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दोहराव फैलाना दर्दनाक मस्तिष्क चोट के एक माउस मॉडल में पोस्ट दर्दनाक मिर्गी उत्प्रेरण
Chapters
Summary February 10th, 2020
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यह व्यवस्थित प्रोटोकॉल दोहराव हल्के दर्दनाक मस्तिष्क की चोट के बाद पोस्ट-ट्रॉमेटिक मिर्गी के एक नए पशु मॉडल का वर्णन करता है। पहले भाग एक संशोधित वजन ड्रॉप मॉडल का उपयोग कर दर्दनाक मस्तिष्क चोट प्रेरण के लिए कदम विवरण । दूसरा भाग एकल और बहु-चैनल इलेक्ट्रोएन्सेफेलोग्राफिक डेटा अधिग्रहण प्रणालियों के लिए सर्जिकल दृष्टिकोण पर निर्देश प्रदान करता है।
Transcript
हमारा प्रोटोकॉल हल्के दर्दनाक मस्तिष्क की चोट से प्रेरित पोस्ट-ट्रॉमेटिक मिर्गी के माउस मॉडल का विस्तार करने वाला पहला है। एक हल्के विसरित दर्दनाक मस्तिष्क चोट मॉडल का उपयोग मानव दर्दनाक मस्तिष्क चोट की विकृति का एक महत्वपूर्ण पहलू है जो लगभग हमेशा एक विसरित घटक है नकल करता है । बायोमार्कर और उपचार विकसित करने के लिए, मानव विकृति के पहलुओं को उचित रूप से पुन: पेश करने वाले मॉडलों का उपयोग करके अनुसंधान की आवश्यकता है।
हमारे दर्दनाक मस्तिष्क चोट मॉडल भी तंत्र है कि हल्के दर्दनाक मस्तिष्क की चोट या हिलाना के बाद मस्तिष्क समारोह की हानि का कारण में अंतर्दृष्टि प्रदान करने की क्षमता है । दर्द पलटा करने के लिए प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि करने के बाद, एक फोम पैड पर माउस जगह है और वजन ड्रॉप ट्यूब के नीचे माउस के सिर की स्थिति । आंखों और कानों के बीच जानवर के सिर के केंद्र में एक फ्लैट 1.3 सेंटीमीटर व्यास एक मिलीमीटर मोटी 880 मिलीग्राम वजन स्टेनलेस स्टील डिस्क रखें।
50 सेंटीमीटर की ऊंचाई से 100 ग्राम वजन की रॉड को छोड़ने के लिए वजन ड्रॉप ट्यूब में पिन निकालें। नियंत्रण चूहों में एक नकली चोट को प्रेरित करने के लिए, वजन ड्रॉप के दौरान पिन की आकस्मिक रिहाई को रोकने के लिए ट्यूब से वजन रॉड को हटा दें। वजन ड्रॉप प्रेरण के बाद, जानवर को अपनी पीठ पर एक बाँझ पॉली लाइन वाले शोषक तौलिया के साथ कवर किया जाता है, जब तक कि पूर्ण भार शक्ति तक निगरानी के साथ।
फिर माउस को एक साफ पिंजरे में रखें जिसे रिकवरी जेल के साथ हीटिंग पैड पर गर्म किया गया है और 45 मिनट के लिए कुछ गीले चाउ टुकड़े हैं। ईईजी इलेक्ट्रोड प्रत्यारोपण के लिए शल्य चिकित्सा क्षेत्र तैयार करने के लिए, पैड पर एक तापमान सेंसर रखें और स्टीरियोटैक्टिक उपकरण पर हीटिंग पैड के शीर्ष पर एक बाँझ कपड़ा पर फिर से एनेस्थेटाइज्ड मस्तिष्क घायल माउस रखें। कान की सलाखों के साथ जगह में सिर फिक्सिंग के बाद, जानवर की आंखों पर चिकनाई मरहम लागू करें और खोपड़ी से बालों को हटाने के लिए डिपिट्रिरी क्रीम का उपयोग करें।
एक परिपत्र गति में पोविडोन आयोडीन सर्जिकल एंटीसेप्टिक समाधान और 70% इथेनॉल के तीन 20 सेकंड के बारी झाड़ू और 70% इथेनॉल के साथ उजागर त्वचा को कीटाणुरहित करें। खोपड़ी को हटाने के बाद, उजागर क्षेत्र का विस्तार करने के लिए खुली त्वचा सीमाओं पर छोटे हीमोस्टेट लागू करें। इसके बाद, पेस्केपल का उपयोग धीरे-धीरे पेरिओस्टेम को हटाने और हाइड्रोजन पेरोक्साइड के साथ कपाल झाड़ू लगाने के लिए करें।
