7,831 Views
•
09:50 min
•
November 02, 2019
DOI:
Bu yöntemin genel amacı, ciddi morbiditeye neden olmadan farelerin arka eksinde tutarlı sekonder lenfödemi indüklemektir. Bu yöntem farelerin arka eksinde sekonder lenfödemi indüklemek için kullanılabilir. Bu yöntemin en büyük avantajı, ciddi morbiditeye neden olmadan en az sekiz hafta süren önemsiz lenfödemi giderir.
Prosedüre yeni yeni gelen biri mikrocerrahi tekniklerle mücadele edebilir. Bu nedenle başarılı bir sonuç elde etmek için mikrocerrahi eğitimi ve çeşitli uygulama prosedürleri ni öneriyoruz, aynı zamanda araştırmacıyı daha verimli bir şekilde uygulayabilmesi için hazırlamak için. Radyasyon kaynağını ayarlayın ve protokolde açıklandığı gibi fareyi anestezi edin.
Sadece ameliyat olan alanın Radyasyona maruz kalmasını sağlamak için 1,5 milimetre kalınlığında bir kurşun ped yerleştirin. Gösterilen örnek, bölgeyi netleştirmek için ameliyat sonrası bir faredir. 10 gri ışınlama dozu ver.
Araştırmacılar radyasyon ile çalışırken önlem almalıdır. Bu deney sırasında tüm ışınlama bir radyasyon yalıtımlı odada yapıldı. Radyasyon kaynağı sadece tüm personel odadan çıktığında açık oldu.
Ameliyat öncesi fareyi tart. Pati veya kuyruk kıskaç testi ile anestezik derinliği inceleyin. İşlem için seçilen bacağı tıraş edin.
Oksijen akışını dakikada 0,8 Litre’ye ayarlayın. Bir burun konisi ile bağlayın. Oftalmik merhem uygulayın.
Cerrahi sırasında hipovolemi önlemek için tercihen farenin scruff 0.5 mililitre salin subkutan enjekte. Fareyi cerrahi bezin üzerine supine pozisyonunda yerleştirin. Burun konisini burun üzerine yerleştirin.
Farenin ameliyat sırasında kaymasını önlemek için arka bacakların ucunu bantla hafifçe sabitleyin. Pürüzsüz forseps ile cilt kaldırın ve popliteal fossa yaklaşık beş milimetre proksimal küçük bir açılış klip. Keskin makasları açıklığa doğru kaydırın ve dize doğru titretin, böylece kesi diz den hemen yukarıda sona erer.
Kırpma sırasında forseps ile cildi kaldırarak, altta yatan damarları delmemeye niçin emin olun. Fareyi yatkın konuma getirin ve çevresel kesiği tamamlayın. Açının birkaç milimetre yukarısına kadar deriyi inceleyin.
Tüm işlem sırasında steril salin ile doku nemli tutmak için unutmayın. Proksimal yaraların derisini elastik bir retraktörle geri alın. Ve siyatik ven gösterildiği gibi görünür olduğundan emin olun.
Enjekte 0.01 mililitre Patent Mavi V subkutan ikinci ve üçüncü ayak arasında. Patent Mavi V.Patent Mavi V dağıtımı mikroskop yoluyla görülebilir dağıtmak için yavaşça pençe birkaç kez basın. Görüntülenecek yapılar proksimal lenf damarı, PLV, popliteal lenf nod, PLN, ilk distal lenf damarı, DLV1 ve ikinci distal lenf damarı DLV2’dir.
PLV görselleştirmek ve 10-0 naylon dikiş kullanarak ligate büyütmek. Hiçbir Patent Mavi ligature proksimal geçer emin olmak için pençe basın. Gösterildiği gibi iki distal lenf damarları ligate.
Hiçbir Patent Blue V ligatür proksimal geçer emin olmak için pençe birkaç kez tekrar basın. Bu örnekte, lenf damarlarından birinin lenf akışını engelleyen bağ nedeniyle patlar görülebilir. Popliteal lenf düğümü çıkarın, lenf düğümü pürüzsüz bir inci gibi yüzeye sahiptir ve çevreleyen yağ dokusuaksine Patent Mavi V ile renklidir.
