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Étudier les effets neurocomportementaux des polluants environnementaux sur les larves de poissons zèbres
Chapters
Summary February 5th, 2020
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Un protocole expérimental détaillé est présenté dans cet article pour l'évaluation de la toxicité neurocomportementale des polluants environnementaux à l'aide d'un modèle de larves de poissons zèbres, y compris le processus d'exposition et les tests pour les indicateurs neurocomportementaux.
Transcript
Notre protocole fournit un processus clair pour étudier les effets neurocomportementaux des substances et les polluants d’intérêt sur les larves de poisson zèbre et pour révéler la neurotoxicité potentielle de ces agents. La technique peut être effectuée à l’aide d’essais à haut débit de neurofaviors dans le modèle du poisson zèbre. Cette méthode peut être appliquée pour évaluer les effets allèles-neurocomportementaux des polluants pour démontrer la neurotoxicité potentielle sur nous les humains, car le génome du poisson zèbre a une homologie élevée avec les humains, de sorte qu’il peut fournir des indications pour la gestion chimique et les problèmes de santé publique causés par les polluants.
Comme le poisson zèbre a l’avantage d’un criblage à haut débit, cette méthode donne un aperçu à la fois du développement de psychotropes et de la recherche toxicologique environnementale. Ne vous faites pas intimider par l’étude de la première expérience. Si vous suivez le protocole, vous aurez un résultat positif.
Au moins deux heures avant d’effectuer une expérience, réglez la température ambiante à 28 degrés Celsius et ajoutez 800 microlitres de solution d’exposition à chaque puits d’une microplaque de 48 puits. Ensuite, utilisez une pipette d’un millilitre avec une pointe modifiée pour transférer une larve dans 200 microlitres de solution d’exposition à chaque puits de la microplaque en préparation d’une expérience de locomotion et d’angle de trajectoire. Pour préparer une microplaque de six puits pour des expériences de comportement social, ajoutez quatre millilitres de solution d’exposition à chaque puits des six microplaques du puits et transférez deux larves dans 200 microlitres de solution d’exposition à chaque puits.
Avant de commencer le test, ouvrez le logiciel de surveillance à haut débit et sélectionnez le module d’angles de trajectoire des rotations de suivi. Transférez la microplaque de 48 puits sur la plate-forme d’enregistrement et tirez vers le bas de la couverture. Cliquez sur Fichier et Générer le Protocole pour commencer à générer un nouveau protocole et entrez 48 dans la position de comptage de localisation.
Cliquez sur Paramètres, paramètres de protocole et temps, définissez la durée de l’expérience à une heure et 10 minutes, et la période d’intégration à 60 secondes. À l’aide de l’outil de forme elliptique, dessinez un cercle autour du haut à gauche bien. Sélectionnez le cercle et cliquez sur Copier, Top Right Mark, Coller et Sélectionnez.
Utilisez la souris pour faire glisser le cercle copié vers le haut à droite bien et cliquez sur Copier, Top Right Mark, Coller, et Sélectionnez à nouveau. Ensuite, faites glisser le cercle copié vers le bas à droite bien et cliquez sur Construire et Effacer les marques. Le système dessinera automatiquement un cercle sur tous les autres puits de la plaque.
Ensuite, cliquez sur Draw Scale et tracez une ligne d’étalonnage sur l’écran. Entrez la longueur de la ligne, réglez l’appareil et cliquez sur Appliquer au Groupe. Réglez la couleur animale au noir et fixez le seuil de détection à 16 à 18 pour permettre la détection des animaux, réglez l’inactif à petite vitesse à 0,5 centimètre par seconde et la petite à grande vitesse à 2,5 centimètres par seconde.
Réglez les classes d’angle de chemin de moins 180 à plus 180 comme indiqué. Pour définir les conditions de lumière, cliquez sur Paramètres, Conduite légère, Utilise l’une des 3 méthodes de déclenchement ci-dessous, et stimuli améliorés pour définir les conditions de lumière. Cliquez sur Edge et définissez une période sombre de 10 minutes, suivie de trois cycles d’alternance de périodes de lumière et d’obscurité de 10 minutes.
Ensuite, enregistrez le protocole. Lorsque tous les paramètres ont été définis, baisser l’éclairage dans la salle d’essai et permettre aux larves de s’acclimater dans le système pendant 10 minutes. À la fin de la période d’acclimation, cliquez sur Expérimenter et Exécuter, et créez le dossier dans lequel les fichiers expérimentaux doivent être enregistrés.
Ensuite, entrez le nom du résultat et cliquez sur Fond et Démarrer. À la fin de l’expérience, cliquez sur Expérience et Arrêt. Retournez ensuite la microplaque de 48 puits à l’incubateur de lumière pour des expériences ultérieures.
Étant donné que chaque groupe peut comprendre 16 animaux, le système peut être utilisé pour effectuer des tests à haut débit de la locomotion et de l’angle de trajectoire dans différentes conditions de traitement dans une seule microplaque de 48 puits. L’activité sociale des larves peut être testée à l’aide de plaques de six puits. Dans cette expérience représentative, le groupe de concentration le plus élevé de BDE-47 a démontré une hypoactivité prononcée pendant la période foncée, alors qu’aucun changement dû à l’exposition de BDE-47 n’a été observé pendant les périodes légères.
De plus, le groupe à forte concentration de 6 hydroxy-BDE-47 a effectué moins de virages de routine et de moyenne à cinq jours après la fécondation. Cependant, des virages plus réactifs ont été induits dans les groupes d’exposition 6-méthoxy-BDE47. L’activité sociale du poisson zèbre a été stimulée par la paraffine chlorée-70 et la paraffine chlorée à chaîne courte-52b, tandis que la paraffine chlorée à longue chaîne-52a a raccourci la durée de contact des larves.
Il est important de s’assurer que les larves transférées pour le test doivent avoir une capacité normale de natation et aucune malformation. D’autres variables, telles que la préférence de couleur, la préférence claire-foncée, toute obscurité, mouvements de queue du poisson zèbre, peuvent être incluses pour répondre à des questions supplémentaires au sujet de la toxicité neurocomportementale des polluants environnementaux. Les solutions d’exposition BDE-47 sont neurotoxiques et ont un potentiel de perturbation endocrinienne, alors assurez-vous d’éviter tout contact direct avec la peau.
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