Neuroscience
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Immersione alternativa nel glucosio per produrre iperglicemia prolungata in Zebrafish
Chapters
Summary May 5th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Questo protocollo induce in modo non invasivo l'iperglicemia nel pesce zebra per un massimo di 8 settimane. Utilizzando questo protocollo, è possibile fare uno studio approfondito degli effetti avversi dell'iperglicemia.
Transcript
Questo protocollo induce l'iperglicemia nei pesci zebra in un modello di aumento e caduta che imita l'iperglicemia che si vede nel diabete di tipo due. Il principale vantaggio di questa tecnica è che è una tecnica non invasiva che consente di garantire che l'iperglicemia sia la causa di eventuali alterazioni osservate nei pesci iperglicemici. Questo protocollo potrebbe potenzialmente essere utilizzato per esplorare vie terapeutiche o farmaci che prendono di mira le complicanze dell'iperglicemia.
Questo protocollo ha molti passaggi, ma quando i passaggi vengono seguiti correttamente e con cura, dovrebbe diventare rapidamente una seconda natura. Ricorda tuttavia, di trattare sempre gli animali delicatamente e umanamente durante l'intero protocollo. Inizia impostando sei carri armati, due per ogni gruppo sperimentale.
Utilizzare serbatoi da due litri, se il numero totale di pesci è inferiore a 20 e quattro litri serbatoi se il numero totale di pesci è superiore a 20. Etichettare uno dei due serbatoi, il serbatoio dell'alloggiamento e l'altro serbatoio della soluzione. Tenere i serbatoi in un bagno d'acqua a 28-29 gradi Celsius per mantenere la temperatura dell'acqua.
Il primo giorno, metti il pesce nelle rispettive soluzioni di trattamento per 24 ore. Il secondo giorno, trasferire il pesce dalle loro soluzioni di trattamento all'acqua per 24 ore. Il terzo giorno, trasferire il pesce dall'acqua alle soluzioni di trattamento.
Continuare questa esposizione alternata per il resto dell'esperimento. Trasferimento quotidiano di pesci di controllo trattati con acqua dall'acqua all'acqua. Assicurarsi che il pesce venga nutrito e trasferito all'interno della stessa finestra di due ore ogni giorno per tutta la durata dell'esperimento.
Trasferire il pesce in ogni gruppo di trattamento dal serbatoio di alloggiamento al serbatoio di soluzione corrispondente utilizzando una rete di pesce standard. Riposizionare il serbatoio contenente il pesce nel bagno d'acqua e sostituire la pietra d'aria e il coperchio del serbatoio. Questo serbatoio è ora il serbatoio dell'alloggiamento e il serbatoio che in precedenza teneva il pesce è ora il serbatoio della soluzione.
Scartare la vecchia soluzione e pulire il serbatoio insieme ai coperchi del serbatoio, alle linee dell'aria, alle pietre d'aria e alle reti per prevenire l'accumulo di glucosio e mannitol. Utilizzare acqua e una spugna dedicata per ogni condizione di trattamento per pulire correttamente i serbatoi. Asciugare i serbatoi di soluzione appena puliti con un tovagliolo di carta e preparare le soluzioni per il giorno successivo utilizzando questo serbatoio.
Assicurarsi che gli altri articoli siano asciugati e separati da gruppi di trattamento appropriati. Per preparare le soluzioni di zucchero, riempire ogni serbatoio della soluzione con due o quattro litri di acqua di sistema. Misurare la corretta quantità di glucosio e mannitol utilizzando una bilancia di carico superiore e barche di pesata separate per ogni sostanza chimica.
Aggiungere l'aliquota pesata di glucosio o mannitol al serbatoio della soluzione pulita appropriato. Mescolare le soluzioni con aste di vetro separate fino a quando gli zuccheri non sono completamente sciolti. Quindi restituire i serbatoi di soluzione al bagno d'acqua e coprirli con i coperchi corrispondenti.
Per preparare la soluzione d'acqua, riempire i serbatoi sperimentali con acqua di sistema Restituire questi serbatoi di soluzione al bagno d'acqua e coprirli con i coperchi corrispondenti. I valori di zucchero nel sangue sono stati significativamente elevati dopo entrambi i trattamenti di glucosio di quattro settimane e otto settimane. Con iperglicemia definita come tre volte le medie di controllo sia dai gruppi trattati con acqua che dal mannitolo.
Il tessuto retinico raccolto dopo quattro settimane di iperglicemia ha avuto un aumento della proteina acida fibrillare gliale o dei livelli di GFAP. L'espressione GFAP è osservata nelle cellule gliali di Mueller nella retina, che sono alterate nella retinopatia diabetica. Questo aumento della GFAP è stato associato ad un aumento dei livelli di kappaB dei fattori nucleari.
Suggerendo che l'iperglicemia indotta innesca una risposta infiammatoria e gliosi reattiva. Le registrazioni ERG dopo quattro settimane di trattamento hanno identificato una diminuzione della risposta nelle retine trattate con glucosio rispetto ai controlli trattati con mannitol. Le ampiezze sia del fotorecettore che dei componenti cellulari bipolari sono state ridotte nei pesci iperglicemici.
Questa procedura può essere integrata da altri test di iperglicemia. Ad esempio, un saggio di memoria può essere usato per esaminare deficit cognitivi o registrare risposte visive come la risposta optomotoria per valutare le complicanze basate sulla visione. Una volta stabilita questa tecnica, il nostro laboratorio è stato in grado di usarla per studiare le complicanze indotte dall'iperglicemia nel modello del pesce zebra.
Abbiamo osservato queste complicazioni relativamente rapidamente, dopo quattro settimane di trattamento.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
