Immunology and Infection
This content is Free Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Forenklet pletysmografi for hele kroppen for å karakterisere lungefunksjon under respiratorisk melioidose
Chapters
Summary February 24th, 2023
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Denne protokollen presenterer konstruksjon og bruk av et forenklet helkropps pletysmografiapparat for å overvåke bakteriell respiratorisk sykdomsprogresjon ikke-invasivt.
Transcript
Bruk av forenklet helkroppspletysmografi kan bidra til å belyse sammenhengen mellom lungefunksjon og sykdomsprogresjon hos forsøksdyr. Den største fordelen med denne teknikken er evnen til å samle respiratoriske data fra ikke-begrensede dyr. Begynn med systemoppsettet ved å koble prøvetakingskammeret til en broforsterker ved hjelp av en åtte-pinners DIN-kontakt og broforsterkeren til datainnsamlingsenheten.
Koble datainnsamlingsenheten til en strømforsyning og en datamaskin med fysiologisk dataanalyseprogramvare. Når du er tilkoblet, starter du programvaren for å kommunisere med datainnsamlingssystemet. Last ned den valgfrie spirometrimodulen i programvaren og gå til spirometri-fanen for å endre standard enhetsinnstillinger fra liter per sekund til mikroliter per sekund i innstillingsvinduet.
For kalibrering av systemet, opprett et firekanals vindu i programvaren. I kanal én, sett kildedata til 4.000 datapunkter per sekund samplingsfrekvens og ett millivoltområde. Kanal to vil være det digitale filteret til kanal én ved hjelp av et høypass, en-hertz, automatisk justeringsfilter.
Opprett kanal tre i utjevningsfanen for kanal to-data med gjennomsnittlig 100 eksempler. Og opprett kanal fire i spirometriflyten av kanal tre-data. Deretter setter du opp dataputeanalyse av kanal fire med tre kolonner.
For kolonne én går du til kanal fire data og kommentarer for å få tilgang til full kommentartekst. Deretter definerer du kolonne to og kanal fire-data og sykliske målinger for å velge gjennomsnittlig syklisk frekvens For kolonne tre- og kanal fire-data velger du sykliske målinger og gjennomsnittlig syklisk høyde. Sett bildefrekvensen til 100 til 1 nederst til høyre i diagramvisningen og lagre vinduskonfigurasjonen som en mal for fremtidige studier.
Når du er ferdig, lukker du lokket på prøvekammeret og fester en 25 mikroliter gasstett sprøyte til lokkeskottkontakten. Monter deretter sprøyten med en Chaney-adapter for å bruke dybdestoppet til Chaney-adapteren til å trekke 20 mikroliter luft inn i sprøyten. Deretter, for å nullstille plottet i programvaren, får du tilgang til oppsettfanen og velger null all inngang før du starter et opptak.
Mens du tar opp, vent til en grunnlinje stabiliserer seg, og trykk deretter raskt ned sprøytestemplet i 10 repetisjoner for å gjenskape forsøkspersonens pust med et målt pust på 20 mikroliter. Når du er ferdig, stopper du opptaket ved å høyreklikke på begynnelsen av nummerert pleth-opptak og merke identiteten til den målte prøven ved å klikke på legg til kommentar. Tilbakestill sprøyten og null inngangen, og gjenta opptaksmålingene av 20 mikroliterpulser to ganger.
Etter å ha fullført alle målingene i tre opptaksøkter, bruk datamusen til å velge en del av pustepunktet som nøyaktig representerer de kunstige 20-mikroliterpustene. Gå deretter gjennom kolonne tre-dataene for gjennomsnittlig syklisk høyde og beregne gjennomsnittlig målt pustevolum fra de tre opptakene. Åpne en hovedmal som er beskrevet tidligere.
Deretter plasserer du en bevisst 4-til-12 uke, kvinnelig, albino C57 svart 6J mus inn i prøvetakingskammeret og låser lokket. Løsne lokkeskaftet kort for å utjevne atmosfæretrykket i kammeret og stram hetten igjen. Vær oppmerksom på at motivet ikke beveger seg aktivt i prøvetakingskammeret før du nullstiller alle innganger og starter et opptak.
Merk subjektets identitet ved å høyreklikke på begynnelsen av det nummererte pleth-opptaket og klikke på legg til kommentar. Sett deretter musen tilbake til buret. Velg en del av pusteplinten som nøyaktig representerer motivet som puster.
I dataputemodulen vises data i forhåndsvisningsoverskriften som gir en midlertidig avlesning av pustefrekvensen og pustevolumet. Forhåndsvisningen av dataene kan spilles inn i datatastaturet ved hjelp av ikonet legg til i datatastaturet. Fortsett å måle parametrene for en motivmus en om gangen, og ta opp representative deler av pusteplingen til dataplaten.
Etter dataregistrering eksporterer du dataene fra dataputen til Excel og beregner minuttvolumet. Ved klinisk bruk av helkropps pletysmografi påvirker observandens egen kroppstemperatur og miljøtemperatur og fuktighet de komplekse respirasjonsberegningene. I studien kontrollerer en forenklet helkropps pletysmografi eller SWBP-tilnærming for miljøtemperatur og fuktighetsvariasjon, og det ble observert at bidraget til temperatur og fuktighet hos verten selv ikke signifikant påvirker nøyaktigheten av pustemålinger av et kalibreringsvolum på 20 mikroliter.
Effekten av inhalerte anestetika på musens pust ble undersøkt. Baseline pust før anestesi og pusten mens musen gjenoppretter fra anestesi er vist her. Behandlingen med den foretrukne bedøvelsen førte til at musene viste en langsom pustefrekvens med et stort tidevannsvolum av luft.
Etter hvert som musene kom seg etter sedasjon, økte pustefrekvensen og pustevolumet ble gradvis redusert. På samme måte økte pustefrekvensen jevnt til grunnpusten gjenopprettes til 2 til 2,5 minutter etter fjerning fra anestesi. Minuttvolumet fulgte nøye effekten av at pustefrekvensen nådde baseline minuttvolum med 2,5 minutter etter fjerning fra anestesi.
Pusteforandringene under respiratoriske melioidoseinfeksjoner ble overvåket hos vertsmusene. Pustefrekvensen og den totale inspirerte luften til musene avtok raskt i løpet av den første infeksjonsdagen og forble lav for resten av sykdomsforløpet. I motsetning til dette faller pustevolumet ikke bratt i løpet av de første 24 timene, og har i stedet en jevn nedgang over til tre-dagers sykdomsforløpet.
Disse dataene antyder at pustevolum kan gi en biometrisk avlesning av alvorlighetsgraden av luftveissykdommer hos mus. Det viktigste å huske mens du prøver denne prosedyren er å vente til musen ikke beveger seg før du begynner å ta opp. Noen ganger må du ha tålmodighet mens en nysgjerrig mus utforsker prøvetakingskammeret.
Denne teknikken vil bane vei for å utforske hvordan bakterielle mutanter utviser forskjellige effekter på vertslungefunksjonen under deres endrede sykdomsprosess, og hvordan terapeutisk inngrep kan akselerere restaureringen av normal lungefunksjon hos infiserte mus.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
