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Summary February 13th, 2021
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我们已开发出一种有效的气味信号采样和分析方法，以便了解气味信号在动物通信中如何使用。特别是，我们使用头部空间固体相微缩结合气相谱-质谱法来分析动物气味和气味标记的挥发性成分。
Transcript
气味在动物交流中的作用目前被低估，因此研究不足。特别是对于支撑包括人类在内的动物嗅觉信号的化学变化，人们知之甚少。这也是由于方法学上的挑战，记录和量化动物用来交流气味的化合物。
使用高度复杂的化学混合物时存在一些潜在的挑战，这些挑战还包括采样和分析气味样本时的挑战。我们正在对动物使用的气味进行分析，以便了解它们在相互交流时如何使用它们。我们结合细胞化学与生物生态内分泌学和细胞学，以提高我们对气味在动物传播中的作用的理解。
对于我们目前在伍尔弗汉普顿的方法，我们采用了头空间固体相微结构结合气相质谱法的技术，该技术是过去采用的，并且采用了看不见的方法。样本气味以以下方式收集。一、自发释放习惯性研究对象的样本气味。
例如，动物园灵长类动物通过在无菌滤纸或尿液样本上直接进入小瓶的气味标记收集气味腺气味分泌物。二、训练后研究对象采用正增援收集气味分泌物，用无菌棉签擦香味一目了然。第三，研究对象在服用后，通过用无菌棉签摩擦气味腺体，通过样品将无菌10毫升螺丝盖、透明玻璃瓶和密封螺丝顶盖加入P T F E硅胶部门来收集气味分泌物。
立即将小瓶存放在零下20摄氏度。请注意，在采样过程中使用清洁的个人防护设备（如氮化物手套）至关重要。更换手套经常避免与样品和小瓶直接接触皮肤。
它更倾向于使用全新的小瓶。但是，在使用小瓶的情况下，必须预先清洁小瓶，然后使用相同的协议。每次收集气味标记时，都要取环境空白。
这样做时，将未使用的滤纸或棉签和小瓶暴露在环境中，同时进行采样。样品在实地准备。对于有香味标记的滤纸，从纸上切开大约 10 毫米的正方形，放入 10 毫米螺丝上顶头空间小瓶。
对于拭子，在棉签轴的末端切掉拭子头，放入头部空间小瓶中。准备好每个样品后，处理或清洁刀片使用，以削减采样介质，用适当的抗菌擦拭或酒精和彻底干燥。将所有样品存放在零下20摄氏度。
请注意，样品应储存在零下20摄氏度，但是，在野外存储的最低温度是可能的，并转移到零下20摄氏度的最早机会。在分析之前，从冰柜中取出样品，并允许自然行走至室温下至少一小时。在 GCMS 上设置分析方法，如下所示，用于 SPMS 分析条件，遵循制造商在首次使用之前对 SBME 纤维进行条件调试的指示。
SBME 装配正确安装在自动取样器中，并且与自动取样器托盘纤维调节单元和 GC 入口端口对齐至关重要。不正确的对齐可能导致 Sbme 纤维的损坏或破坏。确保打开纤维调节装置的栖息气体供应。
为了提高样品保留时间的一致性，分析方法是将样品小瓶锁定到自动取样盘中，将空头空间小瓶作为自动取样器托盘第一位置的系统空白。将环境空白放在第二个位置，然后将所有剩余样品放在自动取样盘的后续位置进行分析。创建分析序列以分析样品托盘内的每个样本。
在大规模猎人主屏幕中，为菜单栏选择序列，然后从下拉菜单加载序列。将通过插入作为完成的序列表保存的相应信息，显示一个空白序列表，完成所有空白和样品的序列表。请注意，序列表的确切信息将取决于表的实验室格式。
最小信息通常包括样本类型样本名称、文件位置、数字分析方法、数据文件位置以及与样本名称相匹配的数据文件名称的名称分配。分析过程中，可以向序列添加其他示例。通过从菜单栏中选择序列来运行序列，然后运行序列。
分析后，将样品尽快返回冰柜。请注意，有可能重新分析样品。但应当指出，在初步分析过程中，可能完全提取了一些挥发性成分，有些化合物可能在40摄氏度下经历了热和细菌分解。
