en mild diffus traumatisk hjerneskade model efterligner et vigtigt aspekt af patologi af menneskelige traumatisk hjerneskade, som næsten altid har en diffus komponent. For at udvikle biomarkører og behandlinger er der behov for forskning ved hjælp af modeller, der på passende vis reproducerer aspekter af menneskelig patologi.
Vores traumatiske hjerneskade model har også potentiale til at give indsigt i de mekanismer, der forårsager svækkelse af hjernens funktion efter mild traumatisk hjerneskade eller hjernerystelse. Efter at have bekræftet en manglende reaktion på smerte refleks, placere musen på en skum pad og placere hovedet af musen under vægten drop rør. Placer en flad 1,3 centimeter diameter en millimeter tyk 880 milligram vægt rustfrit stål disk i midten af dyrets hoved mellem øjnene og ørerne.
Fjern stiften i vægtdråberøret for at frigøre 100 gram vægtstangen fra en højde på 50 centimeter. For at fremkalde en fingeret skade i kontrolmusene skal vægtstangen fjernes fra røret for at forhindre utilsigtet frigivelse af stiften under vægttab. Efter vægtfald induktion, placere dyret på ryggen på en varmepude dækket med en steril poly foret absorberende håndklæde med overvågning, indtil fuld recumbency.
Derefter placere musen i et rent bur, der er blevet opvarmet på en varmepude med nyttiggørelse gel og et par fugtet chow stykker i 45 minutter. For at forberede det kirurgiske felt til EEG elektrode implantation, placere en temperatursensor på puden og placere re-bedøvet hjernen tilskadekomne mus på en steril drapere på toppen af varmepuden på stereotaktiske apparat. Efter fastsættelse af hovedet på plads med ørestænger, anvende smørende salve til dyrets øjne og bruge depilatory creme til at fjerne håret fra hovedbunden.
Desinficere den eksponerede hud med tre 20-sekunders vekslende svaberprøver af povidone jod kirurgisk antiseptisk opløsning og 70% ethanol i en cirkulær bevægelse. Efter fjernelse af hovedbunden, anvende små hemostats på den åbnede hud grænser for at udvide det udsatte område. Brug derefter skalpel til forsigtigt at fjerne periosteum og pode kraniet med brintoverilte.
Når kraniet er renset for væv og udviser en hvidlig udseende, tør knoglen med en steril gaze eller vatpind. Til elektrodeimplantatering skal du bruge en højhastighedsboremaskine med en rund 0,5 millimeter stålbit ved 5.000 til 6.000 rotationer i minuttet for at skabe seks grathuller til skrueelektroderne. Når alle hullerne er blevet boret, skal de seks skrueelektroder ind i grathullerne og blande en halv scoop af dental cementpulver med flere dråber opløsningsmiddel.
Brug en spatel til at røre, indtil dental cement blandingen er klæbrig, men formbar og stiv nok til at være ordentligt kondenseret, når de placeres på dyrets kranium. Påfør cementen over hele den eksponerede overflade af kraniet og hver skrueelektrode. Efter et til to minutter tændes loddejernet, og den tre EEG-hovedmontering sættes i en stereotaktisk holderarm.
Placer hovedbeslag over kraniet, så de seks wire bly positioner matcher placeringen af trådledningen af hver skrue elektrode. Sænk enheden, så dens ventrale del hviler oven på tandcementet. Drej ledningen af hver ledning fra hver af skrueelektroderne med den tilsvarende ledningsledning af hovedmonteringen, lodde hver snoet ledning for korrekt signalledning og brug en saks til at trimme overskydende ledning.
Bøj hver loddet par wire fører rundt om hovedbeslag. Når alle par er blevet bøjet, dække alle wiren med frisk dental cement forlader kun den sorte del af hovedet mount udsat. Slip hemostaterne, der holder hudklapperne, og påfør chlorhexidinantiseptisk på området omkring implantatet for at undgå infektion.
Overfør derefter dyret fra apparatet til en balance for at måle dyrets vægt som reference til fremtidig overvågning, før dyret anbringes i et rent bur på en varm varmepude med overvågning, genvindingsgel og et par fugtede chow-stykker. I dette tal, en spontan anfald i en mus 97 dage efter gentagne vægt fald traumatisk hjerneskade registreres ved hjælp af en tre EEG hoved mount konfigureret som vist i denne video protokol er vist. Her vises et spontant ikke-krampeanfald elektrografisk anfald, der er registreret i en mus 65 dage efter gentagne vægttab traumatisk hjerneskade.
I dette tal, en spontan anfald i en mus 23 dage efter gentagne vægt dråbe traumatisk hjerneskade blev registreret ved hjælp af en en EEG hoved mount. Den spektrale effekt af en typisk beslaglæggelse indikerer den højeste tæthed at være i intervallet 10 til 40 hertz med et højdepunkt på 15 hertz. Denne protokol viser tidsfrister for beslaglæggelse debut hos dyr efter gentagne vægt dråbe traumatisk hjerneskade viser forekomsten af beslaglæggelse klyngedannelse hos nogle dyr og understreger betydningen af at erhverve kontinuerlige snarere end intermitterende optagelser.
Korrekt placering af stålskiven, omhyggelig implantation af skrueelektroderne og omhyggelig lodning af trådledningerne er alle afgørende for et vellykket langsigtet eksperiment. Efter EEG overvågning, dyr med hjerneskade, der udvikler anfald kan stratificeres fra dem, der ikke til efterfølgende analyse af deres cellulære, molekylære, og fysiologiske forskelle. At stratificere dyr med posttraumatisk epilepsi fra dem, der pådrager sig traumatisk hjerneskade, men ikke udvikler anfald, er afgørende for udviklingen af interventioner og biomarkører.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
