A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Tør Root Rot Disease Assays i kikært: en detaljeret metode
Chapters
Summary January 17th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Denne undersøgelse præsenterer metoder til at studere patomorfologiske og molekylære mekanismer, der ligger til grundfor kikært – Rhizoctonia bataticola interaktion. Den blotting papir metode er nyttig til hurtigt at studere kikært genotype svar, mens den syge pot-baserede metode kan bruges til samtidig at pålægge tørke og R. bataticola infektion og skærm for tolerante genotyper.
Transcript
Hovedformålet med denne undersøgelse er at demonstrere en detaljeret metode til tør rod rådne sygdom assays, såsom blotting papir teknik og syge pot teknik. Disse teknikker vil være nyttige at studere samspillet mellem kikært plante og Rhizoctonia bataticola. Forståelse af chickweed plante interaktion med svampepatogent Rhizoctonia bataticola er landbrugsmæssigt vigtigt.
Til dette er der behov for alsidige og meget reproducerbare analyser. Her er to analyser, der er meget udbredt i vores laboratorium er demonstreret. En af dem er blotting papir-baseret, og den anden er syg pot-baseret analyse.
For at udføre blotting papir assay, forberede Rhizoctonia bataticola svamp inoculum ved at skalere op fra skrå kultur til Petri plade og derefter til flydende kultur. Forbered kikært planteskole ved, såning frø i en stor gryde. Udrydde dem og læg dem i den flydende inoculum og læg dem på blotting papir.
Overhold for sygdomssymptomer, nemlig nekrose på roden, rodråd, og blad gulfarvning otte dage efter vaccination. Vist her er en nøddeskal, trinene i blotting papir teknik. At udføre den syge pot assay, inokulere kikært måltid med svamp.
Efter inkubation ved 30 grader Celsius i 15 dage, er sygekultur opnået. Derefter pulver dem og bland med pot mix. Så frø på kontrol pot og syg pot.
På de følgende dage, observere for symptomer, nemlig nekrose på roden, rod rådne, og blad gulfarvning på de inficerede planter, 10 dage efter såning. Sygepotte kan skaleres op og kan bruges til storstilede screeninger. Vist her er en nøddeskal af trin i syge pot teknik.
Rhizoctonia bataticola er et udviklende patogen. Denne svamp producerer hyfa og mikrosklerroti, der fungerer som primær inuclum under planteinfektion. Den rene kultur, der anvendes gennem den isolerende metode, anvendes til analyserne.
Det centrale punkt for disse vellykkede analyser er optimal inoculum belastning. Demonstration af blotting papir teknik starter her. For at forberede flydende Rhizoctonia bataticola inoculum, Inokuler 500 ml bouillon med svampe agar stik fra tre dage gamle frisk plade kultur og inkubere kolben i en inkubator ved 28 grader Celsius i fem dage.
Bortfiltrere den mørkegrå svampe mycelia med microsclerotia. Afsthæng i autoklaveret vand, og fjern mediet. Igen, bortfiltrere mycelia og fjerne fugt ved blot tørring mycelia i et par minutter.
100 gram svampeinokuculum suspenderes i 200 ml autoklaveret vand i en syltetøjsflaske, og bland det korrekt. Udvikle kikært planteskole ved såning overflade steriliserede frø i sålæbe. Udrydde planterne otte dage efter såning, vaske dem og skyl dem med autoklaveret RO. Tag et skamplet papir og fold det én gang og læg halvdelen af det på bakken.
Gør det vådt med autoklaveret vand. Tag planter og dyp i inokulum i 30 sekunder med intermitterende op og ned bevægelse. Placer planterne på en sådan måde, at rødderne er dækket inde i arket og folia forbliver ude.
Fold den anden halvdel og bøj papiret. For kontrol, dyppe planterne i autoklaveret vand, holde bakkerne i et vækstkammer i otte dage. Resultater. Overhold for symptomerne såsom blad gulfarvning, rod rådne, nekrose i rod, og reduktion i den laterale rod nummer.
Demonstration af den syge pot teknik starter her. Tag et kilo kommercielle kikærtfrø. Vask frøene med vand fra hanen og vask igen med RO-vandet.
Læg frøene i blød i fem timer. Igen, vaske frøene med RO vand tilsættes 300 gram i en marmelade flaske. Autoklave dem ved 121 LVS i 15 minutter to gange kontinuerligt.
Efter afkøling overføres flasken gennem laminar-flowet. Inokuler flaskerne med tre svampegarp propper ca. fire millimeter kvadratiske størrelser og ryst det godt for at blande korrekt. Wrap flaskerne og inkubere dem i en inkubator ved 30 grader Celsius i 15 dage.
Overhold for flaskerne med mørk mycelial vækst omkring kikærtfrø og fjern frøene. Tør dem ved stuetemperatur og pulver dem. Bland Rhizoctonia bataticola pulver med solorit og holde dem ved stuetemperatur i fem dage.
Overflade sterilisere GT62 frø og så dem på to centimeter dybde. Resultater. Overhold for 90% dødelighed i syge pot. 10 dage efter såning observere for symptomer såsom nekrose i rødder og reduktion i lateral rod nummer og blad gulfarvning i de følgende dage.
Sygepotte kan også tilberedes i marken. Tørke og Rhizoctonia bataticola infektion. Pålægge tørke stress i den syge pot ved at tilbageholde vandet.
Vist her er de planter, der udsættes for kontrol, tørke, patogen, og samtidig tørke og patogen stress. Overhold for symptomerne, nemlig mere nekrose, rodråd og reduktion i det laterale rodnummer og rodlængden i kombineret stressbehandling sammenlignet med den patogenfet-only behandling. Konklusioner. Blotting papir teknik kan udføres In Vitro betingelser.
Syge pot teknik kan udføres i In Vivo betingelser. I syge havn, abiotiske stress, nemlig tørke stress, kan pålægges sammen med patogen infektion. Ved hjælp af disse teknikker, kan man studere patogen infektion mønster.
De fleste af fysiologiske ændringer opstår under kikært-Rhizoctonia bataticola interaktion, og også screene kikært genotyper for modstand. Den blotting papir analyse er meget nyttigt at generere kvalitet prøver til mikroskopi og molekylærbiologi undersøgelser. Den syge pot assay, som efterligner de naturlige infektion betingelser, gælder for screening kikært kimkimplasm.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
