Handhabungstechniken zur Stressreduzierung bei Mäusen

Mein Name ist Dr.Thomas Prevot. Ich bin Wissenschaftler am Center for Addiction and Mental Health (CAMH) und Assistenzprofessor an der University of Toronto in der Abteilung für Psychiatrie. Meine Gruppe hat ein besonderes Interesse daran, die Angst und Reaktivität von Mäusen zu reduzieren, um die Datenvariabilität zu reduzieren und das Wohlergehen der Tiere zu verbessern.

Mäuse haben sich in der Grundlagenforschung und präklinischen Forschung als unschätzbare Vermögenswerte erwiesen, jedoch kontrollieren nur sehr wenige Labore auf der ganzen Welt die Grundangst und die Reaktivität ihrer Labortiere, was die Replizierbarkeit von Daten zwischen Laboren erschwert. Ein wichtiger Faktor für die Grundangst sind unkontrollierte Umweltvariablen wie Wohnbedingungen, Umweltanreicherung und Stressexposition. Während die Standardisierung der Haltungsbedingungen und die Anreicherung dazu beigetragen haben, dieses Problem zu verbessern, ist die Exposition gegenüber Stress während der Interaktion mit Experimentatoren bei Mäusen immer noch weitgehend unbehandelt.

Tail Handling, der Prozess des Hebens der Maus am Schwanz, ist immer noch die weit verbreitete Maus-Handhabungstechnik, obwohl sie besonders stressig ist. Es haben sich jedoch Alternativen zum Heckhandling ergeben, einschließlich Tunnelhandling und Becherhandling. Die Einführung dieser Techniken war langsam.

Hier beschreiben wir eine neuartige Technik, ähnlich dem Cup-Handling, das mit nur drei Tagen Gewöhnung oder 3D-Handling umgesetzt werden kann. Indem wir den Grad und die Komplexität der Interaktion schrittweise erhöhen und als Reaktion auf die Reaktivität der Maus auf bestimmte Handhabungsmeilensteine voranschreiten, können wir Stress reduzieren und die routinemäßige Handhabung erleichtern. Wir bewerten die Wirksamkeit des 3D-Handlings bei Mäusen in Verhaltenstests, bewerten angstähnliche Verhaltensweisen, Interaktion mit Experimentatoren und peripherem Stresshormon, Corticosteron, Spiegel und bieten einen Vergleich mit Tunnelhandhabungs- und Schwanzbehandlungstechniken.

Öffnen Sie vorsichtig den Käfig und legen Sie den Deckel auf die Seite. Führen Sie Ihre behandschuhte Hand in den Heimkäfig ein, bevor Sie versuchen, die Maus aufzuheben. Lassen Sie die Maus sich für etwa 30 Sekunden an die Anwesenheit der Hand gewöhnen.

Versuchen Sie dann, die Maus in schröpften Händen aufzunehmen. Wenn die Maus nicht leicht aufgenommen werden kann, bechern Sie beide Hände zusammen und verwenden Sie sie, um die Maus in die Ecke des Käfigs zu führen. Verwenden Sie dann beide Hände, um die Maus aufzunehmen.

Sobald die Maus aus dem Käfig entfernt wurde, halten Sie Ihre Hände so flach und offen wie möglich. Lassen Sie die Maus frei erkunden. Dies bietet eine flache Plattform, auf die die Maus treten kann, und begrenzt das Risiko des Beißens.

Halten Sie die Hand offen und flach, mit der Handfläche nach oben. Legen Sie Ihre andere Hand neben die Maus und lassen Sie die Maus sich frei von Hand zu Hand bewegen, ohne Einschränkungen. Nach einer Minute Handhabung mit flachen Händen entspannen Sie die Handfläche und bedrücken Sie die Maus leicht in Ihrem Kopf, bevor Sie die Maus sanft zwischen den Händen rollen.

Fahren Sie vier Minuten lang fort und wechseln Sie zwischen sanftem Rollen zwischen den Händen und der freien Erkundung Ihrer offenen Hände. Führen Sie in den letzten zwei Minuten einen Shelter-Test durch. Lassen Sie die Maus bis zum Rand Ihrer Hand bewegen und bringen Sie die beiden Hände zusammen.

