Behavior
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Indusere posttraumatisk epilepsi i en musemodell av repeterende diffus traumatisk hjerneskade
Chapters
Summary February 10th, 2020
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Denne systematiske protokollen beskriver en ny dyremodell av posttraumatisk epilepsi etter repeterende mild traumatisk hjerneskade. Den første delen detaljer skritt for traumatisk hjerneskade induksjon ved hjelp av en modifisert vekt fall modell. Den andre delen gir instruksjoner om kirurgisk tilnærming for en- og flerkanals elektroencefalografiske datainnsamlingssystemer.
Transcript
Vår protokoll er den første til å detalj en musemodell av posttraumatisk epilepsi indusert av mild traumatisk hjerneskade. Bruken av en mild diffus traumatisk hjerneskademodell etterligner et viktig aspekt ved patologien til menneskelig traumatisk hjerneskade som nesten alltid har en diffus komponent. For å utvikle biomarkører og behandlinger er det nødvendig med forskning ved hjelp av modeller som reproduserer aspekter av menneskelig patologi på riktig måte.
Vår traumatiske hjerneskademodell har også potensial til å gi innsikt i mekanismene som forårsaker svekkelse av hjernefunksjonen etter mild traumatisk hjerneskade eller hjernerystelse. Etter å ha bekreftet mangel på respons på smerterefleks, legg musen på en skumpute og plasser musens hode under vektdråperøret. Plasser en flat 1,3 centimeter diameter en millimeter tykk 880 mg vekt rustfritt stål plate i midten av dyrets hode mellom øynene og ørene.
Fjern pinnen i vektdråperøret for å frigjøre 100 gram vektstangen fra en høyde på 50 centimeter. For å indusere en sham skade i kontrollmusene, fjern vektstangen fra røret for å forhindre utilsiktet frigjøring av pinnen under vektfall. Etter vektfall induksjon, plasser dyret på ryggen på en varmepute dekket med et sterilt polyforet absorberende håndkle med overvåking til full recumbency.
Legg deretter musen i et rent bur som har blitt varmet opp på en varmepute med gjenopprettingsgel og noen fuktede chow-stykker i 45 minutter. For å forberede det kirurgiske feltet for EEG elektrodeimplantasjon, plasser en temperatursensor på puten og plasser den re-bedøvede hjerneskadde musen på en steril drapering på toppen av varmeputen på det stereotaktiske apparatet. Etter å ha festet hodet på plass med ørestenger, påfør smøresalve på dyrets øyne og bruk hårfjerningskrem for å fjerne håret fra hodebunnen.
Desinfiser den eksponerte huden med tre 20-sekunders vekslende vattpinner av povidon jod kirurgisk antiseptisk løsning og 70% etanol i en sirkulær bevegelse. Etter å ha fjernet hodebunnen, bruk små hemostater på de åpne hudgrensene for å utvide det eksponerte området. Deretter bruker du skalpellen til å forsiktig fjerne periosteum og vattpinne kraniet med hydrogenperoksid.
Når kraniet er ryddet av vev og viser et hvitt utseende, tørk beinet med en steril gasbind eller vattpinne. For elektrodeimplantasjon, bruk en høyhastighets drill med en rund 0,5 millimeter stålbit på 5 000 til 6000 rotasjoner per minutt for å lage seks graders hull for skrueelektrodene. Når alle hullene er boret, plasser de seks skrueelektrodene i burrhullene og bland en halv scoop med tannsementpulver med flere dråper løsemiddel.
Bruk en slikkepott til å røre til tannsementblandingen er klebrig, men formbar og stiv nok til å kondenseres riktig når den plasseres på dyrets kraniet. Påfør sementen over hele den eksponerte overflaten av kraniet og hver skrueelektrode. Etter ett til to minutter slår du på loddejernet og plasserer de tre EEG-hodefestet i en stereotaktisk holderarm.
Plasser hodefestet over skallen slik at de seks trådledningsposisjonene stemmer over ledningsposisjonen til trådledningen til hver skrueelektrode. Senk enheten slik at ventraldelen hviler på toppen av tannsementen. Vri ledningen på hver bly fra hver av skrueelektrodene med den tilsvarende trådledningen til hodefestet, lodde hvert vridd par ledning for riktig signalledning og bruk saks til å trimme overflødig ledning.
Bøy hvert loddet par trådledninger rundt hodefestet. Når alle parene er bøyd, dekk hele ledningen med fersk tannsement slik at bare den svarte delen av hodebraketten eksponeres. Slipp hemostats holder huden klaffer og bruke klorhexidin antiseptisk til området rundt implantatet for å unngå infeksjon.
Deretter overfører du dyret fra apparatet til en balanse for å måle dyrets vekt som en referanse for fremtidig overvåking før du plasserer dyret i et rent bur på en varm varmepute med overvåking, gjenopprettingsgel og noen fuktede chow-stykker. I dette tallet vises et spontant anfall i en mus 97 dager etter gjentatt vektdråpe traumatisk hjerneskade registrert ved hjelp av en tre EEG-hodefeste konfigurert som demonstrert i denne videoprotokollen. Her vises et spontant ikke-konvulsivt elektrografisk anfall registrert i en mus 65 dager etter gjentatt vektfall traumatisk hjerneskade.
I denne figuren ble et spontant anfall i en mus 23 dager etter gjentatt vektfall traumatisk hjerneskade registrert ved hjelp av en EEG-hodefeste. Spektralkraften til et typisk anfall indikerer den høyeste tettheten å være i området 10 til 40 hertz med en topp på 15 hertz. Denne protokollen viser tidslinjene for anfallsinnsett hos dyr etter repeterende vektfall traumatisk hjerneskade som viser forekomsten av anfall klynger i noen dyr og understreker viktigheten av å anskaffe kontinuerlig i stedet for intermitterende opptak.
Riktig plassering av stålskiven, forsiktig implantasjon av skrueelektrodene og forsiktig lodde av trådledningene er alle avgjørende for et vellykket langsiktig eksperiment. Etter EEG-overvåking kan dyr med hjerneskade som utvikler anfall stratifiseres fra de som ikke gjør det for etterfølgende analyse av deres cellulære, molekylære og fysiologiske forskjeller. Å stratifisere dyr med posttraumatisk epilepsi fra de som pådrar seg traumatisk hjerneskade, men ikke utvikler anfall, er avgjørende for utviklingen av intervensjoner og biomarkører.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