Inguinal yağ yastığı çıkarmadan önce, gösterildiği gibi bu damar cauterize. Sonra tek parça halinde yağ pedi çıkarın. Aktif kanama olmadığından emin olun.
Bu bulunan inguinal lenf düğümü bir örnektir. Inguinal yağ yastığı bulunan lenf düğümü nadiren Patent Mavi V tarafından renkli ve yağ ayırt etmek zor olabilir. Tek parça halinde yağ yastığı çıkarma lenf düğümü kaldırıldı sağlamak için en iyi yoldur.
Dikiş alt kas fasya için deri kenarları, forseps ve iğne tutucu kullanarak 6-0 naylon dikiş ile, iki ila üç milimetrelik bir boşluk bırakarak, yüzeysel lenf akışını kısıtlamak için. Bu bitmiş dikişbir örnektir, popliteal fossa, arka bacak lateral tarafında, diz üzerinde, ve arka bacak medial tarafı. Analjezi uygulayın ve ameliyat sonrası faretartın, sonra kurtarma için ısıtılan bir kabine yerleştirin.
Ameliyat öncesi ışınlama işlemini tekrarlayın. Bu grafik, ameliyattan sonraki sekiz hafta içinde yapılan üç ayrı çalışmanın ortalama arka kaynık hacmini göstermektedir. Toplam 31 fare dahil edildi.
X ekseni ameliyattan haftalar sonrasını temsil eder. Y ekseni metreküp olarak arka bacak hacmini temsil eder. Ok çubukları standart sapmayı temsil ediyor.
Bu ameliyat ve indüklenen lenfödem ilk dört hafta içinde azalacak şişlik beklenebilir. İlk dört haftadan sonra göreceli olarak stabil bir lenfödem durumu görüyoruz. Kontrol arka ekstremite hacmi sekiz hafta boyunca artar, böylece kesinlikle lenfödem hindlimb ve kontrol arka ekstremite arasındaki hacim farkı söyleyerek, bu beklenmedik oldu.
Bunun nedeni, farelerin ameliyattan sonraki haftalarda ameliyat edilen arka ekstremiteden daha fazla ameliyat edilmeyen arka ekstremitelerini kullanmaları dır. Bu kontrol arka ekstremite hipertrofisine yol açabilir ve belki hacminde artış açıklamak. Dahil edilen üç çalışmadaki tek tek rakamlar için lütfen protokolü okuyunuz.
Bu tablo, Sidak’ın üç çalışmanın birleşik hacim ölçümleri için çoklu karşılaştırma testini göstermektedir. Hesaplanan P-değeri, sekiz haftalık takip boyunca indüklenen lenfödemi olan arka bacaklar ile kontrol hindlimbs arasında istatistiksel olarak anlamlı fark olduğunu göstermektedir. Dahil edilen üç proje üzerinde bireysel istatistiksel analiz için lütfen protokolü okuyun.
Bu yöntem istatistiksel olarak anlamlı lenfödem neden olur, en az sekiz hafta süren. Prosedür lenfödem petrifisiti incelemek ve yeni tedavi seçenekleri araştırmak için kullanılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, mikrocerrahi ve ameliyat öncesi ve sonrası ışınlama bir arada kullanarak, farelerin arka eksinde sekonder lenfödem neden nasıl bir anlayış kazanmış olmalıdır.
Bir kez hakim, cerrahi işlem 45 dakika içinde yapılabilir.
Bu hayvan modeli, araştırmacıların farelerin arka eklerinde en az 8 hafta süren istatistiksel olarak anlamlı sekonder lenfödemi indüklemelerini sağlar. Model lenfödem patofizyolojisi çalışma ve yeni tedavi seçenekleri araştırmak için kullanılabilir.
Read Article
Cite this Article
Wiinholt, A., Jørgensen, M. G., Bučan, A., Dalaei, F., Sørensen, J. A. A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice. J. Vis. Exp. (153), e60578, doi:10.3791/60578 (2019).
Copy