A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
En generaliserad metod för bestämning av frilöslig fenolsyrasammansättning och antioxidantkapacitet hos spannmål och baljväxter
Chapters
Summary June 10th, 2022
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Fenolsyror är viktiga fytokemikalier som finns i fullkorn. De har bioaktiva egenskaper som antioxidantskyddande funktioner. Detta arbete syftade till att rapportera om en generaliserad metod för HPLC-identifiering, uppskattning av totalt fenolinnehåll och bestämning av antioxidantkapaciteten hos fenolsyror i spannmål och baljväxter.
Transcript
En generaliserad metod för bestämning av frilöslig fenolsyrasammansättning och antioxidantkapacitet hos spannmål och baljväxter. Fullkorn, inklusive spannmål och baljväxter, utgör en väsentlig del av människans kost. Deras näringsmässiga relevans för människor har länge erkänts.
Men på senare tid har deras antioxidantskyddande hälsofördelar rapporterats. Fenolsyror som finns i de yttre kornskikten av spannmål och fröbeläggningen av baljväxter bidrar till antioxidantegenskaperna hos fullkorn. De rensar fria radikaler som orsakar oxidativ skada på biomolekyler.
De två klasserna av fenolsyror som finns i fullkorn är hydroxibensoe syror och hydroxikinnaminsyror. Denna studie ger en enkel metod för att extrahera fullkornsfenolsyror och bestämma deras in vitro-antioxidantkapacitet. Använd fem fullkornsprover för denna studie, durumvete, gul majs, svartöga cowpeaböna, sojabönor och röd njurböna.
Väg exakt 100 milligram av fullkornsmjölprovet direkt i ett bärnstensfärgat mikrocentrifugrör med två milliliter kapacitet. Rörets mörka färg hjälper till att förhindra exponering av blandningen för ljus. Tillsätt en milliliter 80% vattenhaltig metanol till vart och ett av rören som innehåller exempel.
Vortex kort för att blanda metanollösningen och provet. Sonicate proverna i 60 minuter för att extrahera de fria lösliga fenolföreningarna. Sätt ett lock över proverna under ultraljudsbehandling för extra skydd mot ljus.
Efter ultraljudsbehandling, centrifugera blandningarna vid 20 000 gånger G i fem minuter för att sedimentera de fasta resterna, lämnar supernatanten på toppen. Fria fenolföreningar kommer att vara närvarande i supernatanten efter centrifugering. Supernatanten måste filtreras innan den injiceras i HPLC-instrumentet.
För att filtrera supernatanten, ta bort kolven på en 3 ml spruta och fäst ett sprutfilter. Filtret ska ha en porstorlek som inte är större än 0,22 mikrometer. Pipett ca 0,4 ml av supernatanten i toppen av sprutan.
Sätt tillbaka kolven och tryck vätskan genom filtret i en HPLC-injektionsflaska som innehåller en injektionsflaska. När instrumentet har ställts in för att köra den metod som beskrivs i manuskriptet för HPLC-analys, ladda flaskorna i karusellen för att motsvara provlistan. Få HPLC-kromatogram vid 320 nanometer och 280 nanometer, som visar distinkta toppar som representerar olika fenolföreningar.
Använd lämpliga standardkurvor, kvantifiera hydroxikinnaminsyror vid 320 nanometer eftersom de har en maximal absorbans vid denna våglängd. Med samma princip kvantifiera hydroxibensoesyra vid 280 nanometer. Använd Trolox, en vattenlöslig analog av vitamin E, som standard för att uppskatta in vitro-antioxidantkapaciteten hos fullkornsextrakten.
Väg exakt ett milligram Trolox i ett Falcon-rör. Lös upp med fyra milliliter 50% vattenhaltig metanol för att bereda en stamlösning av en millimol per liter, vilket är detsamma som 1000 mikromol per liter. Förbered sex koncentrationer av Trolox som är 50, 100, 200, 400, 600 och 800 mikromol per liter för att plotta standardkurvor för uppskattning av DPPH-radikalrensningskapacitet och Trolox ekvivalenta antioxidantkapacitet, TEAC.
På samma sätt bereda 6,25, 12,5, 25 och 50 mikromol per liter Trolox-koncentrationer för uppskattning av syreradikalabsorberingskapacitet, ORAC. Fyll på den totala volymen av varje koncentration till 500 mikroliter, som visas i tabell ett. Späd provextrakten med metanol före analys.
