Cancer Research
This content is Open Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Echografie-geleide Orthotopic implantatie van Murine pancreatic Ductal adenocarcinoom
Chapters
Summary November 19th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
We beschrijven een protocol voor de echografie geleide implantatie van Murine-afgeleide alvleesklier ductaal adenocarcinoom cellijnen rechtstreeks in de inheemse tumor site. Deze aanpak resulteerde in alvleesklier tumoren detecteerbaar door echografie scannen binnen 2-4 weken van injectie, en aanzienlijk verminderd de proportie tumor cel zaaien op de peritoneale muur in vergelijking met chirurgische orthotopic implantatie.
Transcript
Dit protocol maakt de studie van alvleesklierkanker in de inheemse weefselsite mogelijk, terwijl het minimaliseren van ontsteking tijdens de injectie van tumorcellen en biedt een hoge doorvoermethode voor het genereren van grote cohorten muizen. Door het gebruik van echografie begeleiding, de noodzaak voor een buikoperatie wordt geëlimineerd. In onze handen, UG-OTIM heeft een veel lager tarief van peritoneale wand zaaien in vergelijking met de traditionele orthotopische implantatie.
UG-OTIM produceert tumoren die histologische en immunobiologische kenmerken recapituleren die kenmerkend zijn voor de microomgeving van de alvleeskliertumor en daarom kunnen worden gebruikt om nieuwe therapeutische combinaties in een klinisch relevante setting te onderzoeken. We ontwikkelden dit protocol voor immuno-oncologie en kankerbiologie therapieën, maar het kan worden gebruikt in andere onderzoeksgebieden, met inbegrip van onderzoeken naar normale alvleesklierfunctie of ziekte staten zoals diabetes. De real-time echografie van de naald inbrengen en injectie is een integraal onderdeel van deze methode.
Dus visuele demonstratie van de stap is van cruciaal belang voor de juiste techniek. Voordat we met de procedure beginnen, schorten we de pancreatische nodoniënte darmsorcarcinoomcellijn van belang op in een passend volume steriele, koude PBS op ijs. Plaats kooien op een 37 graden Celsius opwarming plaat, en grondig reinigen van de biologische veiligheidskast, inductiekamer en echografie stadium met een geschikte sterilant.
Stel de opwarmingsfunctie van de ultrasone fase op 37 graden Celsius en breng na inductie van anesthesie zalf aan op de ogen van het eerste dier. Plaats de muis in rugbuizen op het echografiestadium en zet de bovenste en onderste ledematen voorzichtig vast in het podium met tape. Gebruik een steriele katoenen tip applicator om een royale laag ontharingscrème aan te brengen op het kwadrant linksboven van de buik over het gebied van de milt naar de middellijn.
Na een minuut, gebruik maken van een droog gaasje om voorzichtig te verwijderen van het haar voor het verwijderen van de overtollige ontharingscrème met een zoute natte gaas. Plaats de muis vervolgens in een van de nieuwe, schone kooien op de warmer. Voor ultrasone geleide tumorcelimplantatie, pas het ultrasone platform zo aan dat het oppervlak parallel aan de vloer is, en ga aan de linkerkant van het dier staan met het hoofd van de muis naar rechts gericht.
Pas de transducerpositie zo aan dat een dwars buikbeeld wordt verkregen en bevestig de muisledematen met tape op het platform. Laat de transducer voorzichtig zakken om contact te maken met de muisbuik en pas de transducer aan totdat de alvleesklier duidelijk zichtbaar is. Zoek de linker nier en milt om een nauwkeurige oriëntatie in de buikholte te bieden.
Wanneer de injectieplaats is gelokaliseerd, laadt u een 29 gage 1/2 inch insulinespuit met 25 microliter van de tumorcelsuspensie en veeg de naaldpunt af met een steriel alcoholpre prep pad. Gebruik stompe rand tangen om de muis huid en buikvlieswand te grijpen om de spanning op de injectieplaats te verhogen. Houd de spuit in een hoek van ongeveer 25 tot 45 graden op het oppervlak van het ultrasone platform, laat de naald langzaam door de huid en de buikvlieswand stromen.
Bevestig de naald heeft doorboord door de buikvlieswand alvorens gebruik te maken van echografie visualisatie om de naald direct te begeleiden in de alvleesklier. Wanneer de naald op zijn plaats is, injecteer langzaam de tumorcellen. De vorming van een vloeibare bolus in de alvleesklier zal duidelijk zijn in een correct geïnjecteerde alvleesklier door echografie.
Zodra het volledige volume van de suspensie is geïnjecteerd, en de vloeibare bolus kan worden waargenomen door echografie, houd de spuit zeer stil voor enkele seconden voordat langzaam intrekken van de naald uit de muis buik, oppassen niet te verstoren de geïnjecteerde cellen. Plaats de muis vervolgens in een nieuwe, schone kooi op de warmer met controle tot volledig herstel. Een goede naaldplaatsing in de alvleesklier, inclusief naalddiepte en hoek, is een kritieke stap in dit protocol.
Visualisatie van de vloeibare bolus helpt bevestigen een succesvolle tumor injectie. Het regelen van de diepte van de injectie is het moeilijkste aspect. Mijn advies is om te oefenen met tripamboo injecties en te bevestigen vloeistof bolus door zowel echografie en obductie.
Monitoring van de tumor implantatie en groeisnelheid door wekelijkse echografie onthult tumoren die zijn opgenomen binnen de grenzen van de alvleesklier gedurende de gehele experimentele periode. Hoge titer tumor injecties resulteren in een hoger percentage van de tumor lager dieren drie weken na de injectie in vergelijking met de lage titer cohort. Ondanks de vertraging in het begin van de tumor, de algehele tumor groei is niet significant verschillend tussen de twee doses.
Evenzo, terwijl de overlevingskans tussen de twee cohorten is niet significant verschillend, ze hebben de neiging om trend in de richting van iets verbeterde overleving in de lage titer cohort. De hoge titer cohort produceert ook een groter deel van de muizen met tumoren die in pre-klinische studies, door vier weken na injectie. Bij het offer, de bruto anatomie van echografie geleide orthotopische tumor implantatie model tumoren is vergelijkbaar met die van spontane KPC tumoren en histologic analyse toont een patroon van abnormale ductale structuren die vergelijkbaar is in beide modellen en dat recapituleert de morfologie van de menselijke ziekte.
In beide modellen worden de tumoren slecht geïnfiltreerd door T-Cells, maar sterk geïnfiltreerd door macrofagen. Vergeet niet om de spuit onder de juiste hoek te houden om een soepele toegang tot de alvleesklier mogelijk te maken en om te bevestigen dat de naald in de alvleesklier zit voordat u verdergaat met de injectie. Tumorgroei kan worden gecontroleerd en tumoren kunnen worden geoogst voor analyse door pho cytometrie of immunohistochemie om de impact van een interventie te bepalen.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
