Bioengineering
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研究屈化强化疗法
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Summary April 9th, 2021
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所提出的实验协议可用于对细胞培养装置中的腔活性进行实时测量，以便能够调查成功提供药物和/或其他生物效应所需的条件。
Transcript
这些台式系统设计、数据收集和分析原理可作为体外研究空腔增强疗法的合理基础。我们的技术实现了高吞吐量测试，同时保留了间隔腔监测、可重复样品对齐和与常见细胞分析方法兼容等关键实验属性。屈化增强疗法具有多种潜在应用，包括癌症和中风等疾病的治疗。
通过更好地了解基础机制，我们可以开发更好的疗法。这项工作提供了一个易于重复的系统设计和实施框架，使研究各种腔诱导细胞生物效应。包括药物输送、声波和索诺打印。
获得有意义的结果需要确保重复性和控制实验中的所有变量。必须执行所有相关控制并测量电气噪音。为准备声学传输系统，在 100kPa 的压力下将填充液体除气至少两小时，以最大限度地降低传播路径中出现气穴的可能性。
建议使用溶解氧探针确认氧气的部分压力低于 10kPa。缓慢填充测试室，以尽量减少空气重新引入脱气液体，并立即清除转导器和中等容器表面的任何残留气泡。允许超声源功率放大器根据制造商的建议进行加热，以便在时间上获得和输出稳定。
并稀释气穴剂，同时轻轻地和连续搅拌，使一个均匀的悬架，而不会诱捕宏气泡或破坏剂。处理微气泡时，一定要小心处理。对于 SAT2 制备，在开始实验之前，使用乙醇对 PDM 盖进行消毒。
按压将消毒盖安装到培养皿中，形成细胞隔间，并装载一个 10 毫升注射器，配备 18 个仪表钝针和 10 毫升填充液体。将针头插入其中一个 PDM 填充孔，在倾斜时缓慢填充腔室，以便微气泡可以通过打开的填充孔逃逸。填充腔室后，将四到五毫米的聚合物棒插入开孔中，并将组件定位，使孔处于水平状态。
在注射额外液体时取出针头，以免空气被抽入腔中，并用另一根聚合物棒关闭填充孔。目视检查隔间是否有被包裹的宏观气泡的证据，并按下将细胞暴露隔间放入隔间支架中。考虑悬浮粒子的浮力，以及它们的浮力在决定细胞暴露舱的方向时将如何影响它们与细胞的接触。
然后以水平角度降低腔盖，以阻止宏气泡在设备的水下部分休息，将盖子安装到腔室顶部。在进行实验测量之前，允许悬架与室温热平衡。使用细针热电偶确认室内温度已稳定。
要实时监控实验，包括时间和频率域，请启动数据收集过程并打开超声波源驱动信号。使用高压探头监控在整个实验中驱动超声波源的放大器输出信号，以确保暴露按预期进行。并确保示波器被设置为补偿探针衰减。
被动空穴探测器的时间域监测显示当前仪器设置的信号大小是否适当，以及是否比预期更早看到空穴信号。频率域监控允许分析气泡行为的类型，并可用于根据需要调整驱动水平，以实现所需的细胞刺激。在本分析中，在最低事件压力下，被动气穴探测器响应完全由0.5MHz基本超声频率的整数谐波组成。
从 0.2 增加到 0.3MPa，除了进一步提升整数谐波外，光谱中还产生了明显的超谐波。虽然 0.3MPa 结果显示脉冲持续时间的多变性，但这两种压力的时间域波形式看起来相似。在最大压力下，由于宽带噪声明显升高，时间域波形成振幅相对于较低压力的非线性增长，可能是由于微气泡破坏引起的惯性空穴。
在这里，全光谱显示在 50 秒的曝光时间内，在此期间，源每 0.2 秒发出两毫秒的脉冲。如图所示，在说明相应的总谐波和宽带功率时，产生了大振幅宽带响应，最初的峰值被认为与最大气泡的破坏相关。几秒钟后，宽带响应迅速减弱，显然是由于气泡破坏。
在这项分析中，使用20比1稀释微气泡和正常PBS，时间和样本平均光谱显示，未聚焦的被动空腔探测器比对焦探测器具有更强的宽带响应。伴随着样品的减少，以样品变异的谐波和超谐波能力。使用荧光显微镜、流动细胞测量或生物检测等技术，可评估骑兵诱导的生物效应。
这使空腔活性与生物效应之间建立了牢固的关系。这项技术使我们能够更好地识别泡沫行为和生物效应之间的关系，这揭示了一些潜在的新机制，支撑空腔介质药物的输送。
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