Immunology and Infection
This content is Free Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Förenklad pletysmografi i hela kroppen för att karakterisera lungfunktionen under respiratorisk melioidos
Chapters
Summary February 24th, 2023
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Detta protokoll presenterar konstruktionen och användningen av en förenklad helkroppspletysmografiapparat för att övervaka bakteriell andningssjukdomsprogression icke-invasivt.
Transcript
Användningen av förenklad helkroppspletysmografi kan hjälpa till att belysa förhållandet mellan lungfunktion och sjukdomsprogression hos försöksdjur. Den största fördelen med denna teknik är förmågan att samla andningsdata från icke-fasthållna djur. Börja med systeminställningen genom att ansluta provtagningskammaren till en bryggförstärkare med en åtta-polig DIN-kontakt och bryggförstärkaren till datainsamlingsenheten.
Anslut datainsamlingsenheten till en strömförsörjning och en dator med fysiologisk dataanalysprogramvara. När du är ansluten, starta programvaran för gränssnitt med datainsamlingssystemet. Ladda ner den valfria spirometrimodulen i programvaran och gå till fliken spirometri för att ändra standardenhetsinställningarna från liter per sekund till mikroliter per sekund i inställningsfönstret.
För kalibrering av systemet, skapa ett fyrkanalsfönster i programvaran. I kanal ett ställer du in källdata på 4 000 datapunkter per sekund samplingsfrekvens och ett millivoltintervall. Kanal två kommer att vara det digitala filtret för kanalen en med ett högpass, en-hertz, automatisk justeringsfilter.
Skapa kanal tre på utjämningsfliken för kanal två-data genom att beräkna medelvärdet av 100 exempel. Och skapa kanal fyra i spirometriflödet av kanal tre-data. Ställ sedan in datapadanalys av kanal fyra med tre kolumner.
För kolumn ett går du till kanal fyra data och kommentarer för att komma åt fullständig kommentartext. Ställ sedan in kolumn två och kanalisera fyra data och cykliska mätningar för att välja genomsnittlig cyklisk frekvens För kolumn tre och kanal fyra data, välj cykliska mätningar och genomsnittlig cyklisk höjd. Ställ in bildfrekvensen till 100 till 1 längst ned till höger på diagramdisplayen och spara fönsterkonfigurationen som en mall för framtida studier.
När du är klar stänger du provkammarlocket och fäster en 25-mikroliter gastät spruta på locket skottkontakt. Montera sedan sprutan med en Chaney-adapter för att använda Chaney-adapterns djupstopp för att dra in 20 mikroliter luft i sprutan. Därefter, för att nollställa pleth i programvaran, öppna installationsfliken och välj noll all ingång innan du startar en inspelning.
Under inspelningen väntar du på att en baslinje stabiliseras och trycker sedan snabbt ner och drar tillbaka sprutkolven i 10 repetitioner för att replikera försökspersonens andning med ett uppmätt andetag på 20 mikroliter. När du är klar stoppar du inspelningen genom att högerklicka på början av den numrerade pleth-inspelningen och märka identiteten på det uppmätta provet genom att klicka på lägg till kommentar. Återställ sprutan och nollställ ingången och upprepa inspelningsmätningarna av 20-mikroliterpulser två gånger.
Efter att ha slutfört alla mätningar i tre inspelningssessioner, använd datormusen för att välja en del av andningspleth som exakt representerar de konstgjorda 20-mikroliter andetagen. Granska sedan kolumn tre-data för genomsnittlig cyklisk höjd och beräkna den genomsnittliga uppmätta andningsvolymen från de tre inspelningarna. Öppna en huvudmall som beskrivs enligt beskrivningen ovan.
Placera sedan en medveten 4-till-12 veckors, kvinnlig, albino C57 svart 6J-mus i provtagningskammaren och lås locket. Lossa kort locket på locket för att utjämna atmosfärstrycket i kammaren och dra åt locket igen. Observera att motivet inte rör sig aktivt i provtagningskammaren innan du nollställer alla ingångar och initierar en inspelning.
Märk ämnets identitet genom att högerklicka på början av den numrerade pleth-inspelningen och klicka på lägg till kommentar. Sätt sedan tillbaka musen till buret. Välj en del av andningspleth som exakt representerar ämnets andning.
I datapadmodulen visas data i förhandsgranskningshuvudet som ger en tillfällig avläsning av andningsfrekvensen och andningsvolymen. Förhandsgranskningen av data kan spelas in i dataplattan med hjälp av ikonen lägg till i dataplattan. Fortsätt att mäta parametrarna för en motivmus en i taget och registrera representativa delar av andningspleth till dataplattan.
Efter datainspelning exporterar du datapaddata till Excel och beräknar minutvolymen. Vid klinisk användning av helkroppspletysmografi påverkar försökspersonens egen kroppstemperatur och omgivningstemperatur och fuktighet de komplexa andningsberäkningarna. I studien kontrollerar en förenklad helkroppspletysmografi eller SWBP-tillvägagångssätt för miljötemperatur- och fuktighetsvariation, och det observerades att bidraget till värdens temperatur och fuktighet inte signifikant påverkar noggrannheten i andningsmätningar av en 20-mikroliter kalibreringsvolym.
Effekten av inhalerade anestetika på andningen av möss undersöktes. Baslinjeandningen före anestesi och andningen medan musen återhämtar sig från anestesi visas här. Behandlingen med det föredragna bedövningsmedlet fick mössen att uppvisa en långsam andningsfrekvens med en stor tidvattenvolym luft.
När mössen återhämtar sig från sedering ökade andningsfrekvensen och andningsvolymen minskade gradvis. På samma sätt ökade andningsfrekvensen stadigt tills baslinjeandningen återställs till 2 till 2,5 minuter efter borttagning från anestesi. Minutvolymen följde noga effekterna av att andningsfrekvensen nådde baslinjens minutvolym med 2,5 minuter efter borttagning från anestesi.
Andningsförändringarna under respiratoriska melioidosinfektioner övervakades hos värdmössen. Mössens andningsfrekvens och totala inspirerade luft minskade snabbt under den första infektionsdagen och förblev låg under resten av sjukdomsförloppet. Däremot sjunker andningsvolymen inte brant under de första 24 timmarna och har istället en stadig minskning över till tre dagars sjukdomsförlopp.
Dessa data tyder på att andningsvolymen kan ge en biometrisk avläsning av svårighetsgraden av andningssjukdomar hos möss. Det viktigaste att komma ihåg när du försöker denna procedur är att vänta tills musen inte rör sig innan du börjar spela in. Ibland måste du ha tålamod medan en nyfiken mus utforskar provtagningskammaren.
Denna teknik kommer att bana väg för att utforska hur bakteriella mutanter uppvisar olika effekter på värdens lungfunktion under deras förändrade sjukdomsprocess, och hur terapeutisk intervention kan påskynda återställandet av normal lungfunktion hos infekterade möss.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
