Bioengineering
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Otimização de processos usando micro-bioreatores automatizados de alto throughput no cultivo de células de ovário de hamster chinês
Chapters
Summary May 18th, 2020
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Aqui, apresentamos um procedimento detalhado para executar um Projeto de Experimento em um micro-bioreator automatizado seguido de colheita celular e quantificação de proteínas usando uma coluna de Proteína A.
Transcript
Neste vídeo, os usuários introduziram no software micro bioreator com planejamento e execução de projeto de experimentos ou DOE. As válvulas auxiliares analisadores também são demonstradas para otimizar a condição do processo. A incorporação do modet no software microreparator automatizado foi oficializada para a análise dos dados.
Um grande número de experimentos pode ser planejado e executado simultaneamente em pequena escala. Demonstrando o procedimento será Tamanna Nagraik, uma estudante de doutorado do meu laboratório. Comece com o procedimento de pré-cultura no cultivo principal, conforme descrito no protocolo de texto.
Para criar um novo experimento, abra o software de autocultura Amber e, na guia de introdução, clique, crie um novo experimento. Na nova guia de experimentos, digite o nome do experimento junto com a data em que ele será conduzido. Ative o posto de controle para a estação de cultura nos navios a serem utilizados durante o cultivo.
As tags DOE de ação automática também serão ativadas para uma transição fácil durante a programação do experimento DOE. Clique em next"para mudar para a próxima guia. Para definir informações sobre a adição de mídia no vaso, juntamente com anti-espuma, inóculo, alimentação e glicose, ative a placa de mídia de adição"checkpoint.
Defina o tipo de placa, nome e localização da placa que contém o meio. Clique em adicionar mídia aos vasos. Digite o volume da mídia a ser adicionada nos vasos.
Defina o mapeamento da transferência de mídia da placa para os vasos. Clique em next"para mudar para a próxima guia. Depois que as informações da mídia foram alimentadas no software, atribua as condições de cultivo.
Clique em mídia de condição e preencha a temperatura, alvo DO, limite PH superior e RPM de agitação. Em seguida, clique em Agitar"ou descer mexendo. Para definir a adição de inóculos nos vasos, ative a placa celular adicionar.
Defina o tipo de placa, nome e localização da placa que contém o meio. Clique em adicionar células aos vasos. Insira o tempo da inoculação e o volume da mídia a ser adicionado aos vasos.
Defina o caminho percorrido pelo manipulador líquido para transferir a célula da placa para os vasos. Clique em next"para mudar para a próxima guia. Para definir a adição de ração, glicose e anti-espuma, ative a placa de alimentação adicionar e defina o tipo de placa, nome e localização.
Clique em adicionar alimentação aos vasos e digite o volume do feed a ser adicionado aos vasos. Dependendo do cultivo, adicione o número de adição de ração. Para este cultivo, o reator é alimentado após 72 horas a cada 24 horas.
Adicione manualmente o atraso de tempo entre a alimentação, inserindo os dados em atraso das células adicionadas. O primeiro dia de alimentação é depois de 72 horas de inoculação, o próximo é depois de 96 horas, e assim por diante. Defina o mapeamento da transferência da alimentação da placa para os vasos.
Para definir a amostragem durante o cultivo, ative a placa de amostra de ação e defina o tipo de placa, nome e localização. Verifique a amostra dos vasos e digite o volume da amostra a ser removida dos vasos. Certifique-se de que o volume não diminua abaixo de 10 mililiters durante todo o curso de cultivo.
Adicione o número de amostras a serem colhidas durante o cultivo. Semelhante à alimentação, adicione o tempo da amostra sendo removida do vaso para cada ponto de amostra de entrada. Salve o processo.
Agora está pronto para execução. Por fim, defina o mapeamento da transferência da amostra dos vasos para a placa. Abra o Software Amber 15 DOE.
Clique em investigação" e selecione novo. Digite o nome da nova investigação do DOE na caixa de diálogo da investigação criada. Para atribuir um experimento à investigação do DOE, abra a receita criada para estudar os diferentes parâmetros.
Clique em procurar e selecione o respectivo experimento. As etiquetas da nave já estão alistadas na coluna. Para definir o fator DOE desejado, selecione o parâmetro e clique na coluna rotulada, fator DOE.
Selecione novas"e adicione as unidades, abreviação, bem como limite inferior e superior dos fatores. Na guia respostas, defina os valores a serem considerados para a análise dos dados. Clique em editar respostas do DOE e defina o nome da resposta, abreviação, unidades e limites mínimos e máximos.
Uma vez definidas as respostas, selecione a variável âmbar para cada resposta e defina. Uma resposta pode ser automaticamente associada a uma variável bioreator de micróbios. Escolha a variável necessária na lista suspensa.
Alterar a equação para cada resposta, dependendo da exigência. As escolhas entre os dados mínimo, máximo, primeiro, último e médio. Para criar um design, use o Assistente de Design Inicial para selecionar o tipo de design experimental e para adicionar ou remover o número de réplicas e pontos centrais.
Selecione o objetivo, que determina a escolha de designs e modelos. Finalize e crie pacotes de trabalho que podem ser importados para o Software de autocultura Âmbar, conforme descrito no protocolo de texto. Na guia do experimento, clique em criar o experimento DOE e navegue pelo pacote de trabalho criado usando o software DOE.
Inicialize o processo clicando em iniciar. Uma vez executado o experimento, exporte os dados usando os resultados do DOE de exportação. A janela de resultados do DOE de exportação é aberta, e as linhas que indicam o navio cultural e a estação estão listadas na tabela.
Selecione as linhas desejadas e clique em exportar linhas selecionadas"ou exporte dados experimentais" para armazenar todos os resultados e salvar o arquivo para análise suplementar. Importe os dados para o Módulo Amber DOE mudando para a guia resultados e selecionando os resultados de importação. Procure o arquivo de dados desejado e clique em analisar resultados.
O crescimento celular nos bioreatores automatizados de micróbios é comparável com os bioreatores multiuso. Comparando a concentração celular de três escalas diferentes, observa-se que o bioreator de micróbio automatizado de 15 mililitros imita o bioreator de vidro de dois litros. Os resultados do frasco de shake também são comparados para exibir o benefício de Amber.
A influência da velocidade de agitação diferente e da PH é estudada nos bioreatores de micróbios automatizados. Aqui é mostrada uma comparação da concentração celular viável, ou VCC, e concentração de anticorpos monoclonais nos diferentes bioreatores de micróbios. Pode-se observar a influência negativa do PH 6.9 no VCC.
Além disso, o crescimento das células melhorou significativamente sob a cultura em PH 7.3 em comparação com ph 7.1. Aqui estão as parcelas de contorno de resposta do VCC e a concentração de anticorpos monoclonais. Os valores são comparáveis nas embarcações com a mesma velocidade de PH e agitador diferente, indicando que a velocidade do agitador coletada para este processo não tem influência significativa na saída do processo.
Todas as instruções dadas à máquina devem ser cuidadosamente escritas para evitar erros durante a execução do experimento. O software é flexível e pode executar uma série de experimentos ao mesmo tempo, reduzindo assim o tempo necessário para otimizar um processo. O desenho do experimento é útil no campo do bioprocesso, pois os resultados dão compreensão do processo baseado em conhecimento, que pode ser estendido a outros organismos até certo ponto.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