因此，色谱图的结果可能不能完全代表原始的气味标记。初步数据分析包括集成色谱图以获取保留时间和峰值区域数据，以及使用凸轮站软件和巢质量光谱数据库对峰值进行初步识别。数据分析可以手动进行，也可以通过半自动化方法进行。
如果使用半自动化方法，则有时进行一定程度的手动数据分析以验证暂定身份验证是有益的。通过单击左侧导航栏中的相应文件来启动数据分析打开数据文件。总离子色谱 TIC 将显示在数据分析屏幕的顶部窗口中。
要使用 RTE 集成商集成 TIC，请首先从菜单栏中选择色度图，然后从弹出框打开的下拉菜单中选择集成商并选择 RTE 集成商。返回色谱菜单，现在选择集成。要调整集成参数，以便将峰值或大于基线噪声的三倍进行集成，请再次从菜单栏中选择色度图，然后从下拉菜单中选择 MS 信号集成参数。
在弹出框中，根据适当的1.0调整最小峰值区域，在我们的示例中产生可接受的结果。要识别峰值并生成汇总报告，请从菜单栏中选择导出报告，然后将库搜索结果报告到 XLS。请注意，要搜索的光谱库以及要显示的库匹配数，在进行库搜索之前，需要在软件中预设。
由此产生的电子表格报告包含每个峰值的集成数据，以及分配身份的暂定光谱库匹配。通常，图书馆质量或库匹配应大于 80 才能接受暂定标识。保存电子表格。
要直接从 TIC 识别峰值，请选择兴趣峰值。如果峰值很小，请通过在峰值周围绘制一个框，通过按住左侧鼠标按钮向下伸展峰值上的框并释放鼠标按钮。放置光标线，使其位于峰值的最高点或刚过。
双击，右侧鼠标按钮和峰值质量谱将出现在数据分析屏幕的低窗口中。要搜索光谱库，请将光标移动到光谱窗口的任意位置，并双击库搜索结果将显示在新窗口中的右手鼠标按钮。要先从兴趣谱中去除背景噪音，请双击有关峰值上的右手鼠标按钮，然后单击感兴趣的峰值前没有峰值的区域中的右手鼠标按钮，单击菜单条中的减去按钮或为菜单栏选择色谱，然后从下拉菜单中减去光谱。
减去频谱将显示在数据分析屏幕的下窗中，并将在窗口头中的扫描数据旁边显示破折号。根据这一协议，我们初步确定了总共32种挥发性化合物，从分析14个生殖器气味标记自发释放在过滤纸上由红色褶皱狐猴和比较气味配置文件与信号器的特征自然发生的挥发性化合物，如碳氢化合物， 这些配置文件中存在三苯、Turpin 酒精和酮，包括以前被发现充当性激素和健身暗示的化合物在其他动物物种。暂定确定的化合物列在表一中。
图一中显示了一个来自控制的代表性色谱图和一个来自利马香味标记的色谱图。不同研究对象的成分数量和相对丰度因样本而异。然而，所有样品中都含有6种在色谱图上标有A到F的化合物。
这些化合物分别弯曲到E岛一六角形对流层六段六段、二八染色剂、二松四和五角星的高度。这项研究的结果表明，红发狐猴使用发送的标记来传达有关性别和女性年龄的信息，没有生殖器标记在社会流中发挥作用。使用此协议后的另一个具有代表性的结果是我们对雌性橄榄大猩猩生育广告的研究。
我们通过对395个雌性大猩猩阴道气味样本的分析，共鉴定了74种挥发性化合物。其中包括一系列天然产生的臭味挥发性化合物，如酮、酒精、醛、三叶草、挥发性脂肪酸和碳氢化合物。典型的色谱图用于比较空白巨魔和雌性大猩猩阴道气味样本从肥沃和非肥沃时期显示在图二。
我们检查阴道气味特征和雌性大猩猩的性接受性之间的关系。我们的结果表明，阴道气味的总量与生育力不同，这表明气味可能在信号雌性大猩猩生育能力方面发挥作用。我们还发现组类型之间阴道气味的差异，但我们无法区分组组成的影响，女性年龄的无懈可危。
它是 GCMS 采样和使用的综合优势。因此，使用头部空间固体相微提取，使用 GCMS 分析各种不同的样品。我们能够分离出这些复杂标记的组件，然后使用质谱仪识别每个单独的组件。
然后，所以整个组合技术是非常强大的，并给我们很多关于这些气味标记的信息，这将有很多样品准备提取需要能够获得的结果。
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