Bioengineering
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स्मॉल-स्केल सेल प्रोसेसिंग के लिए ऑटोमेटेड काउंटरफ्लो सेंट्रलाइजसिस्टम
Chapters
Summary December 12th, 2019
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स्वचालन सेल विनिर्माण में अपस्केलिंग और लागत प्रबंधन के लिए महत्वपूर्ण है। यह पांडुलिपि छोटे पैमाने पर बायोप्रोसेसिंग के लिए बफर एक्सचेंज और सेल एकाग्रता चरणों को स्वचालित करने के लिए एक काउंटरफ्लो अपकेंद्रित्र सेल प्रोसेसिंग डिवाइस के उपयोग का वर्णन करती है।
Transcript
यह प्रोटोकॉल छोटे पैमाने पर सेल विनिर्माण के लिए बंद स्वचालित बफर एक्सचेंज और एकाग्रता के लिए एक समाधान प्रदान करता है। महत्वपूर्ण बात, बफर एक्सचेंज एक उच्च वसूली और केंद्रित उत्पाद की एक बहुत छोटी मात्रा की डिलीवरी के साथ किया जा करने में सक्षम है। नए उपयोगकर्ता सभी स्वचालन चरणों का पालन करने के लिए संघर्ष कर सकते हैं।
प्रोग्रामिंग का अभ्यास इन चरणों और माध्यम के साथ परीक्षण रन प्रदर्शन डिवाइस से परिचित होने के अच्छे तरीके हैं। बफर एक्सचेंज शुरू करने से पहले, एक कक्षा दो लैमिनार फ्लो हेड में, 500 मिलीलीटर खारा बैग से 50 मिलीलीटर खारा समाधान हटाने के लिए एक सिरिंज और सुई असेंबली का उपयोग करें। इस मात्रा को 20% मानव सीरम एल्बुमिन के 50 मिलीलीटर के साथ बदलें, और अपनी संस्कृति जहाजों से ब्याज की कोशिकाओं को फसल दें।
गिनती के बाद, कोशिकाओं को स्थानांतरण बैग में लोड करने के लिए सिरिंज का उपयोग करें, और ट्रांसफर बैग को एकल उपयोग प्रसंस्करण किट से जोड़ने के लिए ल्यूयर लॉक का उपयोग करें। फिर वॉश बफर के पहले से तैयार बैग को सिंगल यूज प्रोसेसिंग किट से कनेक्ट करें। एक स्वचालित बफर एक्सचेंज स्थापित करने के लिए, डिवाइस के ग्राफिक यूजर इंटरफेस को खोलें और स्टार्ट बटन पर क्लिक करें।
एक नया प्रोटोकॉल बनाने के लिए नए क्लिक करें, और खोले जाने वाले वाल्वों का चयन करने के लिए नियंत्रण पर क्लिक करें, अपकेंद्रित्र और पंप गति, पंप दिशा, और कार्रवाई ट्रिगर। जब सभी पैरामीटर सेट हो गए हों, तो सेव पर क्लिक करें। डिवाइस पर जुड़े उपयुक्त बैग लटकाएं, और मशीन पर एकल उपयोग प्रसंस्करण किट रखें।
इसके बाद कनेक्ट बटन पर क्लिक करें और सेव प्रोग्राम डाउनलोड करें। जब प्ले बटन लाइट अप होता है, तो प्रोटोकॉल शुरू करने की तैयारी होती है। स्वचालित बफर एक्सचेंज करने के लिए, ट्रांसफर बैग ट्यूबिंग के लिए मैनुअल क्लैंप खोलें, और बफर एक्सचेंज प्रोग्राम शुरू करने के लिए शुरू पर क्लिक करें।
स्वचालन चरण छह के अंत में, प्रक्रिया अब खाली बैग में हवा द्वारा बुलबुला सेंसर के ट्रिगर के कारण रुक जाएगी । यदि बैग वास्तव में खाली है, तो प्रक्रिया को अगले चरण में ले जाने के लिए आगे दबाए। जब स्वचालित प्रक्रिया समाप्त हो जाती है, तो सभी ट्यूबिंग क्लैंप बंद करें और डिवाइस का दरवाजा खोलें।
फिर डिवाइस से एकल उपयोग किट निकालें और सिरिंज डिस्कनेक्ट करने के लिए कोशिकाओं को बाद के विश्लेषण के लिए एकत्र करने की अनुमति है । आमतौर पर, तरलीकृत सेल बिस्तर इस छवि में बीच में जमा कोशिकाओं के साथ और शंकु के सामने की ओर, कक्ष की नोक पर एक छोटी सी जगह है जिसमें कोशिकाएं जमा नहीं होती हैं, और सेल लोडिंग इनलेट के भीतर एक दृश्यमान उद्घाटन दिखाई देगा। एक नया बफर पेश करते समय तरलीकृत सेल बिस्तर संकुचित हो सकता है जो एक अलग चिपचिपाहट या घनत्व पर है।
जीवित कोशिकाओं के लिए चयन करने के लिए एक उच्च प्रवाह दर लागू की जा सकती है क्योंकि मृत कोशिकाएं छोटी और हल्की होती हैं और प्रवाह दर में वृद्धि करके कक्ष से बाहर मजबूर किया जा सकता है। बफर एक्सचेंज प्रोसेसिंग समय की स्वचालित प्रक्रिया मैनुअल बफर एक्सचेंज प्रक्रिया की तुलना में कम है। इस विश्लेषण में, मैनुअल और स्वचालित प्रक्रियाओं के बीच वसूली दर दोनों प्रकार की कोशिकाओं के परीक्षण के लिए समान थी, और कोशिका व्यवहार्यता या तो प्रक्रिया से प्रभावित नहीं थी।
बरामद कोशिकाओं ने प्रसंस्करण के प्रकार की परवाह किए बिना, साइटोकिन्स, और ideo-गतिविधियों का उत्पादन करने की समान प्रसार दरों, क्षमताओं का प्रदर्शन किया। यह याद रखना महत्वपूर्ण है कि यह प्रोटोकॉल केवल एक दिशानिर्देश के रूप में कार्य करता है, और इसलिए उपयोगकर्ताओं को अपने सेल प्रकार और बफर के अनुसार प्रवाह दर और अपकेंद्रित्र गति को प्रोग्राम करने की आवश्यकता है। बफर एक्सचेंज सेल विनिर्माण में एक मध्यवर्ती कदम है जो सेल संस्कृति विस्तार या क्रायोप्रिजर्वेशन और निर्माण का पालन कर सकता है।
लक्ष्य पूरी प्रक्रिया को संलग्न करने के तरीके विकसित करना है। काउंटरफ्लो अपकेंद्रित्र एक बहुत ही बहुमुखी मंच है। भविष्य के अध्ययन सेल चयन में अनुप्रयोगों का पता लगाएंगे, जैसे मृत सेल हटाने और एक चोरिस उत्पाद से मोनोन्यूक्लिस सेल अलगाव।
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