このプロトコルは、ex vivo ERG、特にONバイポーラ細胞によって産生される非常に感度の高いB波で網膜機能を維持するために必要な条件を示しています。ex vivo ERGを使用すると、薬理学的物質の導入を容易にしながら、高い信号対雑音比でさまざまな種類の網膜ニューロンの機能を測定することができます。この方法は、網膜機能および疾患に対する薬理学的物質の有効性を定量化するのに特に適している。
まず、ex vivo ERG試料ホルダーをヘッドステージを介して差動アンプに接続して、多電極アレイのセットアップを変換します。アンプは、多電極アレイシステムのインターフェースボードのアナログ入力に接続する必要があります。多電極アレイ用の記録ソフトウェアを使用して、ex vivo ERGからの入力データを記録および保存します。
差動アンプのゲインを100に設定し、デジタイザの仕様に応じて10倍の電圧増幅を追加します。ローパスフィルターを100ヘルツに設定します。あるいは、パッチクランプのセットアップを変換するには、ex vivo ERG検体ホルダーをヘッドステージを介して差動アンプに接続し、差動アンプはパッチクランプアンプのヘッドステージに接続する必要があります。
パッチクランプシステムソフトウェアとデジタイザを使用して、ex vivo ERGからの入力データを記録および保存します。前に示したようにパラメータを設定します。適切な波長のLEDを顕微鏡に接続します。
検体ホルダーに少なくとも1ミリリットルの酸素化エイムズ培地を10〜20分間灌流して、光応答を安定させます。Ex vivo ERGは、マウス網膜からの光受容体およびONバイポーラ細胞光応答の記録を可能にしました。ヒトドナー網膜からの光受容体応答の記録は、核摘出の死後最大5時間の遅延と、ONバイポーラ細胞応答の20分未満の遅延で可能でした。
逆に、灌流速度を遅くすると、光受容体とONバイポーラ細胞の両方の応答の振幅が減少しましたが、A波またはB波の暗黙の時間には影響しませんでした。灌流を10分間停止した後、再灌流すると、光受容体応答が保存されたONバイポーラ細胞機能が完全に失われました。十分な灌流速度と生理学的温度は、特にex vivo ERGのONバイポーラ細胞から安定した応答を得るために重要です。
Abbas, F., Vinberg, F., Becker, S. Optimizing the Setup and Conditions for Ex Vivo Electroretinogram to Study Retina Function in Small and Large Eyes. J. Vis. Exp. (184), e62763, doi:10.3791/62763 (2022).