En reviderad metod för att inducera sekundära lymfödem i bakdelen av möss

Det övergripande målet med denna metod är att inducera konsekvent sekundärt lymfödem i hindlimb av möss utan att orsaka allvarliga sjuklighet. Denna metod kan användas för att inducera sekundärt lymfödem i hindlimb av möss. Den största fördelen med denna metod är att det löser obetydliga lymfödem varar minst åtta veckor utan att orsaka allvarliga sjuklighet.

Någon ny till förfarandet kan kämpa med mikrokirurgiska tekniker. Vi rekommenderar därför mikrokirurgisk utbildning och flera övningsrutiner för att säkerställa ett lyckat resultat, men också för att förbereda forskaren så att han eller hon kan utföra proceduren mer effektivt. Ställ in strålkällan och bedöva musen enligt beskrivningen i protokollet.

Placera en 1,5 millimeter tjock bly pad för att säkerställa att endast det område som genomgår kirurgi blir bestrålade. Det visade exemplet är av en efter-kirurgi mus för att klargöra området. Administrera en dos av 10 grå bestrålning.

Forskarna måste vidta försiktighetsåtgärder när de arbetar med strålning. Under detta experiment alla bestrålning utfördes i en strålning isolerad rum. Och strålningskällan var bara påslagen när all personal hade lämnat rummet.

Väg musen före operationen. Undersök bedövningsdjup genom paw eller tail pinch test. Raka benet valt för förfarandet.

Ställ in flödet av syre till 0,8 Liter per minut. Koppla ihop den med en noskon. Applicera oftalmisk salva.

Injicera 0,5 milliliter saltlösning subkutant, helst i scruff av musen för att förhindra hypovolemi under operation. Placera musen på den kirurgiska trasan i ryggläge. Placera noskonen över nosen.

Fixera änden av bakbenen försiktigt med tejp, för att förhindra att musen skiftar under operationen. Lyft huden med jämna tångar och klipp en liten öppning cirka fem millimeter proximala till popliteal fossa. Skjut in vass sax i öppningen och klipp mot knäet, så att snittet slutar precis ovanför knät.

Se till att inte punktera de underliggande kärlen, genom att lyfta huden med tåten medan klippning. Flytta musen till benägen position och slutföra det omkretsande snittet. Dissekera huden till ett par millimeter ovanför vinkeln.

Kom ihåg att hålla vävnaden fuktig med steril koksaltlösning under hela proceduren. Dra tillbaka huden på det proximala sårverket med ett elastiskt upprullningsdon. Och se till att ischiasven syns som på bilden.

Injicera 0,01 milliliter Patent Blue V subkutant mellan den andra och tredje tå. Tryck försiktigt på tassen ett par gånger för att distribuera Patent Blue V.Fördelningen av Patent Blue V kan ses genom mikroskopet. De strukturer som behövs för att visualiseras är, den proximala lymfkärl, PLV, den popliteal lymfkörtel, PLN, den första distala lymfkärl, DLV1, och den andra distala lymfkärl, DLV2.

Förstora för att visualisera PLV och ligate det med hjälp av en 10-0 nylon sutur. Tryck på tassen för att säkerställa att ingen Patent Blue passerar proximalt till ligaturen. Ligate de två distala lymfkärlen som visas.

Tryck på tassen flera gånger igen för att försäkra dig om att ingen Patent Blue V passerar proximalt till ligaturen. I detta exempel kan man se att ett av lymfkärlen brister på grund av att ligaturen hindrar lymfflödet. Ta bort popliteal lymfkörtknuten, lymfkörtknuten har en slät pärla-liknande yta och är färgad av Patent Blue V i motsats till den omgivande fettvävnaden.

Innan du tar bort inguinal fett pad, kauterisera detta fartyg som visas. Ta sedan bort fettdynan i ett stycke. Se till att det inte sker någon aktiv blödning.

Detta är ett exempel på en lokaliserad inguinal lymfkörtel. Lymfkörtknuten som ligger i inguinal fett pad är sällan färgad av Patent Blue V och kan vara svårt att skilja från fettet. Att ta bort fettdynan i ett stycke är det bästa sättet att säkerställa att lymfkörtknuten har tagits bort.

Suturera huden kanterna ner till muskelfascia, med en 6-0 nylon sutur med hjälp av tlyckor och nålhållare, lämnar en lucka på två till tre millimeter, för att begränsa den ytliga lymfflödet. Detta är ett exempel på de färdiga suturer, i popliteal föl, den laterala sidan av bakb, ovanför knät, och den mediala sidan av bakbnäben. Administrera analgesi och väga musen efter operationen, placera den sedan i ett skåp uppvärmt för återhämtning.

Upprepa proceduren för bestrålning före operationen. Detta diagram visar den kombinerade medelvärdet av hindlimb volymen av tre separata studier i åtta veckor efter operationen. 31 möss ingick totalt.

X-axeln representerar veckor efter operationen. Y-axeln representerar bakbvolym i kubikmillimeter. Pilstaplarna representerar standardavvikelsen.

Det är att vänta att svullnaden från operationen och det inducerade lymfödem kommer att minska under de första fyra veckorna. Efter de första fyra veckorna ser vi en relativ stabilt tillstånd av lymfödem. Volymen av kontrollen hindlimb ökar under de åtta veckorna, alltså strikt säga skillnaden i volym mellan lymfödem hindlimb och kontroll hindlimb, detta var oväntat.

Orsaken spekuleras vara att mössen använde sin icke-opererade hindlimb mer än den opererade hindlimben under veckorna efter operationen. Detta kan leda till hypertrofi av kontrollen hindlimb och kanske förklara ökningen i volym. För enskilda siffror om de tre studier som ingår var vänlig och läs protokollet.

Denna tabell visar Sidaks multipla jämförelsetest för de kombinerade volymmätningarna av de tre inkluderade studierna. Det beräknade P-värdet visar att det finns statistiskt signifikant skillnad mellan baktänderna med inducerat lymfödem och kontroll hindlimbs, under alla åtta veckors uppföljning. För individuell statistisk analys på de tre inkluderade projekten läs protokollet.

Denna metod inducerar statistiskt signifikant lymfödem, varar minst åtta veckor. Förfarandet kan användas för att studera petrificialitet av lymfödem och forskning nya behandlingsalternativ. Efter att ha sett den här videon, du borde ha fått en förståelse för hur man inducerar sekundära lymfödem i hindlimb av möss, med hjälp av en kombination av mikrokirurgi och före och efter operationen bestrålning.

När behärskar, kan det kirurgiska ingreppet utföras i 45 minuter.