A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Бактериальная устная кормление с помощью антибиотико-обработанных комаров
Chapters
Summary September 12th, 2020
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
В этой статье представлен протокол для исследования влияния отдельных бактерий комаров кишечника, в том числе изоляции и выявления комаров midgut культивирования микробов, антибиотик истощения бактерий кишечника комаров, и вновь ввести один конкретный вид бактерий.
Transcript
Москит мидгут гавани сложное сообщество микробов, которые влияют на метаболизм хозяина, воспроизводство, фитнес, и ветеринар компетенции. С каждым кишечником микроб имеет разный эффект. Это видео вводит процедуру для изучения соответствующей роли каждого штамма бактерий или физиологии хозяина.
Чтобы приобрести культуру кишечных бактериальных колоний, вскрыть комаров midgut в стерильном состоянии. Земля вскрыть midgut, серотологинат, и распространение на агар пластины. Выберите одиночные колонии от плиты, и определите виды бактерий через их последовательность гена 16 SRNA.
Кормите комаров ХПК эмбо, содержащих антибиотики в течение трех дней, чтобы удалить микробиоту кишечника. Эффективность лечения антибиотиками может быть подтверждена путем вскрытия мидгута асептического комара для анализа единицы колонии до последующих экстремистов. Затем вновь ввести конкретные виды бактерий, которые ранее изолированы от комаров кишечника через устные кормления анализа.
Влияние бактерий на физиологию хозяина можно было бы оценить путем сравнения необработанных комаров, обработанных антибиотиками комаров и комаров, вновь вносящих конкретные ограничения. Мидгут вскрытия и культивируемых бактерий изоляции. Начнем с того, собирать комаров в клетку с аспиратором и клетки комаров в сборе коробки.
Обезболивать комаров, подвергая температуре 4 градуса в течение трех-пяти минут. Держите комаров под наркозом, поместив их в ледяную чашку Петри. Дезинфицировать скамейку, рассечение микроскопа и типсов путем распыления 75% этанола, чтобы избежать загрязнения бактериями из окружающей среды.
Поверхность стерилизовать комаров, лентой и встряхивая их в 75%этанола в течение трех минут и промыть дважды с буфером PBS. Разделите комара отдельно на стерильную стеклянную горку, содержащую каплю PBS. Аккуратно снимите ноги, крылья и голову комара с помощью типсов.
Зажим груди комара и последний участок живота был типсов и тянуть друг от друга, чтобы изолировать пищеварительный тракт. Используйте типсы для удаления урожая и мальпигской трубки из пищеварительного тракта. Урожай расположен на пнтериоре мидгута и выпуклости после потребления сахарной воды.
Мальпигские трубы являются группой тонких выделительных трубок на стыке мидгута и хиндгута. Поместите расчлененный макияж в трубку EP с 200 микролитров стерильных буфер PBS и измельчить его с стерильной шлифовальной пастора в чистой скамейке. Зерновые для загрузки гомогената до трех заблуждений темпа на 50 микролитров каждого заблуждения на пластину LB агар и отчаянные пластины.
Инкубировать пластину как 37 градусов в течение одного-двух дней, пока одиночные колонии не осуществимы. Выберите одиночные колонии в 150 миллилитровую коническую колбу, содержащую 50 миллилитровых бюстгальтеров. встряхнуть бактерии на 37 градусов в одночасье.
Идентификация видов. Извлекайте ДНК TOTO с помощью бактериального геномного набора для ДНК и усиливай 16 SRDNA СПК. Восстановление и очистка фрагментов ДНК из продуктов ПЦР электрофорезом геля Амброуза и набором для восстановления.
Выполнено секвенирование ДНК на очищенных фрагментах ДНК, чтобы иметь достигнутые последовательности цепей бактерий. Вы запустите поиск взрыва на запрос 16 SRNA гена последовательности определить бактерии против бактерий и археи и базы данных. Идентификация уровня вида была определена как большая или равная 99%16 SRDNA последовательность сходства с ближайшим вступления команды банка.
