Reduserte komplikasjoner etter arteriell gjentilkobling i en rottemodell av ortotopisk levertransplantasjon

Rotte ortotopisk levertransplantasjon modell er et kraftig verktøy for å studere flere aspekter av levertransplantasjon. Fra en immunrespons på infeksjonen, til tekniske aspekter ved prosedyren. De viktigste fordelene med denne teknikken er at det kan redusere komplikasjoner, bedre representerer komisk levertransplantasjon, og forbedre mottakerens overlevelse.

Denne modifiserte rotte ortotopiske levertransplantasjonsprotokollen etterligner nøye aspekter ved menneskelig levertransplantasjon og vil tjene som variabel og klinisk relevant forskningsmodell. Det er vårt håp at seerne gjennom den visuelle demonstrasjonen kan lære alle detaljene og forkorte læringskurven for å mestre mikrokirurgiferdigheten som kreves for denne teknikken. Etter å ha injisert 300 internasjonale enheter av heparinnatrium i intrahepatisk dårligere vena cava av en bedøvet 12 til 14 uker gammel rotte, gjør en fem millimeter snitt under gallekanalen bifurcation, og sett gallekanalen stent inn i den vanlige gallekanalen.

Sikre stenten med en 7-0 silke ligatur, en millimeter over snittet, og en ligatur 10 millimeter under bifurcation. Klipp gallekanalen mellom de to båndene og utsett riktig leverarterie. Del gastroduodenalarterien mellom to 7-0 silkeligaturer, og utsett venstre magearterie, miltarterie og cøliakistamme.

Deretter kutter venstre magearterie, miltarterie og cøliakistamme mellom arteriebåndene. Bruk en 20 milliliter sprøyte utstyrt med en 21,5 gauge nål for å injisere sakte 20 milliliter på fire grader Celsius Ringers laktatoppløsning i portalvenen. For å forberede donorleveren, kutt åpne bifurcation av cøliakistammen, miltarterien og venstre magearterie for å danne en større arteriell ermet mansjett og sett inn 1,5 millimeter lengde 24 gauge arteriell stent i donor vanlig leverarterie via mansjetten.

Fest deretter stenten med en 8-0 polypropylen ligatur og skyll stenten med Ringers laktatløsning. Etter å ha avslørt portalvenen til en 12 til 14 uker gammel rottemottaker, del mottakeren gallegang på 0,5 centimeter under en flisleggerbifurcation, og sett inn en gallekanalstent i den distale felles gallekanalen. Eksponer venstre, midten og høyre leverarterier og bind karene distale til leverarteriebifurcation.

Skjær arteriene nær leveren over båndene og legg et langt tynt stykke gasbind bak super hepatisk dårligere vena cava. Plasser en 3D-trykt intrahepatisk vena cava holder bak intrahepatisk vena cava og bruk en Tenno ikke-absorberbar monofilament sutur for å sy endene av 3D trykt håndtak sammen. Bind en 7-0 silkeligatur løst under både 3D-trykt holderen mellom intrahepatisk vena cava og portalvenen, og klem den intrahepatiske vena cava like over høyre nyrevene under 3D-trykt cavaholderen.

Klem portalvenen like over pylorisk vene og under 3D-trykt PV-holder. Bruk en tre milliliter sprøyte med en 27 gauge nål festet, skyll to milliliter på 37 grader Celsius Ringers laktatløsning via bifurcation av portalvenen, og klemme super hepatic vena cava over leveren med en Kitzmiller klemme. Klipp deretter under klemmen så nær leveren som mulig og kutt over 3D-trykte holdere for både portalvenen og den inter lever vena cava for å fjerne mottakerleveren.

For donor levertransplantasjon, nøye orientere donor leveren i mottakerens kroppshulrom på en slik måte at en øvre brostein anastomose kan opprettes. Sett portalvenemansjetten fra donoren inn i mottakerportalven og stram 7-0 silkeslipset. Fjern den atraumatiske klemmen fra super hepatisk vena cava og fjern mikrovaskulær klemme for portalvenen.

Etter å ha sammenlignet leveren med varmt blod igjen, sett donor intrahepatisk vena cava cuff inn i mottakeren intrahepatisk vena cava og fest fartøyet med 7-0 silkeslips. Fjern deretter donor intrahepatisk vena cava klipp før du fjerner mottakerklemmen. For å utføre en arteriell anastomose, kutt av den delen av cøliakistammen fra donoren som strekker seg utover stenten, og klemmer riktig leverarterie av mottakeren.

Klipp av slipset på slutten og eventuell ekstra vev rundt fartøyet. Og bruk Ringers laktatløsning til å skylle lumen til både donor- og mottakerfartøyets ender. Bruk en buet nål, plasser en 10-0 ethilon sutur gjennom venstre aspekt av donor hepatisk arterie, 2,5 millimeter over den distale åpningen av stenten, og ut gjennom enden av stenten.

Transfix mottakeren riktig leverarterie 0,5 millimeter under fartøyets åpning fra venstre side av fartøyet, til høyre side av arterien. Plasser neste sutur gjennom høyre vegg av donor hepatisk arterie fra innsiden til utsiden, i en avstand fra stentåpningen identisk med den opprinnelige sømmen, og trekk opp på de to endene av 10-0 ikke-absorberbar monofilament for å skli mottakeren riktig leverarterie opp, og inn i leverarteriestenten. Deretter knytter 10-0 ikke-absorberbar monofilament med seg selv over donor hepatisk arterie.

Skyll både mottaker og donor gallekanaler, og sett donorgallekanalene stent inn i mottakeren gallegang. Stram deretter slipset som tidligere ble plassert rundt mottakerens gallekanal. I dette representative eksperimentet viste den ikke-leverarterien anastomose rotte ortotopisk levertransplantasjonsmodell henholdsvis 50 og 37,5 %overlevelse, ved henholdsvis 21 dager og 60 dager etter operasjonen.

Derimot økte den optimaliserte leverarterietilkoblingsprosedyren betydelig den langsiktige overlevelsen. Histologisk analyse av en representativ undergruppe av transplanterte dyr uten leverarterietilkobling viste tegn på hypoksisk leverskade med sentral lobular nekrose, på dag seks og tretten etter transplantasjon. Omfattende levernekrose var forbundet med enormt forhøyede nivåer av alaninimmunooverføringer og aspartatamininotransferase hos disse dyrene.

I motsetning viste transplanterte rotter med leverarterietilkobling ingen tegn på leverskade og histoologisk analyse viste en normal leverparenchymastruktur, med organisert acini, lobules, arterier og gallekanaler. I tillegg viste histologisk analyse av leverene fra ikke hepatisk arterietilkobling modell rotter reaktive endringer etter hypoksisk leverskade. Inkludert markedet galle duct spredning, peri portal fibrose og betennelse, og forvrengt leverparenchyma.

Denne protokollen kan tilpasses for å studere mange immunologiske og kirurgiske aspekter ved levertransplantasjon og kan tjene som en modell for testing av nye terapeutiske inngrep som er relevante for transplantasjon.