Här späddes gula majs- och cowpea-extrakt två gånger. Vete- och njurbönextrakten späddes fem gånger, medan sojabönextraktet späddes 10 gånger med metanol. Väg 8,23 milligram ABTS i ett rent, två milliliter kapacitet, gult mikrocentrifugrör.
Väg sedan 1,62 milligram kaliumpersulfat i ett rent, två milliliter kapacitet, gult mikrocentrifugrör. Lös upp var och en av de vägda kemikalierna i en milliliter destillerat vatten genom virvel. Detta resulterar i en 16 millimolär ABTS-lösning och en sex millimolär kaliumpersulfatlösning.
Förbered ABTS-stamlösningen genom att blanda ABTS- och kaliumpersulfatlösningarna i lika stora volymer. Lösningen ändras omedelbart till en mörk färg. Låt denna blandning inkubera i mörker i 12 till 16 timmar.
Späd ABTS-stamlösningen 30 gånger med 200 millimolär fosfatbuffrad saltlösning för att bilda ABTS-arbetslösningen. För att göra detta, tillsätt 58 ml 200 millimolär PBS till två milliliter av ABTS-arbetslösningen. Arbetslösningen kommer att innehålla 0,27 millimolär ABTS och 0,1 millimolär kaliumpersulfat.
För analysen, placera 10 mikroliter av varje utspätt extrakt i en 96 brunn mikroplatta. Tillsätt 190 mikroliter ABTS-arbetslösning till varje brunn och inkubera i 60 minuter. Mät absorbansen hos reaktionsblandningarna vid 750 nanometer i en mikroplattläsare.
Använd Trolox-standarderna i koncentrationer från 100 till 800 mikromol per liter för att rita en kalibreringskurva. DPPH-antioxidantanalysen kräver en radikalgenererande förening, DPPH. Väg ut 1,2 milligram DPPH i ett tomt centrifugrör med 15 ml kapacitet.
Lös upp DPPH i metanol för att bereda en 60 mikromolär lösning. DPPH-analysen testar förmågan hos provextrakten att rensa fria radikaler som produceras av DPPH. Tillsätt fem mikroliter provextrakt i mikroplattbrunnarna.
Tillsätt sedan 195 mikroliter 60 mikromolär DPPH-metanollösning och inkubera i 60 minuter. Mät absorbansen vid 515 nanometer. Använd Trolox-standarderna för att rita en kalibreringskurva.
Figur ett visar strukturen av hydroxibensoesyra som finns i fullkornen. I denna aktuella studie var vanillinsyra den enda hydroxibensoesyran som identifierades. Figur två visar strukturen hos hydroxikinnaminsyror som finns i fullkorn.
I den aktuella studien identifierades p-kumarinsyra, koffeinsyra och ferulinsyror i proverna. Tabell två visar de fenolsyror som identifierats i proverna. Som tidigare nämnts var vanillinsyra den enda hydroxibensoesyra som identifierades i proverna.
Det identifierades endast i cowpea-extraktet. Hydroxikinnaminsyran koffeinsyra identifierades endast i njurböna, medan p-kumarinsyra identifierades i gul majs, cowpea och sojabönor. Ferulinsyra identifierades i alla prover och var den dominerande fenolsyran i proverna.
Den totala koncentrationen av fenolsyrorna i ordning från störst till minst var i ordningen sojabönor, cowpea, gul majs och njurböna eller motsvarande, följt av vete. Tabell tre visade provernas totala fenolhalt och antioxidantkapacitet. Antioxidantkapaciteten omfattade DPPH-radikal rensningskapacitet, TEAC, ORAC och total antioxidantkapacitet hos proverna.
Den totala antioxidantkapaciteten är summan av DPPH-, TEAC- och ORAC-värdena. I likhet med tabell två hade sojabönor den högsta totala antioxidantkapaciteten. Men istället för cowpea var det snarare njurböna som hade den näst högsta totala antioxidantkapaciteten, även om cowpea hade den näst högsta totala fenolsyrahalten.
Denna anomali är relaterad till strukturerna hos de enskilda fenolsyrorna och den möjliga antagonistiska effekten av hydroxibensoesyran vanillinsyra på antioxidanteffekterna av hydroxikinnaminsyrorna i cowpea. Denna studie drog slutsatsen att fullkorn skiljer sig åt i deras fenolsyrakompositioner. Bland de studerade fullkornen har sojabönor den högsta totala mängden fenolsyror och på motsvarande sätt den högsta antioxidantkapaciteten.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
