Gaz Kromatografisi-Kütle Spektrometresi ile Birleştirilmiş Headspace Katı Faz Mikroextraction Kullanarak Frenk Üzümü Meyvesinde Uçucu Bileşiklerin Profillemesi

Meyve aromasının iyileştirilmesi, üreme programlarında ana hedeflerden biridir. Bunun için meyvelerdeki uçucu bileşenleri ölçmemizi sağlayan güvenilir bir tekniğe ihtiyacımız var. Bu teknik hızlı ve yarı otomatiktir ve günde 22 numuneye kadar ölçüm yapma olanağı sağlar.

Ek olarak, nispeten ucuzdur ve minimum numune işleme gerektirir. Bu yöntem, ekonomik olarak önemli meyve bitkileri gibi tüm meyve türleri için kolayca uygulanabilir. Ek olarak, tespit edilen bileşiğin kütüphane boyutu kolayca artırılabilir.

Başlamak için, wade donmuş numuneyi içeren beş mililitrelik bir tüpe bir mililitre sodyum klorür çözeltisi ekleyin. Numune tamamen çözülene ve homojenize olana kadar tüpü sallayın. Daha sonra oda sıcaklığında beş dakika boyunca 5.000 kez g’da santrifüjleyin.

1.000 mikroliter pipet ucunun ucunu kesin ve kafa boşluğu dosyası içeren sodyum klorüre süpernatant aktarmak için kullanın. Kafa boşluğu dosyası içeren her örneğe beş mikrolitre dahili standart ekleyin. Kapalı kafa boşluğu dosyasını, otomatik HS-SPME/GC-MS çalışması için oda sıcaklığında bir GC-MS otomatik örnekleyiciye yerleştirin ve biyolojik çoğaltmaların otomatik örnekleyicide art arda konumlara yer olmadığından emin olun.

Kafa boşluğu dosyalarını 52 santigrat derecede 10 dakika boyunca 17 kez ajitasyonla önceden kuluçkaya yatırın G.Fiberi kafa boşluğuna maruz bırakmak ve VOC ekstraksiyonu gerçekleştirmek için şişeye bir SPME cihazı yerleştirin 17 kez ajitasyon ile 50 santigrat derecede 30 dakika G.Uçucu desorpsiyon için bölünmez modda 250 santigrat derecede bir dakika boyunca enjeksiyon portuna lifi tanıyın. Daha sonra bir SPME temizleme istasyonundaki elyafı 250 santigrat derecede beş dakika azotla temizleyin. VoC’leri, el yazmasında açıklandığı gibi bir iyon kapanı kütle spektrometresine bağlı bir gaz kromatografı ile analiz edin.

Ham GC-MS profil dosyalarını açın. Bileşikleri tanımlamak için saklama sürelerini, kütle spektrumlarını ve Kovats doğrusal tutma indekslerini özgün standartlardan elde edilen bekletme indeksleriyle karşılaştırın. Her ticari standart için, iyonları şarj etmek için en bol kütlede saklama süresine açıklama ekleme.

Ardından her VOC için belirli bir M by Z iyonunu seçin. Toplu etki düzeltmesi için, her numunenin VOC tepe alanını, aynı çalıştırmada analiz edilen kontrol örneğindeki ilgili tepe alanına normalleştirin.

HS-SPME/GC-MS tarafından elde edilen olgun bir frenk üzümü meyve uçucu toplam iyon kromatogram profili, meyve meyve türlerinin profilini çıkarmak için geliştirilen bir kütüphaneye dayanarak esterlere, aldehitlere, alkollere, ketonlara, terpenlere ve furanlara ait 63 VOC tanımladı. Gözlenen en bol zirvelerden bazıları linalool ve terpineol olmak üzere iki monoterpene ve 2-Hexenal ve 3-Hexenal olmak üzere iki C6 bileşiğine karşılık gelir. Saf ticari standartların spektrumları ile karşılaştırılmasında siyah akım profillerinden elde edilen kütle spektrası 2-Hexenal ve terpineol için gösterilmiştir.

Dört farklı siyah akım kültünün VOC profillerinden PCA, PC1’in örnekleri konumlarına göre ayırması nedeniyle ortamın uçucu içeriği güçlü bir şekilde etkilediğini gösterdi. Ben Tirran kalan kültivarlardan açıkça ayrıldığı için etkili genotip PC2 ile gözlemlenebilir. Değerlendirilen dört siyah akım kültivarında linalool ve 2-Hexenal’in göreceli içeriği, Linalool içeriğinin Polonya’da genellikle İskoçya’dan daha yüksek olduğunu doğrularken, 2-Hexenal tam tersi bir eğilim göstermiştir.

Linalool oranı en yüksek Ben Tirran kültivyarlarında, 2-Hexenal’de en yüksek Ben Tron cultivars’taydı. Uygun bir uçucu ekstraksiyon sağlamak için donmuş malzeme ile başlamak, ince bir toz haline getirmek önemlidir. Çıkarıldıktan sonra, numune en kısa sürede otomatik örnekleyiciye yerleştirilmelidir.

Bu yöntem, diğer önemli metabolikleri tanımlamak, gıda tadı veya besin değeri için, gelişmiş organoleptik özelliğe sahip çeşitleri yetiştirmek için diğer metabolik platformlarla birleştirilebilir.