Fassen Sie Ihre Hände sehr langsam, damit die Maus in einen von den Händen gebildeten Unterschlupf passt. Stellen Sie sicher, dass Sie eine Öffnung lassen, damit die Maus bei Bedarf entkommen kann. Versuchen Sie, die Maus fünf bis 10 Sekunden ohne Einschränkungen im Tierheim zu halten.

Wiederholen Sie den Tierheimtest in den letzten zwei Minuten drei- bis viermal. Überstürzen Sie den Prozess nicht. Wenn die Maus gestresst erscheint, indem sie in der Hand eingeschlossen ist, fahren Sie mit dem Rollen zwischen den Händen fort und 30 Sekunden lang die freie Erkundung und führen Sie dann den Tierheimtest erneut durch.

Lassen Sie die freie Erkundung in den Händen für 30 Sekunden zu und ersetzen Sie dann vorsichtig die Maus in ihrem Käfig. Reinigen Sie die Tischplatte von Kot und Urin mit 70% Ethanol oder einer geeigneten Reinigungslösung. Reinigen Sie die Handschuhe nach Bedarf von Kot und Urin, und wenn Sie in einen neuen Käfig wechseln, spülen Sie Handschuhe mit 70% Ethanol oder wechseln Sie die Handschuhe.

Bereits am zweiten Tag sollte es möglich sein, die Maus in schröpften Händen aus dem Käfig zu entfernen. Wenn die Maus reaktiv erscheint, führen Sie die flache Hand und die freie Erkundung offener Köpfe für 30 Sekunden bis zu einer Minute durch. Andernfalls fahren Sie mit dem Rollen zwischen den Händen und dem Shelter-Test fort.

Führen Sie die Rolle zwischen Händen und Schutzschritten vom ersten Tag an für zwei bis drei Minuten aus. Führen Sie jeden Schritt mehrmals aus. Wenn sich die Maus im Tierheimtest wohl zu fühlen scheint, versuchen Sie, die Maus auf Rücken und Kopf zu streicheln.

Wenn die Maus nicht versucht, vor dem Kontakt zu fliehen, fahren Sie mit dem Nasenstocher fort. Berühren Sie vorsichtig die Maus an der Spitze der Schnauze. Wenn es nicht beißt oder versucht, den Kopf zu drehen, ist dies ein gutes Zeichen der Gewöhnung.

Für den Streichel- und Nasenstochertest, überstürzen Sie den Prozess nicht. Wenn die Maus gestresst erscheint, weil sie in den Händen eingeschlossen ist, oder nicht berührt werden möchte, fahren Sie mit dem Rollen zwischen den Händen für ein paar Minuten fort und versuchen Sie es dann erneut. Beenden Sie diese Sitzung nach etwa drei Minuten Handhabung, wenn das Tier gut auf das Tierheim, Kopfstreicheln und Nasenstocher reagiert.

Und wenn das Tier bereit zu sein scheint, Ihre Hände ohne Anzeichen von Stress zu erkunden, wie Fluchtversuche, Sprung aus den Händen oder Vermeiden des Kontakts mit den Händen. Wenn die Maus weiterhin Anzeichen von Stress zeigt oder nicht gut auf den Shelter-Test oder den Nasenstocher-Test reagiert, setzen Sie die Sitzung fort, bis sie fünf Minuten erreicht, wie am ersten Tag. Ersetzen Sie die Maus in ihrem Käfig und reinigen Sie die Tischplatte und die Handschuhe.

Fahren Sie am dritten Tag mit den gleichen Schritten fort wie am zweiten Tag. Nehmen Sie die Maus in die Handfläche. Übertragen Sie die Maus zwischen den Händen.

Halten Sie die Maus vorsichtig in schröpfte Hände. Wenn die Maus gut auf diese Schritte reagiert, versuchen Sie, die Maus zu streicheln und den Nasenstochertest durchzuführen. Am dritten Tag sollte die Maus entspannt genug sein, um in der Handfläche zu sitzen, ohne sich zu bewegen, und Sie sollten in der Lage sein, diese Schritte über etwa zwei bis drei Minuten zu durchlaufen.

Ersetzen Sie die Maus in ihrem Käfig und reinigen Sie die Tischplatte und die Handschuhe. Am dritten Tag. Wenn das Tier zu Versuchszwecken wie oraler Gavage oder intraperitonealer Injektion zurückgehalten wird, können die Mäuse dem Nackenquetschtest unterzogen werden.

