Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Identifikation af nye regulatorer af plantetranspiration ved storstilet termisk billeddannelse screening i Helianthus Annuus
Chapters
Summary January 30th, 2020
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Vi tilbyder en metode til at identificere modulatorer af bladtranspiration ved storstilet screening af et sammensat bibliotek.
Transcript
Denne protokol bruger termisk billeddannelse til at identificere nye forbindelser i stand til at regulere plante transpiration. Denne teknik er alsidig med hensyn til de plantearter, der kan testes, arten af forbindelsen, og typen af billeddannelse. For at oprette planter til dyrkning, først tilføje en fire centimeter tykt lag af fine vermiculit til standard 10 af 20 tommer plantebakker uden huller og placere frø indehavere to centimeter fra hinanden i bakkerne.
Fyld frøholderne med vermiculit og læg en solsikkefrø spidse ende ned i hver holder, således at halvdelen af frøet forbliver udsat. Når alle frøene er blevet belagt, dække dem med yderligere to centimeter af fine vermiculit og tåge med vand fra oven. Efter en time, dække bakkerne med låg og placere planterne i et vækstkammer i et drivhus.
For at opsætte hydroponics systemet, fylde en passende størrelse beholder egnet til dyrkning af planter hydroponically med destilleret vand og tilsæt generelle hydroponics gødning som angivet af producenten. Brug derefter luft- og vandpumper til at lufte den resulterende hydroponics-løsning med konstant bevægelse. For at forberede hydroponics flydere, skære et ark af to centimeter tyk ekspanderet polystyren skum til dimensionerne af beholderen og bruge træ brændende værktøj til at gøre en til to centimeter diameter huller i skummet.
Placer derefter flyderne i hydroponics systemet. Fem dage efter plantning, forsigtigt trække planter ud af vermiculit. Straks placere planter i en beholder med vand i 30 minutter for at fjerne overskydende vermiculit og blødgøre de resterende pericarps.
Når de nye primære rødder er synlige, skal du fjerne pericarps i hånden efter behov. Lad frøplanterne inden for frøholderne overføres til de forberedte polystyrenskumsrister i hydroponics-systemet. Dyrk planterne i hydroponics i to dage.
Lad kemikalierne fra det lille sammensatte bibliotek tø op ved stuetemperatur. Etiket seks capless to milliliter mikrorør til negativ kontrol behandling, tre rør til ABA behandling, og de sidste 60 rør til analyse af virkningerne af de 20 kemikalier af interesse i tre eksemplarer. Der tilsættes 10 mikroliter af hvert kemikalie i hvert af reagensglassene, 10 mikroliter af 10 millimolar ABA og dimethylsulfoxid i de tre ABA-rør og 10 mikroliter dimethylsulfoxid i de seks kontrolrør.
Bland derefter omhyggeligt 990 mikroliter af 10 millimolar MES kaliumhydroxid i hvert rør. Sæt rørene i et rørstativ med den positive og negative kontrol og forsøgsrørene jævnt fordelt i rack'et for at tage højde for positionsrelateret bias. Hvis du vil konfigurere det termiske kamera, skal du først montere kameraet på en kopiholder og slutte alle kablerne til en bærbar computer.
Tænd kameraet, før du tænder for den bærbare computer, og åbn den termiske billedbehandlingsanalysesoftware. Hvis du vil justere optagelsesparametrene, skal du rulle musen hen over knappen Optag for at tillade valg af skruenøgleikonet under Postindstillinger og vælge den relevante posttilstand og de relevante indstillinger. Til behandling af frøplanterne løftes frøholderen forsigtigt og roden dyppes hurtigt i den lavvandede skål, der indeholder vand.
Skær den primære rod af hver sætteplante under vand 0,8 til en centimeter under den mest basale ende af frøholderen for at forhindre indbyggergang og indsætte friskskåret plante i et rør af kemikalier. Når alle planter er blevet overført, skal du placere planterne under det termiske billedkamera og bekræfte, at alle planterne er inden for kameraets synsfelt. Hvis du vil fokusere kameraet på overfladen af cotyledons, skal du trykke på Kontrol alt A og klikke på Optag en film.
Der åbnes et nyt vindue, der bekræfter optagelsen. Efter en til to timer skal du stoppe optagelsen. Hvis du vil have dataanalyse, skal du åbne de korrekte seq-filer og sætte filmen på pause.
Klik på tilføje en måling markør region af interesse tre af tre pixels ikon og flytte musen hen over midten af en cotyledon af den første plante. Venstre-klik på billedet for at mærke cotyledon. Mærke den anden cotyledon af den første plante på samme måde.
Når alle planterne er mærket med to markører, skal du klikke på ikonet rediger interesseområder og vente og rulle til venstre for at markere alle de områder, der er af interesse. Rul derefter musen hen over statistikvisningsikonet, og vælg det tidsmæssige plot. Der åbnes et nyt vindue.
Kør filmen, vil en graf fylde med data. Klik derefter på den dobbelte pil i diagramvinduet for at åbne en ny menu, og klik på ikonet Gem for at gemme dataene. Brugen af det røde farvestof erythrosine B viser kemikaliers evne til at blive synligt absorberet gennem en skåret rod i cotyledons af en solsikke kimplante inden for 10 minutter.
Når planter behandles med ABA, påvises en stigning i bladtemperaturen i solsikke cotyledons inden for 30 minutter, der er forbundet med faldet i den stmatale blænde og den stmatale ledningsevne. Desuden observeres en øget bladtemperatur 15 minutter efter behandling med 10 micromolar ABA og 20 minutter efter behandling med fem mikromolar ABA, der viser, at måling af bladtemperatur ved termisk billeddannelse er en god indikator til måling af stomimatal blænde og ledningsevne. I dette repræsentative eksperiment gør en standardscorebaseret statistisk behandling det muligt at identificere kemikalier, der fremmer stmatal lukning eller åbning.
For at måle virkningerne af forbindelser på transpiration, er det vigtigt at dyrke planter under optimale forhold af lys, fugtighed og temperatur. Denne protokol kan anvendes på de fleste dicots. Det kan også bruges til at vurdere virkningen af nye forbindelser på fotosyntetiske ydeevne, for eksempel ved at måle klorofyl fluorescens.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
