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Developmental Biology

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Variazioni incrementali di temperatura per l'allevamento massimo e la deposizione delle uova in Astyanax mexicanus

Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals − Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species

Journal (Developmental Biology)

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Using Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) to Monitor the State of Arm Cohesion in Prometaphase and Metaphase I Drosophila Oocytes

Journal (Developmental Biology)

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Variazioni incrementali di temperatura per l'allevamento massimo e la deposizione delle uova in Astyanax mexicanus

Article DOI: 10.3791/61708-v

February 14th, 2021 •

Li Ma¹, Ruby Dessiatoun¹, Janet Shi¹, William R. Jeffery¹

¹Department of Biology, University of Maryland

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February 14th, 2021

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Questo articolo delinea le condizioni di laboratorio di base e i protocolli per un regime di temperatura incrementale per stimolare la deposizione massima nel tetra Astyanax mexicanus messicano, che è un modello emergente per gli studi di sviluppo ed evolutivi.

Transcript

Quindi, poiché l'Astyanax mexicanas è un piccolo pesce. È indigena del Messico nord-orientale e del Texas meridionale. L'importante è che esista in due forme.

Una forma è un pesce che abita in superficie che ha grandi occhi e pigmentazione, e l'altra forma è un pesce che abita le caverne che ha perso gli occhi e ha perso la pigmentazione. Sono ancora in grado di deporre le uova, di ibridarsi tra loro, quindi possono essere usati in un'analisi genetica avanzata per studiare genetica e sviluppo. Hanno anche grandi embrioni che sono trasparenti, e possono essere utilizzati per studiare la biologia dello sviluppo comparativa.

Quindi sono stati usati per molti anni come sistema per comprendere l'evoluzione dello sviluppo. Diversi giorni prima che si desideri la deposizione delle uova, iniziamo a nutrire meglio il pesce. Aumentiamo anche la temperatura in modo incrementale in modo tale che entro il tempo in cui vogliamo che si riproducono, subiranno quindi circa due o tre giorni di deposizione eccessiva delle uova, producendo un gran numero di embrioni fecondati che si sviluppano bene e attraverso le fasi larvali agli adulti.

Dopo aver nutrito il pesce alle 10:00 a.m. con un pizzico di scaglie Tetra, controllare l'incubatrice che verrà utilizzata per ospitare ciotole di embrioni in via di sviluppo e cambiare l'acqua se necessario. Controllare il livello dell'acqua in tutti i serbatoi e aggiungere acqua di sistema a tutti i serbatoi che si stanno esaurendo.

Quindi impostare l'incubatrice a 23 gradi Celsius Almeno 30 minuti dopo la prima alimentazione, nutrire il pesce nei serbatoi di riproduzione con un pizzico di fiocchi di tuorlo d'uovo, abbastanza grappoli di vermi neri per consentire a ciascun pesce nel serbatoio di consumare da cinque a 10 vermi o entrambi. Almeno un'ora dopo la seconda alimentazione, strofinare i serbatoi di riproduzione se necessario e allevare con cura le reti da riproduzione senza interferire con l'alimentazione dell'aria del serbatoio. La mattina seguente, rimuovi le reti da riproduzione dal fondo dei serbatoi del sistema per adulti tra le 9:00 e le 10:00 a.m.

e utilizzare il tubo attaccato al per risciacquare delicatamente gli embrioni in una rete portatile. Invertire la rete in una ciotola di acqua pulita del sistema e trasferire circa 100 embrioni per ciotola per dito in 200 millilitri di acqua pulita integrata con 0,00003%blu metilene. Vengono in scena gli embrioni al microscopio leggero per stimare il tempo di fecondazione secondo il calendario di sviluppo A-mexicanas.

Dopo la messa in scena, metti le ciotole delle dita in un'incubatrice per cinque o sette giorni e dai da mangiare alle culture con gamberetti salamoia viventi. Per ogni serbatoio che ha lasciato cadere gli embrioni, registrare la data e il numero del serbatoio e registrare il numero e la qualità degli embrioni eliminati. Registrare il tempo medio di deposizione delle uova in base alla tabella di messa in scena e registrare la temperatura del sistema nel momento in cui il pesce è stato generato.

Monitorare le ciotole delle dita degli embrioni durante il giorno, utilizzando una pipetta da pascolo per rimuovere eventuali embrioni e detriti morti o deformati, come cibo o feci non consumato, e cambiando l'acqua blu se necessario. Alle 13:00 .m il pesce nei serbatoi di riproduzione come dimostrato e impostare la temperatura dell'acqua a 24 gradi Celsius.

Quindi rimuovere il cibo e i detriti in eccesso dai serbatoi e strofinare i serbatoi prima di ripristinare le reti. Mercoledì e giovedì ripetere la raccolta e la valutazione degli embrioni come dimostrato per martedì. Nutrire il pesce e impostare l'acqua alla temperatura appropriata.

Controllare gli embrioni nell'incubatrice e sostituire l'acqua della ciotola delle dita con acqua di sistema trattata con blu di metilene fresco. Quindi pulire i serbatoi di riproduzione in base alle esigenze e ripristinare le reti. Venerdì, dopo aver nutrito il pesce, impostare la temperatura dell'acqua a 23 gradi Celsius e controllare gli embrioni nell'incubatrice.

Il sabato e la domenica, dai da mangiare al pesce. In questa figura vengono mostrati i dati sull'allevamento da luglio 2017 a marzo 2020 per il pesce di superficie di Rio Choy e Texas e il pesce delle caverne di Los Sabinos, Tinaha e Pachon. I dati sono stati analizzati per settimana riproduttiva e il numero medio di embrioni raccolti al giorno durante una singola settimana di riproduzione.

I dati indicano che l'allevamento è stato continuo durante tutto l'anno a Rio Choy e texas Surface fish e nel pesce delle caverne di Pachon. La quantità e la qualità della maggior parte dei pesci di superficie rio choy era tra bassa e alta, mentre la quantità e la qualità della maggior parte dei pesci di superficie del Texas e del pesce grotta pachon era tra bassa e media. Il verificarsi della deposizione delle uova non è stato continuo nei pesci delle caverne di Tinaja o Los Sabinos, con la deposizione delle uova bassa o inesistente tra la fine dell'estate e l'autunno in questi pesci.

Sebbene i livelli più bassi di deposizione delle uova siano stati registrati per i pesci delle caverne di Los Sabinos, la qualità degli embrioni era la migliore. Nel complesso, questo pesce di superficie ha mostrato una migliore quantità e qualità di deposizione delle uova rispetto al pesce grotta. Usando questo sistema, possiamo generare centinaia, in realtà migliaia di uova bimess mensili, e queste uova vengono poi utilizzate, questi embrioni vengono poi utilizzati per molti scopi diversi.

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