Fassen Sie die Maus am Nacken, zwischen Daumen und Zeigefinger und heben Sie die Maus zwei bis drei Sekunden lang fünf Zentimeter über Ihre Hand. Dies ist normalerweise eine unangenehme Position für erwachsene Mäuse, und wenn die Mäuse in der Nähe von unbeweglich bleiben, sind sie gut an die Handhabung gewöhnt und können für Injektionen leicht zurückgehalten werden. Legen Sie die Maus wieder auf Ihre flache Hand und lassen Sie sie eine Minute lang frei erkunden.

Die Tiere wurden auf ihre Bereitschaft zur freiwilligen Interaktion mit dem Experimentator und die einfache Handhabung im experimentellen Kontext getestet. In Der ersten Studie waren Mäuse, die entweder mit Röhrenhandhabung oder 3D-Handhabung behandelt wurden, weniger wahrscheinlich zu fliehen, wenn ein Experimentator versucht, eine Maus aufzunehmen. Darüber hinaus verbrachte die Studie einer Maus, die mit der 3D-Technik behandelt wurde, mehr Zeit im selben Quadranten wie die Hand des Experimentiers, was auf eine erhöhte Bereitschaft zur Interaktion mit dem Experimentator hinweist.

In Studie zwei waren Mäuse, die entweder mit Röhrenhandhabung oder 3D-Handhabung behandelt wurden, weniger wahrscheinlich zu fliehen, wenn ein Experimentator versuchte, die Maus aufzunehmen, verglichen mit Mäusen, die mit dem Schwanz hantiert wurden. In Studie zwei hatte die Handhabungstechnik jedoch keinen signifikanten Einfluss auf die Zeit, die im selben Quadranten wie die Hand des Experimentators verbracht wurde. Die Wirkung von 3D- und Tunnelhandling wurde in zwei Tests von angstähnlichen Verhaltensweisen, dem Neuheitsunterdrückungstest und dem erhöhten Plus-Labyrinth, mit dem Schwanzhandling verglichen.

In Der ersten Studie gab es im Neuheits-unterdrückten Fütterungstest einen Trend zur Verringerung der Angst bei Tunnel- und 3D-Mäusen. Im erhöhten Plus-Labyrinth gab es keinen Gesamteffekt der Handhabung. Zusammengefasst als Z-Score gab es eine signifikante Verringerung der allgemeinen Angst bei Tunnel- und 3D-behandelten Mäusen im Vergleich zu Schwanzmäusen.

In Studie zwei gab es keinen Gesamteffekt des Umgangs auf Angstmaßnahmen im Neuheitsunterdrückungstest oder im erhöhten Plus-Labyrinth. Zusammengefasst als Z-Score hatte die Handhabungstechnik keinen Gesamteffekt auf die Angst. Als physiologisches Maß für Stress sammelten wir 15 Minuten nach einer kurzen Handhabungssitzung Serum von Mäusen, die 3D-Handhabung und die Tunnelbehandlung und testeten den Corticosteronspiegel.

In Der ersten Studie gab es keinen Gesamteffekt der Handhabung. In Studie zwei reduzierte das 3D-Handling den Corticosteronspiegel im Vergleich zum Tail-Handling signifikant. Basierend auf Beobachtungen, dass Handhabungstechniken bei Mäusen von der wissenschaftlichen Gemeinschaft nicht allgemein anerkannt werden, haben wir die Verwendung einer neuartigen Handhabungstechnik beschrieben.

In beiden vorgestellten Studien reduzierte die Tunnel- und 3D-Handhabung die Fluchtversuche von Mäusen, wenn sie abgeholt wurden, was möglicherweise die routinemäßige Handhabung erleichterte. Darüber hinaus reduzierte diese Technik bei älteren männlichen Mäusen angstähnliche Verhaltensweisen und erhöhte die Interaktion mit dem Experimentator. Bei jungen Weibchen.

Diese Technik verringerte den Kortikosteronspiegel, der als Reaktion auf die Handhabung beobachtet wurde. Die Implementierung dieser Technik hat das Potenzial, die Datenvariabilität zu reduzieren, das Tierwohl zu verbessern und die routinemäßige Handhabung zu erleichtern.