A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Estimering av plantebiomasse Lignin-innhold ved bruk av thioglykolsyre (TGA)
Chapters
Summary July 24th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Her presenterer vi en modifisert TGA-metode for estimering av lignininnhold i urteaktig plantebiomasse. Denne metoden estimerer lignininnholdet ved å danne spesifikke thioetherbindinger med lignin og gir en fordel i forhold til Klason-metoden, da det krever et relativt lite utvalg for lignininnholdsestimering.
Transcript
Lignin er en kompleks heteropolymer som består av tre monolignoler. Det er den nest mest tallrike polymeren på jorden ved siden av cellulose. Her demonstrerer vi thioglykolsyremetode, som er den mest pålitelige metoden for estimering av lignininnhold.
Denne metoden er basert på prinsippet om at lignin binder seg til tioglykolsyre gjennom tioetherbindinger. Videre delte vi denne protokollen i fem faser. I den første fasen forbereder vi plantematerialet.
I den andre fasen isolerer vi alkoholen uoppløselig ekstrakt. I tredje fase utfeller vi lignin ved hjelp av tioglykolsyre og sure forhold. I fjerde fase forbereder vi lignin standardkurve ved hjelp av industriell bambus lignin.
Til slutt, i femte fase, estimerer vi lignininnholdet ved hjelp av standardkurven utarbeidet i fjerde fase. Plantemateriale samles, vender pottene for å skille røttene, vasket dem grundig i vann, lufttørket i to dager, overførte dem til merkede beholdere og inkuberte dem i inkubatoren ved 49 grader celsius i en uke til 10 dager. Ved hjelp av saks blir vevet ytterligere kuttet i 1 mm til 3 mm størrelse stykker.
Alternativt brukes biomassekvern til å knuse plantevevet. Bruk rotvevet Slå på biomassekvernen samle det knuste pulveret i forhåndsmerkede beholdere. På samme måte gjentar du for stammevevet og bladvevet.
Det knuste pulveret lastes inn i slipevasen som deretter plasseres i frysefabrikken Og kjør frysefabrikken med en hastighet på 10 CP i tre sykluser. Vei 20 mg av malt vevspulver og overfør til et ferdig laget 2 ml rør. Noter det tomme røret og røret med vevspulver og vevspulveret i lab-notatboken.
Inkuber rørene med hetten åpen ved 60 grader celsius i en time. Etter inkubasjon, tilsett 1,8 ml vann til hver prøvevirvel sentrifuge ved 15.000 RPM i 10 minutter. Kast den supernatante Tilsett 1,8 ml metanol.
Virvel og inkuber i en forvarmet 60 grader celsius blokk i 20 minutter Etter inkubasjon sentrifuge ved 15,000 RPM i 10 minutter. Gjenta dette trinnet én gang til. Etter sentrifugering kast supernatanten og tørk pelletsene i vakuumtørkeren i to til tre timer eller til pallen er helt tørr.
Mål og registrer vekten av hvert rør i lab-notatboken for estimering av lignininnhold på slutten. Inkluder også positiv kontroll industriell bambus lignin på dette tidspunktet starter fra 0,5 mg til 4 mg i triplikater. Tilsett 1 ml 3 normal saltsyre, sammen med hundre mikroliter glykolsyre til hver prøve Vortex og inkuber ved 80 grader celsius i 3 timer.
Etter 3 timer overføring av inkubasjon dem til et stativ og la det avkjøles i 10 minutter. sentrifugerer deretter ved 15 000 o/min i 10 minutter. Etter sentrifugering ser fargen på løsningen slik ut.
Kast supernatanten. Tilsett 1 ml vann. Vortex Sentrifuge ved 15.000 o/min i 10 minutter.
Kast supernatanten. Tilsett 1 ml 1 normalt natriumhydroksid. Virvel og inkuber ved 37 grader celsius shaker over natten.
Etter natt inkubasjon sentrifugerer rørene ved 15.000 RPM i 10 minutter. Overfør de supernatante friske forhåndsmerkede 2 ml rørene tilsett 200 mikroliter konsentrert saltsyre til supernatanten. Bland dem med mild inversjon som vist her.
Inkuber dem i kjøleskapet ved 4 grader celsius over natten. Etter inkubasjon sentrifuge ved 15,000 RPM i 10 minutter. Kast supernatanten.
Tilsett 1 ml natriumhydroksid. Virvel og inkuber i shakeren ved romtemperatur i 10 til 15 minutter. Bruk spektrofotometer for å samle absorbansavlesningene 280 nanometer, Ta 2 mikroliter natriumhydroksid som blankt siden ligninutfeltt er oppløst i natriumhydroksid.
Gjør feltet tomt til null. På samme måte gjentar du for prøvene. Bruk to mikroliter av hver prøve for å samle absorbansavlesningene i laboratoriets bærbare PC.
Ta tre avlesninger for hver prøve for tre tekniske replikeringer. I den første kolonnen har vi utvalgsnummeret. I den andre kolonnen har vi biologiske kopier der R1, R2, R3 representerer tre biologiske replikeringer av en eksperimentell linje.
I den tredje kolonnen gjennomsnittet vi absorbansavlesningene oppnådd ved 280 nanometer. Vi beregnet lignininnholdet i den fjerde kolonnen ved hjelp av formelen y=mx-c der x er den gjennomsnittlige OD.m og c-verdiene er tegnet inn fra regresjonslinjen i standardkurven som er utarbeidet. Femte kolonne er vekten etter metanol og vannvask.
Så dette er måten som brukes til estimering av lignininnhold i mg. Så vi deler verdien oppnådd i den fjerde kolonnen med femte kolonne for å få verdien per mg lignininnhold i den sjette kolonnen. Og denne verdien multipliseres med 1000 for å oppnå per gram celleveggvekt.
Og innholdet i prosent lignin beregnes ved å dele denne verdien med 1000 og multiplisere med 100. Til slutt oppnår vi den gjennomsnittlige lignin ved å beregne gjennomsnittet av lignin av tre biologiske replikeringer av hver eksperimentelle linje som vil bli sammenlignet med gjennomsnittet av en annen eksperimentell linje i form av en stolpegraf for å forstå forskjellene i lignininnholdet. Vi kan også bruke student t-test for å teste deres betydningsnivå.
I kolonne A har vi kommersiell bambus lignin, og deretter vekten av bambus lignin som ble tatt før TGA og deres respektive absorbansavlesninger på 280 nanometer. Disse verdiene i tabell A ble brukt til å tegne inn en spredt graf i kolonne B, noe som gir oss regresjonslinjen med m- og c-verdier. I C sammenlignet vi verdiene oppnådd ved hjelp av standardkurven, og den industrielle bambus lignin eksperimentelle linje en og to ble sammenlignet i form av en stolpegraf, og resultatet er at de viser forskjell mellom hverandre.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
