Environment
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Een methode om wetlandwortels en rhizosfeer te behouden voor elementaire beeldvorming
Chapters
Summary February 15th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
We beschrijven een protocol om intacte wortels en de omliggende rhizosfeergrond uit wetlandomgevingen te bemonsteren, te behouden en te doorsnijden met rijst(Oryza sativa L.) als modelsoort. Eenmaal bewaard, kan het monster worden geanalyseerd met behulp van elementaire beeldvormingstechnieken, zoals synchrotron x-ray fluorescentie (XRF) chemische speciatie beeldvorming.
Transcript
Deze methode biedt onderzoekers een nieuwe manier om waterplantenwortels, de omringende rhizosfeer en bulkgrond voor te bereiden op elementaire beeldvormingstechnieken. Het belangrijkste voordeel van deze methode is dat het relatief snel en betaalbaar is, terwijl het ook de distributie en speciatie van elementen van belang nauwkeurig behoudt. Deze techniek kan worden gebruikt om vragen te beantwoorden over veel elementen en plantensystemen, van nutriënten in landbouwsystemen tot het lot en transport van verontreinigingen in fettermiatiesystemen.
Zorg ervoor dat u snel werkt, terwijl u ook rekening houdt met het gewenste gebied of de gebieden van het wortelstelsel voor bemonstering. En neem meerdere monsters per wortelstelsel. Om de slam-vriesapparatuur voor te bereiden op een experiment, plaatst u twee, vijf bij vijf bij 15 centimeter koperblokken horizontaal in een schone koeler die vloeibare stikstof kan vasthouden.
En met de juiste PBM giet je voldoende vloeibare stikstof in de koeler om de blokken onder te dompelen. Zodra het borrelen afneemt, plaatst u één afstandsbalk op elk uiteinde van één koperen blok. Vervolgens, met behulp van tangen en cryogene handschoenen, zet de andere koperen blog aan het einde om het ophalen gemakkelijker te maken wanneer het monster op zijn plaats is.
Om het monster te verzamelen, gebruikt u een potplant of gebruikt u een schop om de gewenste plant en rhizosfeer uit de natte grond te extraheren, waarbij u ervoor zorgt dat het gegraven gat veel groter is dan het gewenste wortelvolume. Gebruik een stalen mes om overtollige grond weg te snijden en zorg ervoor dat de grond binnen het gewenste gebied niet wordt verstoord. Wanneer de gewenste gebieden reiken, snijdt u een wortelkubus van ongeveer drie bij drie bij twee centimeter en plaatst u de kubus onmiddellijk tussen de twee afstandhouders op het horizontale koperen blok.
Voor een slam bevriezing van het monster, gebruikte de cryogene handschoenen om het verticale koperen blok ongeveer vijf minuten op de afstandhouders te plaatsen. Wanneer de borrelende bodems het slam bevroren rhizosfeerkubusmonster overbrengen in een stuk voorgelabeld aluminiumfolievierkant. Om de grondblokjes in te vriezen, wanneer de vriesdroger de juiste vacuümdruk en temperatuur heeft bereikt, plaatst u een bevroren rhizosfeerkubusmonster voor schone en zuur gewassen buis van 50 milliliter of rechtstreeks in de vriesdroger en gebruikt u een schoon wegwerpdoekje om te voorkomen dat stof in de vacuümpomp komt.
Plaats de monsters ten minste enkele dagen in het vriesdrogervat tot ze droog zijn. Wanneer de weefsels zijn gevriesdroogd, gebruikt u een stalen mes om grondblokjes op een geschikte grootte voor de analyse te drogen voordat u de kubussen in gelabelde vormen in een vacuümdesiccator plaatst. Na het bereiden van epoxy volgens de instructies van de fabrikant, gebruikt u een druppelaar om langzaam epoxy toe te voegen aan de vorm aan één kant van de grond, totdat de epoxy het monster volledig bedekt.
De grond wordt donkerder naarmate de epoxy de grond nat maakt. Zodra de vormen zijn gevuld met epoxy, sluit u de desiccator en schakelt u het vacuüm in. Controleer het niveau van een epoxy elke 30 tot 90 minuten gedurende de eerste 1 tot 4 uur en voeg indien nodig extra epoxy toe.
Zodra de epoxy is uitgehard, verwijdert u het monster. Gebruik na het insluiten een diamantblad precisie natte zaag om het monster te zagen. Snijd het monster in een andere richting als er bij de vorige snede geen wortels zijn verkregen.
Schuur na het trimmen de gesneden kant van elk monster handmatig met progressief fijner schuurpapier gedurende 30 seconden per korrelgrootte. In deze figuur kunnen verschillende worteldiameters in de bodemmatrix worden waargenomen als dwarsdoorsneden. De wortels kunnen verschillende kwaliteitsniveaus vertonen.
In deze afbeelding kan bijvoorbeeld een goed bewaarde wortel, een wortel vervormd door het vriesdroogproces en een wortel die tijdens het dunne doorsnedeproces is uitgetrokken, worden waargenomen. Analyse van deze wortel dwarsdoorsnede met een laterale wortel in longitudinale sectie door synchrotron x-ray fluorescentie beeldvorming zoals aangetoond maakt de detectie van ijzer, mangaan en arseen mogelijk. De aanwezigheid van ijzer in de grond en rond de wortel in de ijzerplaquette is ook zichtbaar in de lichtmicrograafbeelden.
Mangaan is uniek aanwezig in de cortex van de laterale wortel, maar lokaliseert ook met ijzer in sommige gebieden binnen de ijzerplaque als een groenblauwe tint. Arseen wordt meestal gevonden in de vasculatuur van de laterale wortel die samensmelt in de vasculatuur van de primaire wortel. Chemische speciatie beeldvorming onthult een variabiliteit in de lokalisatie van de arseensoort.
Zoals waargenomen in deze driekleurige plot, zijn arsenite en arsenite glutathion nauw verbonden in de vasculatuur, terwijl arseen voornamelijk lokaliseert binnen de buitenkant van de wortel, geassocieerd met de ijzerplaque. Bepaal voorafgaand aan de monsterverzameling het gewenste deel van het wortelstelsel voor elementaire beeldvorming. Dit bepaalt de locatierichting van de verwijderde hoofdsleutel.
Volgens dit protocol kunnen monsters op micronschaal of grover worden afgebeeld met behulp van verschillende technieken, afhankelijk van de specifieke onderzoeksvragen, elementen van het belang of beschikbare instrumentatie.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
