Login processing...

Journal / Neuroscience /

JoVE Journal
Neuroscience

This content is Open Access.

JoVE Journal Neuroscience

Forbereder voksen drosophila melanogaster for hele hjerneavbildning under atferd og stimuli responser

Biodegradable Magnesium Stent Treatment of Saccular Aneurysms in a Rat Model - Introduction of the Surgical Technique

Journal (Neuroscience)

Biodegradable Magnesium Stent Treatment of Saccular Aneurysms in a Rat Model - Introduction of the Surgical Technique

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Journal (Neuroscience)

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Click here for the English version

Forbereder voksen drosophila melanogaster for hele hjerneavbildning under atferd og stimuli responser

Article DOI: 10.3791/61876-v • 07:51 min

April 27th, 2021 •

Alexandra Woller¹, Paul Bandow¹, Sophie Aimon¹, Ilona C. Grunwald Kadow¹

¹Chair of Neuronal Control and Metabolism, School of Life Sciences, Technical University of Munich

Chapters

Summary
Automatic Translation

English (Original)
العربية (Arabic)
中文 (Chinese)
dansk (Danish)
Nederlands (Dutch)
français (French)
Deutsch (German)
עברית (Hebrew)
हिंदी (Hindi)
italiano (Italian)
日本語 (Japanese)
한국어 (Korean)
norsk (Norwegian)
português (Portugese)
русский (Russian)
español (Spanish)
svenska (Swedish)
Türkçe (Turkish)

April 27th, 2021

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

Vi presenterer en metode spesielt skreddersydd for å avbilde hele hjernen til voksen Drosophila under atferd og som svar på stimuli. Hodet er plassert for å tillate optisk tilgang til hele hjernen, mens flyet kan bevege bena og antennene, spissen av proboscis, og øynene kan motta sensoriske stimuli.

Transcript

Vår protokoll tillater avbildning av hele fluehjernen under atferd, noe som er viktig for å forstå hvordan nevroner i forskjellige hjerneområder samhandler for å forme atferd. I motsetning til andre publiserte protokoller ble dette utviklet spesielt for å få tilgang til hele hjernen mens flyet oppfører seg og føler av lukt, smak eller visuell stimulering. For å opprette et hodespor.

Når du har trykket holderen med en 3D-skriver, plasserer du et stykke klebrig tape rektangulært på en flat overflate under et stereomikroskop. Og kutt en omtrent fem millimeter med en centimeter stykke. Bruk to skalpeller festet parallelt for å kutte et 400 x 400 mikrometer neste spor midt på den lengre siden av båndet, og plasser båndet over den flatere siden av hullet på bunnen av holderen.

Bruk tang til å skyve båndet ca. 500 mikrometer rundt hullet. Og bruk svart neglelakk for å dekke toppen av båndet og holderen. Etter å ha latt neglelakken tørke i minst en time, bruk et rullet vev for å legge til omtrent en mikroliter fett til hodesporet.

For å forberede karosseriet, kutt et omtrent to centimeter bredt tape i to stykker og kutt 1,5 millimeter brede skiver. Klipp deretter ut en 0,3 millimeter dyp skulder og karosserispor og sørg for at båndet passer til holderen. For å fikse en flue inn i holderen, plasser først en grunn beholder med is under dissekeringsmikroskopet, og plasser holderen opp ned på et stykke laboratorievev plassert over isen.

Aspirer en en til fire dager gammel kvinnelig frukt fly fra sin sjofel, og blåse flyet på unmelted is. Når fluen slutter å bevege seg, bruk Dell-tang til å gripe fluen ved foten av vingene, og skyv flyet inn i holderen med nakken inne i sporet. Øynene skal være like plassert på hver side av sporet.

Om nødvendig, legg til en mikroliter fett til toppen av hodet for å forhindre at limet når baksiden av hodet. Dekk deretter kroppen med et vev og litt is for å sikre at flyet ikke beveger seg. For å feste hodet, plasser det i en omtrent 20 graders vinkel fra en helt bakre visning.