Изолят был назначен ему соответствующий, род, когда 16 SRDNA последовательности, сходство было меньше, чем 99% и больше, чем или равна 95% лечения антибиотиками и бактерии повторного введения. взвесить необходимое количество пенициллина сахарозы и стрептомицина, чтобы подготовить нас 10% раствор сахарозы, в том числе пытается 20 единиц пенициллина и 20 микрограмм стрептомицина на миллилитр. Прониките ватные шарики в раствор сахарозы, содержащий антибиотики, и поместите его поверх бумажного стакана, содержащего комара.
Накройте ватный шарик 10-сантиметровой чашкой Петри, чтобы набережная не испарилась. Замените ватные шарики два раза в день и кормите комаров в течение трех дней подряд. Комары делятся на две группы.
Первая группа была помещена в чашку комаров без какого-либо лечения, любой хлопчатобумажные шарики врач с 10%Так крест был дан ежедневно. Вторая группа лечилась антибиотиками и служила в течение трех дней. В каждой группе были рассеклены комары Сергея.
Мика была извлечена для общего извлечения ДНК и ККПЧ была выполнена с использованием универсальных бактерий грунтовки, цифра 1 показывает выражение 16 SRNA в контрольной группе и группе лечения антибиотиками. Результаты показывают, что стоимость или реализация пенициллина и стрептомицина была успешной. подготовить бактериальный раствор, измеряет раствор бактерий в вирусе с помощью спектрофотометра, добавить одну подвеску ot бактерий в трубку EP.
Центрифуга подвески на 5000 RCA в течение пяти минут при четырех градусах отбросить супернатант, мыть бактерии поддон пытается с стерильным буфером PBS. Повторно приостановить бактериальный поддон с 200 микролитров стерильных буфера PBS Добавить 600 микролитера, 10% раствор сахарозы, 200 микролитер АТФ и 200 микролитров бактериальной подвески в новую трубку AP и хорошо перемешать. Кроме того, бактерии могут быть повторно приостановлено в жару в активировать кровь.
Подготовка нагрева активированной крови. сгусток свежей крови с антикоагулянтной трубкой, принимать от двух до трех миллилитров свежей крови. центрифуга при 1000 в течение 10 минут при четырех градусах, чтобы отделить плазму и клетки крови.
Соберите плазму в новую трубку EP и здесь активируйте активированную при 56 градусах в течение одного часа. Вымойте Доменная дом через ваше время с стерильным буфером PBS. Промыть подвесной взрыв дома с отоплением активированной плазмы.
Соберите мембрану и систему кормления. Потяните фильм болезни по максимуму. исправить с пластиковым кольцом и парафильм на рабочем месте, чтобы избежать утечки медленно добавить подготовленный бактериальный раствор для фидерного блока, к максимальному кошельку.
Чтобы избежать пузырь упал с одного направления и печать подачи единицы. Подключите электроснабжение. Подождите, пока температура не достигнет 37 градусов Установлен фидерный блок с раствором бактерий на фидере.
Перед кормлением бактериями комаров следует остановить на 24 часа, чтобы усваивать антибиотики. Для кормовой единицы на бумажной чашке с комарами, а затем позволяют кормить в течение 90 минут. Полностью поощряемые комары могут быть выбраны для дальнейших исследований.
Результаты представительов. Рисунок второй показать нам среднюю награду на комара. После участка кормления антибиотиками лечат комаров мы видим менингосептик.
На рисунке 3 показана экспрессия вариантов развития связанных генов через 24 часа после еды крови, содержащей менингосептикУМ. Результаты показывают, что нет никаких существенных изменений в производстве яиц контрольной группы и выцветшей группы. Благодарим Вас за интерес к бактериям или кормления эссе с антибиотиками лечение комаров.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
