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Induzione di lesioni cerebrali assonali diffuse nei ratti in base all'accelerazione rotazionale
Chapters
Summary May 9th, 2020
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Questo protocollo convalida un modello di roditore affidabile, facile da eseguire e riproducibile di lesioni assonali diffuse dal cervello (DAI) che induce danni diffusi alla materia bianca senza fratture o contusioni al cranio.
Transcript
La lesione cerebrale traumatica è una delle principali cause di morte e disabilità. La lesione cerebrale assonale diffusa è un danno assonale diffuso sviluppato dopo il TBI. In questa ricerca, vorrei presentare il nostro modello sulla lesione cerebrale assonale diffusa a induzione basata sul risultato del meccanismo di accelerazione rotazionale TBI.
Seleziona ratti maschi adulti Sprague-Dawley del peso di 300-350 grammi. Fornire chow di ratto e acqua ad libitum. Esegui tutti gli esperimenti tra le 6:00 e le 12:00. Il dispositivo è stato posizionato su un tavolo da laboratorio pesante e stabile.
Il dispositivo è costituito dai seguenti componenti: un cilindro, un peso del ferro, un meccanismo di rotazione costituito da un tubo cilindrico e perni di fissazione della testa. Il peso è attaccato a una corda ed elevato all'altezza di 120 centimetri. Il peso che cade liberamente colpisce il bullone attivando il meccanismo di rotazione.
Il dispositivo di rotazione laterale della testa del ratto è stato utilizzato per ruotare rapidamente la testa da zero a 90 gradi. Dopo l'induzione, lesione cerebrale assonale diffusa, il ratto è stato spostato nella sala di recupero. F è la forza applicata alla testa dell'animale in chilogrammi.
Il capitale M è il momento della forza, K per l'energia cinetica. Poco m è la massa del peso in caduta, g per l'accelerazione gravitazionale, h per l'altezza in centimetri, e D è la distanza tra i perni dell'orecchio in centimetri. Per la valutazione del deficit neurologico e dei deficit del modello di grado, abbiamo usato il punteggio di gravità neurologica nei ratti.
Valutiamo la mobilità, l'emiplegia, il compito di beam walking, il fallimento nel compito di beam walking. Guasto dell'attività di bilanciamento del fascio largo 1,5 centimetri. Stabilità e bilanciamento del fascio, sforzo sul bilanciamento del fascio largo 1,5 centimetri e riflessi.
48 ore dopo l'infortunio, tutti i ratti, le lesioni e il gruppo di controllo sono stati profondamente anestetizzati e perfusi transcardiacamente con soluzione salina eparinizzata allo 0,9%, seguiti da 500 millilitri di formaldeide al 4% in tampone di fosfato 0,1 M. Dopo la perfusione, è stata prodotta la decapitazione e il cervello è stato immediatamente rimosso, quindi fissato in una soluzione di formaldeide al 4% per 48 ore. I cervelli sono stati quindi bloccati in sezioni coronali di cinque millimetri dalla faccia del bulbo olfattivo alla corteccia visiva mentre il cervelletto e gli steli cerebrali sono stati sezionati.
Dopo l'incorporamento della paraffina, le sezioni coronali e sagittali sono state fatte dal talamo. Produrre la colorazione immunochimica della proteina precursore beta-amiloide. I vari gruppi di ratti in momenti diversi sono mostrati sullo schema.
Lesione cerebrale assonale diffusa all'inizio dell'esperimento. Al tempo 48 ore, è stato esaminato il punteggio di gravità neurologica. Al tempo 48 ore, la colorazione immunochimica della beta-APP è stata eseguita in tutti e due i gruppi.
Deficit neurologico illustrato 48 ore dopo la lesione cerebrale assonale diffusa per due gruppi di studio. Un test mann-whitney ha indicato che il deficit neurologico era significativamente maggiore per 15 ratti con lesioni cerebrali assonali diffuse rispetto a 15 ratti ingenui a 48 ore dall'intervento. Fotomicrografi rappresentativi che rivelano le immunoreattività assonali e neuronali a seguito di lesioni cerebrali assonali diffuse isolate nei ratti 48 ore dopo la lesione.
Stringhe cellulari più piccole sono rilevate con la proteina precursore beta-amiloide. Nel gruppo sham, non è stato rilevato. Nel nostro lavoro, abbiamo sviluppato un nuovo modello semplice, riproducibile e affidabile per lesioni cerebrali assonali diffuse basate su un meccanismo di accelerazione rotazionale.
Tale modello consentirà una migliore comprensione della fisiopatologia delle lesioni cerebrali assonali diffuse e lo sviluppo di trattamenti più efficaci. La ringrazio molto per l'attenzione.
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