Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Isolering av epitelceller fra human tannsekk
Chapters
Summary November 5th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Tannsekken inneholder en epitelpopulasjon og mesenchymale celler. Epitelpopulasjonen ble valgt ut fra den heterogene tannsekkcellepopulasjonen ved å gi et tydelig kulturmedium. Epitelceller overlevde og dannet kolonier i et serumfritt medium.
Transcript
Denne protokollen viser en forbedret metode for å anskaffe humane tannepitelceller. Det er vanskelig å identifisere den aggregerte cellepelleten under prosedyrene. Vær forsiktig når du håndterer supernatant for å forhindre tap cellepopulasjoner.
Til å begynne med høste tannsekkene under kirurgisk utvinning av berørte tredje molarer. Start celleisolasjonsprosedyrer eller lagre tannsekkene ved fire grader Celsius i DPBS med 3% penicillin-streptomycin. For å vaske tannsekkene, hold tannsekken med pinsett og legg den i vaskerøret 1.
Rist den forsiktig 10 til 15 ganger. Ta den ut og legg den i rør 2. Igjen, rist den 10 til 15 ganger.
Til slutt tar du den ut og legger den i rør 3, og rist den deretter. Etter vask tre ganger, plasser tannsekken i en 60 millimeter kulturrett. Hakk vevet med vev saks til tannsekken har et pulpy eller squishy utseende.
Bruk en liten sidedel av kulturretten for å minimere vevstap. Bland en milliliter hver av kollagenase type 1 og proteaseoppløsning i et 15 milliliter konisk rør. Overfør hakket vev inn i det 15 milliliter koniske røret, rist det forsiktig og inkuber det i en time ved 37 grader Celsius.
Tilsett fem milliliter 0,05% trypsin-EDTA i røret. Rist den og inkuber i 15 minutter ved 37 grader Celsius. Forbered keratinocyttmedium som inneholder keratinocytt serumfritt medium og 10% foster bovint serum.
Tilsett tre milliliter keratinocyttmedium i et nytt konisk rør på 50 milliliter. Plasser en 40 mikrometer sil på toppen av dette røret. Deretter aspirerer du supernatanten fra røret som inneholder vevet med en 10 milliliter serologisk pipette og passerer den gjennom silen.
Overfør den oppsamlede fjæringen til et konisk rør på 15 milliliter. Sentrifuger røret og fjern supernatanten. Tilsett deretter tre milliliter keratinocytt serumfritt medium.
Sentrifuger i ytterligere tre minutter og fjern supernatanten. Plate enkeltcellepopulasjonen i en 60 millimeter kulturrett ved hjelp av keratinocytt serumfritt medium. Oppretthold kulturretten med et siste volum på fem milliliter i en fuktig atmosfære på 5% karbondioksid ved 37 grader Celsius.
Celler med epitelmorfologi dukket opp innen syv til 10 dager etter plating enkeltcellepopulasjoner. Antallet brosteinformede epitelceller varierte fra en til 10 på tidspunktet for fremveksten og cellene utvidet seg til kolonier over tid. Det mest avgjørende trinnet er å mincing tannsekken i små partikler.
Det forbedrer separasjonen av enkeltceller fra follikkelvev. Mesenchymale celler kan isoleres fra human tannsekk. Serum som inneholder kulturmiljø velger mesenchymale celler og hemmer epitelvekst fra enkeltcellepopulasjoner.
Denne protokollen gir metoden for å anskaffe de menneskelige tannepitelcellene. Dental follikkel-avledede epitelceller kan brukes til studiet av dental epitelial-mesenchymal interaksjoner.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