जब कपाल ऊतक से साफ हो जाता है और एक सफ़ेद उपस्थिति प्रदर्शित करता है, तो हड्डी को बाँझ धुंध या झाड़ू के साथ सुखा लें। इलेक्ट्रोड प्रत्यारोपण के लिए, पेंच इलेक्ट्रोड के लिए छह बर्र छेद बनाने के लिए प्रति मिनट 5, 000 से 6, 000 घूर्णन पर एक गोल 0.5 मिलीमीटर स्टील बिट के साथ एक उच्च गति ड्रिल का उपयोग करें। जब सभी छेद ड्रिल किए गए हों, तो छह स्क्रू इलेक्ट्रोड को बर्र होल में रखें और सॉल्वेंट की कई बूंदों के साथ डेंटल सीमेंट पाउडर का आधा स्कूप मिलाएं।
जब तक दंत सीमेंट मिश्रण चिपचिपा लेकिन निंदनीय और काफी कठोर है जब तक जानवर के कपाल पर रखा ठीक से गाढ़ा हो हलचल करने के लिए एक स्पैटुला का प्रयोग करें । कपाल और प्रत्येक स्क्रू इलेक्ट्रोड की पूरी उजागर सतह पर सीमेंट लागू करें। एक से दो मिनट के बाद, टांका लोहे को चालू करें और तीन ईईजी हेड माउंट को स्टीरियोटाटिक धारक बांह में रखें।
सिर को खोपड़ी पर माउंट करें ताकि छह तार लीड पोजीशन प्रत्येक स्क्रू इलेक्ट्रोड के तार लीड की स्थिति से मेल खाती हो। डिवाइस को कम करें ताकि इसका वेंट्रल हिस्सा डेंटल सीमेंट के ऊपर टिकी रहे। प्रत्येक लीड के तार को प्रत्येक स्क्रू इलेक्ट्रोड से सिर माउंट के इसी तार लीड के साथ मोड़ें, उचित सिग्नल चालन के लिए तार की प्रत्येक मुड़ जोड़ी मिलाप और किसी भी अतिरिक्त तार को ट्रिम करने के लिए कैंची का उपयोग करें।
तार की प्रत्येक टांका जोड़ी मोड़ सिर माउंट के चारों ओर जाता है। जब जोड़े के सभी तुला दिया गया है, ताजा दंत सीमेंट के साथ तार के सभी कवर सिर माउंट के केवल काले हिस्से को छोड़ उजागर । त्वचा के फ्लैप पकड़े हुए हीमोस्टैट्स को छोड़ दें और संक्रमण से बचने के लिए प्रत्यारोपण के आसपास के क्षेत्र में क्लोरेक्सिडीन एंटीसेप्टिक लागू करें।
फिर निगरानी, वसूली जेल, और कुछ गीले चाउ टुकड़ों के साथ एक गर्म हीटिंग पैड पर एक साफ पिंजरे में जानवर रखने से पहले भविष्य की निगरानी के लिए एक संदर्भ के रूप में जानवर के वजन को मापने के लिए उपकरण से एक संतुलन के लिए जानवर को स्थानांतरित करें। इस आंकड़े में, एक माउस में एक सहज जब्ती ९७ दिनों के बाद दोहराया वजन ड्रॉप दर्दनाक मस्तिष्क चोट एक तीन ईईजी सिर माउंट कॉन्फ़िगर का उपयोग कर दर्ज के रूप में इस वीडियो प्रोटोकॉल में प्रदर्शन दिखाया गया है । यहां, दोहराया वजन ड्रॉप दर्दनाक मस्तिष्क चोट के बाद एक माउस में दर्ज एक सहज गैर आक्षेप वैकल्पिक जब्ती दिखाया गया है ।
इस आंकड़े में, दोहराया वजन ड्रॉप दर्दनाक मस्तिष्क चोट के बाद 23 दिनों के एक माउस में एक सहज जब्ती एक ईईजी सिर माउंट का उपयोग कर दर्ज किया गया था । एक ठेठ जब्ती की स्पेक्ट्रल शक्ति 15 हर्ट्ज पर एक चोटी के साथ 10 से 40 हर्ट्ज की सीमा में होने के लिए उच्चतम घनत्व इंगित करता है। यह प्रोटोकॉल दोहराव वजन ड्रॉप दर्दनाक मस्तिष्क चोट के बाद जानवरों में जब्ती शुरुआत के लिए समयसीमा को दर्शाता है कुछ जानवरों में जब्ती क्लस्टरिंग की घटनाओं का प्रदर्शन और आंतरायिक रिकॉर्डिंग के बजाय निरंतर प्राप्त करने के महत्व पर जोर ।
स्टील डिस्क का उचित प्लेसमेंट, स्क्रू इलेक्ट्रोड का सावधानीपूर्वक प्रत्यारोपण और तार लीड का सावधानीपूर्वक टांका एक सफल दीर्घकालिक प्रयोग के लिए सभी महत्वपूर्ण हैं। ईईजी निगरानी के बाद, मस्तिष्क की चोट वाले जानवर जो दौरे विकसित करते हैं, उन लोगों से स्तरीकृत किए जा सकते हैं जो उनके सेलुलर, आणविक और शारीरिक मतभेदों के बाद के विश्लेषण के लिए नहीं करते हैं। उन लोगों से पोस्ट-ट्रॉमेटिक मिर्गी के साथ जानवरों को स्तरीकृत करना जो दर्दनाक मस्तिष्क की चोट उठाना लेकिन दौरे विकसित नहीं करते हैं हस्तक्षेप और बायोमार्कर के विकास के लिए महत्वपूर्ण है।
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