Og bruk et rullet vev for å påføre UV-lim rundt hodet samtidig som du unngår å skitne til det sensoriske interesseområdet. For smakseksperimenter, bruk tang for å trekke ut proboscis og tilsett lim på proboscis-basen for å forhindre bevegelse. Hvis ingen smakseksperiment er planlagt, skyv og lim proboscis inn i hodet.

Herd limet med UV-lys i fem sekunder, og bruk et rullet vev for å forsiktig rengjøre områdene rundt hodet, for å fjerne gjenværende flytende lim som kan holde seg til bena og dørene jord, sensoriske områder. Bruk deretter en tynn stripe tape eller et vev for å flytte bena til forsiden etter behov. For å plassere kroppen, fjern isbeholderen og snu holderen rundt.

Fjern vannet rundt fluen og handle raskt før flyet gjenoppretter fra anestesi plassere kroppen slot tape over hullet og forsiktig presset flyets kropp ned, pass på ikke å overstretch nakken. Dekk eventuelle gjenværende store hull med tape og tilsett omtrent en mikroliter fett på baksiden av hodet, for å forhindre at lim stikker på det stedet. Bruk et opprullet vev til å male UV-lim rundt thoraxen og på toppen av båndet og thoraxen, og herd limet med UV-lys i omtrent fem sekunder.

Fjern forsiktig fett og usikret lim med et laboratorievev og tilsett omtrent en milliliter saltvann til toppen av hodet. Bruk tang til å skyve til side eventuelle luftbobler og se etter lekkasjer ved å plassere en dekselglidning over saltvannslinjen og snu holderen rundt for å se etter saltvann på forsiden. Hvis saltvann observeres, fjern saltvannsvann og fest hullet med mer lim eller mer fett.

For å dissekere hodet, velg den høyeste forstørrelsen og bruk skjerpede veldig fine tang for å lage to kutt ved foten av den sentrale mørke neglebåndtriangelen på hver side av nakken. Klipp rundt den mørke trekanten, og fjern denne delen av neglebåndet. Muskel 16 og spiserøret skal være synlige gjennom dette hullet og bevege seg rytmisk.

Bruk svært fine tang for å forsiktig klemme toppen av dette området for å kutte muskel 16 uten å punktere spiserøret. Hvis den rytmiske bevegelsen stopper muskelen 16 ble sannsynligvis fjernet. Når muskelen har blitt utskilt fra medialkanten av den mørke trekantregionen, bruk tangene som et par saks for å forsiktig kutte og fjerne den gjenværende kutiklen i små biter.

Bruk deretter tangene til å gripe og sakte og trekke bort en luftsekk om gangen. I denne videoen ble en kalsiumsonde uttrykt i alle nevronene til disse to fruktfluehjernene. Og en luktpust ble presentert.

I dette eksperimentet var kalsiumsensoruttrykk begrenset til dopaminerge og serotonerge nevroner. Legg merke til den tette sammenhengen mellom den sterke synkrone aktiviteten over hjernen og fluene som går atferd som illustrerer hvordan hele hjernen kan observeres under en bestemt oppførsel. Ved hjelp av prinsippkomponentanalyse og uavhengig komponentanalyse kan forskjellige funksjonsregioner uthevet i forskjellige farger trekkes ut.

Formen og lokaliseringen av funksjonsområdene gjør at regionene kan tilordnes anatomiske maler. For å identifisere hjerneregioner og i noen tilfeller nevrontyper. Når fluorescensverdiene er justert etter riktig anatomisk mal, kan de beregnes i gjennomsnitt innenfor spesifikke anatomiske hjerneregioner for kvantitativ analyse.

For eksempel kan vi i denne analysen observere at alle regioner er mer aktive under turgåing enn under grooming. Vær tålmodig. Å lære denne hjerte disseksjonsteknikken er vanskelig.

I laboratoriet mitt trenger folk i gjennomsnitt tre til fire måneder før de mestrer det og får sine første nyttige forberedelser. Etter denne protokollen kan vi registrere storskala hjerneaktivitet ved hjelp av et fluorescensmikroskop. Raske metoder som lysfeltmikroskopi er spesielt indikert.

X

Simple Hit Counter