Neuroscience
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Modelagem de AVC em Camundongos: Lesões Corticais Focais por Fototrombose
Chapters
Summary May 6th, 2021
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Descrito aqui é o modelo de derrame fototrombótico, onde um derrame é produzido através do crânio intacto induzindo a oclusão microvascular permanente usando iluminação laser após a administração de um corante fotossensível.
Transcript
A abordagem do modelo de derrame fototrombose pode ser adequada para estudos celulares e moleculares de plasticidade cortical devido às bordas limitadas e flexibilidade para induzir lesões em diferentes áreas do córtex. Três vantagens fundamentais distinguem o modelo de fototrombose de outros modelos de AVC, a possibilidade de direcionar a lesão para a região desejada, sua alta reprodutibilidade e baixa mortalidade. A dosagem adequada de bengala rosa é fundamental para o sucesso e para a estabilidade do modelo.
Os resultados dependem de especificações técnicas como potência a laser, tempo de aplicação cruzada e xelim óptico do córtex não afetado. Comece dissolvendo a bengala rosa em solução salina de 0,9% para uma concentração final de 10 miligramas por mililitro. Esterilize meticulosamente todos os instrumentos usando um esterilizador de chumbo quente e desinfete todas as superfícies antes e depois da cirurgia com um spray desinfetante microbiano.
Prepare uma seringa cheia de solução salina para manter a área de operação hidratada e preparar o gás anestesia. Meça o peso corporal do camundongo para ajustar a dose de bengala rosa a ser injetada. Defina a almofada de aquecimento controlada por feedback associada para manter a temperatura corporal do mouse.
Uma vez que o mouse esteja completamente anestesiado e fixado no quadro estereotático, insira suavemente a sonda retal para monitorar a temperatura corporal do mouse durante todo o procedimento cirúrgico. Aplique a pomada de olho de pantenol Dex em ambos os olhos e limpe a pele e a pele circundante com agente desinfetante. Use uma tesoura para fazer uma incisão longitudinal de dois a dois centímetros e meio e retrair-se para expor o crânio.
Use algodão para remover suavemente o periosteum e localizar as suturas coronais. Use óculos de proteção ao ligar o laser de 561 nanômetros e marque o mais três milímetros para a esquerda, em seguida, desligue o laser e gancho o adesivo com um buraco de quatro milímetros de diâmetro nas coordenadas marcadas. Injete o rato intraparietal com bengala rosa.
Coloque o raio laser a uma distância de quatro a cinco centímetros do crânio. Ligue o laser e ilumine o crânio por 20 minutos. Reidratar o crânio aplicando duas gotas de soro fisiológico de 0,9%.
Depois de suturar a ferida, coloque o rato em uma câmara de recuperação a 37 graus Celsius para se recuperar da anestesia. Depois de uma hora, coloque o rato de volta na gaiola em uma sala controlada pela temperatura. A mancha violeta cristalina para seções cerebrais coronais em série foram usadas para a análise de entrada de volume infarto após 24 horas da indução do derrame.
A variabilidade deste modelo de avc foi baixa, e o volume médio de infarto foi de 29,3 milímetros cúbicos, representando 23% do hemisfério cerebral. A lesão da fototrombose causou um prejuízo motor sensorial moderado e de longo prazo indicado pelo escore neurocompensado composto. Os animais de AVC tiveram uma mudança significativa no escore neurológico 24 horas após a cirurgia.
Embora as diferenças persistisse, os ratos de derrame melhoraram com o tempo. Nos camundongos submetidos à bengala rosa mais iluminação, o peso corporal e a temperatura corporal diminuíram 24 horas após a cirurgia. No entanto, três dias após a cirurgia, observou-se recuperação.
Mudanças isquêmicas foram confirmadas por meio de imagens a laser. Os resultados indicaram que a luz de bengala rosa ou laser por si só não produziu uma lesão, enquanto a aplicação simultânea de ambos gerou uma área hipoperfusada redonda cercada pela zona oligomerica estreita. A coloração do cristal e do túnel para a avaliação do volume de infarto 24 horas após a cirurgia não revelou danos teciduais nas cirurgias de luz de rosa ou iluminação a laser.
Por outro lado, a luz de bengala rosa mais laser gerou uma lesão bem demarcada. É importante medir o peso corporal do animal para ajustar a injeção de bengala rosa. A condição correta dos trocadores de legistas é importante para induzir uma lesão consistente entre os animais.
Uma vez que este protocolo deixa o crânio intacto e pode até mesmo ser realizado através de janelas cranianas, ele pode ser combinado com amplo campo ou imagem in vivo multi fóton.
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