Journal
/
/
Farelerde Modelleme İnme: Fototomboz ile Fokal Kortikal Lezyonlar
JoVE Journal
Neuroscience
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Neuroscience
Modeling Stroke in Mice: Focal Cortical Lesions by Photothrombosis

Farelerde Modelleme İnme: Fototomboz ile Fokal Kortikal Lezyonlar

5,540 Views

06:07 min

May 06, 2021

DOI:

06:07 min
May 06, 2021

32 Views
, ,

Transcript

Automatically generated

Fotorofoz inme modeli yaklaşımı, korteksin farklı bölgelerinde yaralanmaya neden olacak sınırlı sınırlar ve esneklik nedeniyle kortikal plastisitenin hücresel ve moleküler çalışmaları için uygun olabilir. Fototomboz modelini diğer inme modellerinden ayıran üç prensip avantajı, lezyonu istenen bölgeye yönlendirme imkanı, yüksek tekrarlanabilirlik ve düşük mortalitedir. Uygun gül bengal dosing başarı ve modelin istikrarı için kritik öneme sahiptir.

Sonuçlar lazer gücü, çapraz uygulama zamanlaması ve etkilenmeyen korteksin optik şilini gibi teknik özelliklere bağlıdır. Mililitre başına 10 miligramlık son konsantrasyon için gül bengalini% 0.9 tuzlu çözeltide eriterek başlayın. Sıcak kurşun sterilizatör kullanarak tüm aletleri titizlikle sterilize edin ve ameliyat öncesi ve sonrası tüm yüzeyleri mikrobiyal dezenfektan spreyi ile dezenfekte edin.

Operasyon bölgesini nemli tutmak ve anestezi gazını hazırlamak için tuzlu su çözeltisi ile dolu bir şırınna hazırlayın. Enjekte edilecek gül bengal dozunu ayarlamak için farenin vücut ağırlığını ölçün. Fare gövdesi sıcaklığını korumak için ilişkili geri bildirim kontrollü ısıtma yastığını ayarlayın.

Fare tamamen uyuşturulup stereotaktik çerçeveye sabitlendikten sonra, cerrahi işlem boyunca farenin vücut sıcaklığını izlemek için rektal probu hafifçe takın. Dex panthenol göz merhemini her iki göze de uygulayın ve cildi ve çevresindeki kürkü dezenfekte edici madde ile temizleyin. Tek bir iki ila iki buçuk santimetre boyuna kesi yapmak için makas kullanın ve kafatasını ortaya çıkarmak için geri çekin.

Periosteumu nazikçe çıkarmak ve koronal dikişleri bulmak için pamuk kullanın. 561 nanometre lazeri açarken koruyucu gözlük takın ve artı üç milimetreyi sola işaretleyin, ardından lazeri kapatın ve çıkartmayı işaretli koordinatlarda dört milimetre çapında delik ile bağlayın. Fare intraparietal gül bengal ile enjekte edin.

Lazer ışınını kafatasından 4 ila 5 santimetre uzağa yerleştirin. Lazeri aç ve kafatasını 20 dakika aydınlat. Kafatasını% 0.9 salin iki damla uygulayarak yeniden sulandırmak.

Yarayı diktikten sonra, anesteziden kurtulmak için fareyi 37 santigrat derecede bir iyileşme odasına yerleştirin. Bir saat sonra, fareyi kafese sıcaklık kontrollü bir odaya geri yerleştirin. Seri koronal beyin kesitlerine kristal mor leke inme indüksiyonu 24 saat sonra enfarktüs hacim giriş analizi için kullanılmıştır.

Bu inme modelinin değişkenliği düşüktü ve ortalama enfarktüs hacmi 29,3 milimetreküptü ve tek beyin yarımküresinin% 23’ünü temsil ediyordu. Fototromboz lezyonu kompozit nöro skorla belirtilen orta ve uzun süreli duyusal motor bozulmaya neden oldu. İnme hayvanları ameliyattan 24 saat sonra nöro skorda önemli bir değişiklik yaşadı.

Farklılıklar devam etse de, inme fareleri zamanla gelişti. Gül bengal artı aydınlatmaya maruz kalan farelerde, ameliyattan 24 saat sonra vücut ağırlığı ve vücut ısısı düştü. Ancak ameliyattan sonraki üç gün içinde iyileşme gözlendi.

Iskemik değişiklikler lazer görüntüleme kullanılarak doğrulandı. Sonuçlar, gül bengal veya lazer aydınlatmanın tek başına bir lezyon oluşturmadığını, her ikisinin de eşzamanlı uygulamasının dar oliyometrik bölge ile çevrili yuvarlak bir hipoperfused alan oluşturduğunu gösterdi. Ameliyattan 24 saat sonra enfarktüs hacminin değerlendirilmesi için kristal mor ve tünel lekeleme, gül bengal veya lazer aydınlatma ameliyatlarında doku hasarı olmadığını ortaya koydu.

Öte yandan, gül bengal artı lazer aydınlatma iyi çizilmiş bir lezyon oluşturdu. Gül bengal enjeksiyonu ayarlamak için hayvanın vücut ağırlığını ölçmek önemlidir. Adli tıp switcherlerinin doğru durumu, hayvanlar arasında tutarlı bir lezyona neden olmak için önemlidir.

Bu protokol kafatasını sağlam bıraktığından ve hatta kranial pencerelerden gerçekleştirilebildiğinden, geniş alan veya çoklu foton in vivo görüntüleme ile birleştirilebilir.

Summary

Automatically generated

Burada açıklanan fototrombotik inme modeli, bir inmenin, ışığa duyarlı bir boyanın kullanılmasından sonra lazer aydınlatma kullanılarak kalıcı mikrovasküler tıkanıklık indüklenerek sağlam kafatasından üretildiği yerdir.

Read Article